粗糙链孢霉的四分子分析(课堂PPT).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,粗糙链孢霉的四分子分析,1,一、实验目的,1,、了解粗糙链孢霉的杂交方法；,2,、通过,Lys,和,Lys,杂交后代表现型的分析，了解顺序四分子的基因作图方法；,3,、加深分离和交换定律的理解，了解基因转变现象。,2,二、实验原理,粗糙链孢霉,(Neurosporocrassa),属真菌的子囊菌纲。两种不同接合型菌株的结合受一对等位基因控制，可验证分离规律。,利用粗糙孢霉,Lys,和,Lys,杂交，野生型孢子成熟较早，缺陷型子囊孢子成熟较迟的特点，观察杂交后代的表型并进行分析，可用于着丝粒作图。,3,粗糙链孢霉的生活周期,（接合型与高等动植物中性别的不同）,4,四分子分析用于验证基因分离规律,（,Lys+,）（,Lys-,）合子（,+/-,）,子囊孢子,1,：,1,分离：,4,个黑色（,+,）,4,个灰色（,-,）,5,顺序四分子分析用于着丝粒作图,目的基因与着丝粒之间发生重组,1,、着丝粒为,M1,分离,2,、目的基因的分离,M1,分离：目的基因与着丝粒之间未发生重组，产生非重组型子囊,M2,分离：目的基因与着丝粒之间发生重组，产生重组型子囊,lys C,6,交换型子囊与非交换型子囊的形成,非交换型子囊,M1,交换型子囊,M2,7,目的基因在,M1,分离，产生非重组型子囊,目的基因在,M2,分离，产生重组型子囊,+,-,+,-,+,-,-,+,-,+,-,+,-,+,-,+,8,非正常分离子囊,基因转换：一个基因在联会过程中受到等位基因的影响而发生变化。基因转换总是伴随着染色体之间的交换,M,后分离：,基因转换,产生不正常分离子囊,9,着丝粒和基因之间的重组值的计算,基因与着丝粒之间的图距为去掉的重组值,M2,分裂分离子囊数,子囊总数,1/2100%,10,三、实验用品,1,、材料：粗糙链孢霉野生型菌株，,Lys,+,。粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，,Lys,-,。,2,、药品：,琼脂、蔗糖、玉米粒、土豆、,5,次氯酸钠（,NaClO,）、,5,石碳酸。,3,、器具：显微镜、接种针、载玻片、试管、,恒温培养箱、高压灭菌锅、滤纸、小烧杯、水浴锅。,11,四、实验操作流程,1,、菌种活化：将,Lys,和,Lys,菌株分别接种在完全培养基上，,28,培养,5d,左右。,2,、杂交：将两种亲本菌株分生孢子或菌丝接种到杂交培养基上，培养,5,7d,，形成黑色子囊果。,3,、子囊果处理：在有子囊果的试管中加少量无菌水，摇动片刻，把水倒入三角瓶中，小组集中煮沸，防止孢子飞扬。,4,、显微观察：取一载玻片，加,1,2,滴,5,次氯酸钠，用接种环挑出子囊果，放在载玻片上，用另一载玻片盖上，用手指压片，压破子囊果，在低倍镜下观察。,12,五、实验结果与分析,1,、观察一定数目的子囊果，记录每个完整子囊的类型，计算,Lys,基因与着丝粒距离。,2,、记录你所观察到的基因转变现象。,思考题：,1,、用图表示第六种子囊类型的形成。,2,、,假设在基因与着丝点之间发生了双交换，你的数据和计算结果会发生怎样的偏差？,13,实验结果,子囊类型,观察数量,（,5:3,）,（,3:5,）,（,6:2,）,（,2:6,）,（,4:4,不正常）,14,15,（,粪壳菌子囊孢子颜色遗传）,0.06,0.05,0.008,5:3,6:2,不规则,4:4,正常,4:4 98.82,5:3,、,3:5,或,6:2,、,2:6,或,3:1,、,1:3,都属于不规则，,说明减数分裂的,4,个产物中，一个基因转变为另一等位基因,基因转变现象。,16,rare exceptions,有时出现如图结果,17,参考结果,18,19,六、注意事项,1,、菌种活化及杂交要注意无菌操作。,2,、赖氨酸缺陷型接种在完全培养基上生长不好，需要加适量赖氨酸。,3,、杂交后培养温度要控制在,25,；,30,以上抑制原子囊果的形成。,4,、,用过的载玻片、镊子和解剖针等物都需放入,5,的石碳酸中浸泡后取出洗净，以防止污染实验室。,20,5,、注意观察选择的时间,Lys,子囊孢子成熟较迟，当,Lys,子囊孢子已成熟呈黑色时，,Lys,子囊孢子还呈灰色，如果观察时间过早，所有的子囊孢子都未成熟，全为灰色；观察过迟，,Lys,子囊孢子也已成熟，全为黑色，就不能分清各种子囊类型。,6,、注意基因转变现象,偶尔观察到,62,、,26,、,53,、,35,或异常的,4,：,4,等分离比，是基因转变造成的。基因转变的频率一般在,1%,左右。,21,培养基的配制,马铃薯培养基（基本培养基）：,也可以代替完全培养基。将马铃薯洗净去皮，切碎，取,200g,，加水,1000ml,，煮熟，然后用纱布过滤，弃去残渣，滤下的汁加,2,琼脂，,20g,蔗糖，煮融，分装到试管中。或将马铃薯切成黄豆大小的碎块，每支试管放,3-4,粒，再加入融化好的琼脂、蔗糖。消毒后取出摆成斜面。,杂交培养基：,将玉米在水中浸软，破碎，每试管放,2-3,粒，加入少量琼脂（,0.1g,左右），再放入一小片经多次折叠的滤纸（长,3-4cm,），加上棉塞，消毒即成，不需摆斜面。,22,