发育毒性和致畸作用.pptx

,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/10,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/10,#,发育毒性和致畸作用,发育毒性和致畸作用,第1页,2025/1/1 周三,2,畸胎学（古代）,当代试验畸胎学（十九世纪）,发育毒理学（二十世纪）,第一节 概 述,发育毒性和致畸作用,第2页,2025/1/1 周三,3,Teratology(,畸胎学,),来自于希腊语,monster(,怪胎,),，即,teras(,畸胎,),。,1651,年，,William Harvey,提出发育障碍学说：畸形起因于器官或结构不完全发育,。,发育毒性和致畸作用,第3页,2025/1/1 周三,4,物理化学原因,鸡蛋,畸形小鸡：,神经管缺点、无脑畸形、脊柱裂、独眼畸形、心脏缺点等,作用时间,在决定畸形类型方面比损伤性质,更主要,。,发育毒性和致畸作用,第4页,2025/1/1 周三,5,致畸作用原因,电离辐射,化学物和药品,病毒细菌感染,吸烟酗酒,母体代谢失调,发育毒性和致畸作用,第5页,2025/1/1 周三,6,四环素牙,发育毒性和致畸作用,第6页,2025/1/1 周三,7,先天性水俣病患者,发育毒性和致畸作用,第7页,2025/1/1 周三,8,水俣病,是指人或其它动物食用了含有机,水银,污染鱼贝类，使有机水银侵入脑神经细胞而引发一个综合性疾病，是世界上最经典,公害病,之一。“水俣病”于,1953,年首先在,日本,九州,熊本县水俣镇,发生,，当初因为病因不明，故称之为水俣病。,发育毒性和致畸作用,第8页,2025/1/1 周三,9,反应停,(thalidomide),事件,孕妇理想选择？,1953,年，联邦德国一家名为,Chemie,Gruenenthal,制药企业研究人员发觉，反应停（沙立度胺）含有一定镇静安眠作用，而且 对孕妇怀孕早期妊娠呕吐疗效极佳。,1957,年,10,月,1,日该企业将反应停正式推 向市场。,发育毒性和致畸作用,第9页,2025/1/1 周三,10,当初反应停成了“,孕妇 理想选择,”，在欧 洲、亚洲、非洲和南美洲被医生大 量处方给孕妇以治疗 妊娠呕吐。,科学家们在研制反应停时，并没有料到这种药品会产生如此可怕副作用。,发育毒性和致畸作用,第10页,2025/1/1 周三,11,令人恐怖副作用,到了,1960,年，欧洲医生 们开始发觉，当地域畸形婴儿出生率显著上升。这些婴儿有是,四肢畸 形,(,主要是双上肢短肢畸形,),，有是,腭裂,，有 是,盲儿,或,聋儿,，还有 是,内脏畸形。,发育毒性和致畸作用,第11页,2025/1/1 周三,12,调查显示，孕妇,在,末次月经后,第,34 50天,是反应停作用敏感期,。,在此时间段以外服用反应停，普通不会造成胎儿出生缺点,。,支付巨额赔偿金,1970,年,4,月,10,日，案件控辩双方于法庭外达成了和解，,Chemie,Gruenenthal,企业同意向控方支付总额,1.1,亿德国马克赔偿金。,发育毒性和致畸作用,第12页,2025/1/1 周三,13,发育毒理学,(developmental toxicology),研究发育生物体在受精卵、妊娠期、出生后、直到性成熟发育过程中，因为出生前接触造成异常发育理化原因或环境条件后发病机制和结果。,发育毒性和致畸作用,第13页,2025/1/1 周三,14,第二节 发育毒性与致畸性,一、基础概念,发育毒性,:,出生前经父体或（和）母体接触外源性理化原因，引发在子代抵达成体之前这段时间内出现有害作用。,发育毒性和致畸作用,第14页,2025/1/1 周三,15,发育毒性详细表现,生长改变：,普通指生长迟缓，胚胎与胎儿发育在外来化合物影响下，较正常发育过程迟缓。,结构异常：,因为外来化合物干扰，胎儿在出生时表现出形态结构异常，即畸形。,功效缺点：,胎儿生理、生化、代谢、免疫、神经活动及行为缺点或异常。,发育生物体死亡：,因为外来化合物作用，在胚胎或胎儿发育期间对胚胎或胎儿产生损害，并致其死亡，详细表现为自然流产、死产，死胎率增加。,发育毒性和致畸作用,第15页,2025/1/1 周三,16,畸形：,在胚胎发育过程中，因为受到各种理化原因影响，使胚胎细胞分化、器官形成和发育不能正常进行，以致出现器官器质性缺点，造成形态结构异常（狭义）。分为严重畸形和轻微畸形。广义畸形还包含生理、生化以及精神（行为）发育缺点。,致畸性和致畸作用：,在妊娠期接触外源性理化原因引发后代结构畸形特征或作用。,致畸物（致畸原）：,凡是能透过母体胎盘屏障，直接作用于胚胎细胞，引发胚胎发育障碍，造成先天性畸形外来物，称为致畸物或致畸原。,发育毒性和致畸作用,第16页,2025/1/1 周三,17,变异：,指同一个属子代与亲代之间或子代个体之间，有时出现不完全相同现象，是小或次要改变。普通认为变异不影响正常生理功效，更不危及生命。,变异,是生命一个特征，在生物学上含有适应与进化意义，变异并非畸形，但有时与畸形难于严格区分。普通情况下，变异出现率较低，而且不展现剂量与效应或反应关系。不过在致畸试验中，假如某种变异出现较多，而且展现一定剂量效应或反应关系，即使不作为畸形，也应另行统计，并在试验结果评定时，作详细分析。,发育毒性和致畸作用,第17页,2025/1/1 周三,18,胚体,-,胎体毒性,胚体毒性：,通常是指外源性理化原因造成孕体,着床前后直到器官形成期结束,全部毒性。,表现为：胚体期染毒而出现畸胎、生长迟缓、着床数降低和吸收胎，也偶有死胎。,胎体毒性：,是指,器官形成期结束后,原因引发任何毒性表现。,包含胎儿死亡、体重降低、骨化迟缓、功效缺点以及结构异常，甚至肿瘤。,发育毒性和致畸作用,第18页,2025/1/1 周三,19,在试验动物发育毒性试验中，通常不去区分胎儿与胚体，所以使用,胚胎毒 性（,embryo-fetal toxicity,）,更恰当。,广义说胚胎毒性包含孕体结构和功效方面各种损害，普通情况下，胚胎毒性是指孕体死亡和生长发育迟缓，而不包含结构畸形。,发育毒性和致畸作用,第19页,2025/1/1 周三,20,出生缺点：,指婴儿出 生前即已形成发育障碍。,形态结构异常：,结构畸形。,功效缺点：,智力低下，代谢和行为异常。,发育毒性和致畸作用,第20页,2025/1/1 周三,21,不良妊娠结局：,妊娠后不能产生外观和功效正常子代。包含全部不良结果，如流产、死胎、死产、宫内生长迟缓、发育异常、新生儿和婴幼儿期死亡等。,发育毒性和致畸作用,第21页,2025/1/1 周三,22,二、发育毒性作用特点和影响原因,（一）发育各阶段发育毒性作用特点,1,、着床前期,2,、器官形成期,3,、胎儿期,4,、围生期和出生后发育期,发育毒性和致畸作用,第22页,2025/1/1 周三,23,1,、着床前期,事件：发生受精、卵裂、进入子宫腔、囊胚形成、原肠胚形成及着床。,时间：人类为受精后第,11,12,天；啮齿类动物为最初天。,特点：此期受损是早期胚胎相对未分化细胞，可经过代偿性细胞增生加以修补，不会产生局部缺点，最多出现发育迟缓，若受损细胞较多，可造成胚胎死亡，称为着床前丢失。也有例外，如小鼠妊娠第,2.5,天、,3.5,天和,4.5,天用甲基亚硝脲处理可造成子代神经管缺点和腭裂。,这一发育阶段被称为,早期不易感期,。,发育毒性和致畸作用,第23页,2025/1/1 周三,24,2,、器官形成期,事件：细胞增殖、移动和组合形成器官原基，即细胞结构开始分化，并逐步形成不一样器官和组织。,时间：人类为第,3,8,周；啮齿类动物为第,1,3,周。,特点：此期细胞增殖分裂速度很快，组织器官生长旺盛，胚胎对致畸物尤其敏感，细胞受损可造成结构畸形、生长迟缓或胚胎死亡。,这一发育阶段被称为,致畸敏感期,或,致畸作用危险期（,critical period,）,。,发育毒性和致畸作用,第24页,2025/1/1 周三,25,不一样器官敏感期不一样，且有交叉重合。表现为：不一样器官致畸高峰时间不一样，此期内不一样时间给予致畸物会诱发不一样器官畸形，同一天染毒可引发多个器官受损。,发育毒性和致畸作用,第25页,2025/1/1 周三,26,人类胚胎致畸敏感期,着床前期,器官形成期,胎儿期,1,3,6,4,5,2,12,11,10,9,8,7,38,20,中枢神经系统,心,耳,眼,上肢,下肢,唇,牙,腭,致畸敏,感度高,致畸敏,感度低,外生殖器,发育毒性和致畸作用,第26页,2025/1/1 周三,27,同一致畸物，给予时间不一样，会产生不一样畸形。即同一剂量同种致畸物在敏感期中与胚胎接触，可因胚胎所处发育阶段不一样而出现不一样畸形。,小鼠孕第,8-12,天不一样时间给予环磷酰胺，即使均可引发足趾畸形，不过伴随给药时间不一样，分别出现多趾、并趾、缺趾、无趾。,大鼠静脉注射硝酸铅，第,9.5,天引发后部畸形，第,10,天可引发大鼠死亡。,发育毒性和致畸作用,第27页,2025/1/1 周三,28,事件：主要是组织分化、生长和生理学成熟。,时间：人类是从第,56-58,天起，直到分娩。,特点：胚胎器官、系统基础结构形成后，致畸物难以使之发生结构缺点，通常是变形或异常而非畸形。,胎儿期接触外源性理化物质，很可能对生长和功效成熟产生效应，主要表现为：全身生长迟缓、特异功效障碍、经胎盘致癌和偶见死胎。,3,、胎儿期,发育毒性和致畸作用,第28页,2025/1/1 周三,29,发育毒性和致畸作用,第29页,2025/1/1 周三,30,此期接触外源性化学物质，主要表现在发育免疫毒性、神经行为发育异常和儿童期肿瘤。,围生期接触外源化学物，会严重影响胎儿,T,细胞、,B,细胞和吞噬细胞发育、迁移、归巢及功效，可能暂时甚至永久性地损伤机体免疫系统。,许多化学物质含有发育神经毒性，表现为对感觉、运动、自主和认知等方面影响。,围生期是一生中对致癌物最敏感时期,。,4,、围生期和出生后发育期,发育毒性和致畸作用,第30页,2025/1/1 周三,31,（二）发育毒性物种差异,发育阶段致畸效应特异性,：,胚胎所处发育阶段不一样，对于致畸作用展现不一样敏感性。有性生殖动物着床前胚泡对致死作用较为易感，对致畸作用较差。在胚胎发育后期和新生儿期发育毒性表现为,:,生长迟缓、神经、内分泌及免疫系统机能改变。胎儿对致死作用易感性较胚胎为低。,发育毒性和致畸作用,第31页,2025/1/1 周三,32,致畸物种个体差异,：,任何环境有害原因损害效应都存在物种品系及个体差异，在致畸作用中较突出。比如，杀虫剂西维因对豚鼠含有致畸作用，对家免和仓鼠并不致畸。农药敌枯双对大鼠致畸作用显著，但未得到人群调查证实资料。同一物种不一样品系对一个致畸物敏感性差异很大，反应停和脱氢皮质酮都有这种现象。,发育毒性和致畸作用,第32页,2025/1/1 周三,33,可能因为同一致畸物在不一样物种和同一物种不一样品系动物代谢过程有一定差异；也可能因为致畸物主要是经过母体胎盘作用于胚胎，而不一样物种动物胎盘结构也不相同。这些差异可能是因为遗传原因，即基因型差异。,为何会出现物种及种间差异？,发育毒性和致畸作用,第33页,（三）发育毒性剂量反应关系模式：,A.,正常胎、生长迟缓解结构畸形同时存在，但较高剂量下几乎引发全窝胚胎死亡。这种类型较常见，这类化学物低剂量下主要造成生长迟缓，随剂量增加，造成畸形和死胎。多为细胞毒性致畸物，包含烷化剂、抗癌药及很多致突变物。,发育毒性和致畸作用,第34页,B.,在远低于胚胎致死剂量下即可出现致畸，甚至全窝致畸，致畸胎儿常同时出现生长迟缓。当剂量增加到远远超出全窝畸形时才出现胚胎死亡，后者剂量范围经常与显著母体毒性剂量范围重合。这种模式表示受试物有高度致畸作用，较少见，如沙立度胺、糖皮质类固醇等。,发育毒性剂量反应关系模式：,发育毒性和致畸作用,第35页,C.,只有生长迟缓解胚胎致死但没有畸形发生。往往生长迟缓先出现，曲线较平缓，较大剂量时才出现胚胎死亡，其曲线较陡，靠近于,“,全或无,”,。表明胚胎存活有显著界限。这类化学物，可被认为是有胚胎毒性（包含胚胎致死性），但不含有致畸作用。,发育毒性剂量反应关系模式：,发育毒性和致畸作用,第36页,2025/1/1 周三,37,三、母体毒性与发育毒性,（,一）母体原因对发育毒性影响：,母体毒性：,化学毒物对受孕母体产生损伤作用。,表现为增重减慢、功效异常、临床症状、甚至死亡。,发育毒性和致畸作用,第37页,2025/1/1 周三,38,母体原因对发育毒性影响,1,、,遗传学：,母体遗传结构是胚胎发育一个决定原因。如唇腭裂发病率白种人显著高于黑种人，主要原因在于母体，而非胚胎本身基因结构。,2,、,疾病：,母体受病毒感染、未控制糖尿病等疾病，将会对胚胎产生影响。如怀孕前三个月，母体高热、病毒感染等均可能造成胎儿中枢神经系统畸形。,发育毒性和致畸作用,第38页,2025/1/1 周三,39,3,、,营养：,母体蛋白质、热量、维生素、微量元素及酶辅助因子缺乏将对胚胎产生影响。,4,、,应激：,不一样形式母体毒性可能经过诱导生理学应激反应而产生发育毒性。,5,、,对胎盘毒性：,胎盘是母体和胚胎进行物质交换结构，为胚胎提供营养、气体交换、废物排出。胎盘可产生维持妊娠关键激素，而且能代谢和储存外源化学物。外源化学物既可透过胎盘进入胎儿体内，同时胎盘也可能是其作用靶点，或作为其储存库。,发育毒性和致畸作用,第39页,2025/1/1 周三,40,（二）母体毒性与胚胎毒性关系,1,、含有胚胎毒性，但无母体毒性,2,、现有胚胎毒性，也有母体毒性,3,、含有母体毒性，但不含有胚胎毒性,4,、既无母体毒性，也无胚胎毒性,（一定剂量范围内）,发育毒性和致畸作用,第40页,2025/1/1 周三,41,四、父源性发育毒性,父源性出生缺点（,paternal birth defect,）,影响原因：遗传缺点、年纪原因和外界暴露原因。,父源性暴露引发子代发育异常包含：流产、死胎、低出生体重、畸形、功效障碍等。,发育毒性和致畸作用,第41页,2025/1/1 周三,42,第三节 致畸（发育毒性）作用机制,发育毒性和致畸作用,第42页,2025/1/1 周三,43,1,、,不发育,(agenesis),因为一些主要原基组织,(primordial tissue),不存在或缺乏邻近组织或前体组织正常诱导而使原基组织不发生，结果某个器官或躯体个别发生或完全缺失。,2,、,发育不全,(hypoplasia),这种畸形常在名词前冠以,“,小,”,字，如小头、小眼等。另外，亦有软骨发育不全等。,3,、,发育受阻,某器官或结构发育至中途时受阻而停顿，可分为四类：不合并,(non-fusion,）；不分裂,(non-division,）抑制迁移,(sup-pressed migration,）；暂时性结构保留,(persistence of transitory structure,），如肛门闭锁等。,原基：个体发生中发育成机体特定器官胚胎区,先天畸形发生方式,发育毒性和致畸作用,第43页,2025/1/1 周三,44,4,、,相邻原基粘连,如马蹄肾，,或原基分裂,如分裂输尿管。,5,、,生长过分（,overgrowth,）,如多指、巨指或先天性角化过分等。,6,、,错位（,misplacement,）,如内脏错位等。,7,、,错误迁移（,incorrect migration,）,如卵巢迁移到外生殖器，并耳等。,8,、,不经典分化,(atypical differentiation,）,包含先天性肿瘤形成、异位和分化。,9,、,返祖（,atavism,）,常见有多毛、复乳等。,发育毒性和致畸作用,第44页,2025/1/1 周三,45,畸形引发机制,1,、基因突变与染色体畸变,2,、干扰基因表示,3,、细胞损伤与死亡,4,、细胞凋亡,5,、干扰细胞间交互作用,6,、经过胎盘毒性引发发育毒性,7,、干扰母体稳态,8,、内分泌干扰作用,发育毒性和致畸作用,第45页,2025/1/1 周三,46,第四节 发育毒性和致畸试验与评价,外源化学物发育毒性评价需要四方面资料：,环境流行病学资料,控制下临床研究资料,动物发育毒性试验资料,体外试验资料,作为一个新产品登记与审批，主要依据前三类资料。在前三类资料中，首先是动物试验资料，因为大多数情况下新产品在上市前，还没有流行病学资料和控制下临床资料。,发育毒性和致畸作用,第46页,2025/1/1 周三,47,一、动物发育毒性试验,优点：,轻易控制接触条件，控制接触动物数量、年纪、状态以及选择检测效应指标（终点）。,缺点：,动物试验结果外推到人含有不确定性。,发育毒性和致畸作用,第47页,2025/1/1 周三,48,1,、动物选择,致畸试验中动物应选择：食性和对受试物代谢过程与人类靠近，易喂养、易繁殖和价廉之外，还应尤其注意妊娠过程较短、每窝产仔数较多以及胎盘结构与人类靠近动物。,致畸试验可选取二种哺乳动物，普通首先考虑大鼠，另外为小鼠或家兔。,发育毒性和致畸作用,第48页,2025/1/1 周三,49,大鼠受孕率高，易于得到足够标本数，且大鼠对大多数外源化学物代谢过程、基础与人类近似。但不足之处是大鼠对普通外源化学物代谢速度很高，对致畸物耐受性强、易感性低，有时出现假阴性结果。,小鼠自然畸形发生率较大鼠高。对形成腭裂致畸物更较为敏感。,家兔为草食动物，与人类代谢功效差异较大，妊娠期不够恒定，自然发生率也较高。,鸡胚也可进行致畸试验，可同时得到大量鸡胚，胚胎发育条件也较易控制。但鸡胚不是哺乳动物，缺乏受试物与母体相互作用。,发育毒性和致畸作用,第49页,2025/1/1 周三,50,2,、剂量分组,致畸试验普通应先进行预试验，找出引发母体中毒剂量。普通用孕鼠,8,10,只，在妊娠,5,16,天内给予受试物。如出现较严重母体中毒、流产或胚胎大量死亡，将剂量略为降低，直到找出引发母体轻度中毒普通症状剂量。依据预试结果深入确定正式试验剂量。,发育毒性和致畸作用,第50页,2025/1/1 周三,51,正式试验最少应设,3,个剂量组，另设对照组。,高剂量组,该剂量普通不超出,LD,50,1/5-1/3,，应引发母体轻度中毒，即进食量降低、体重减轻、死亡不超出,10%,；,低剂量组,能够为,LD,50,1/100-l/30,，不应观察到任何中毒症状；,中剂量组,能够允许母体出现一些极轻微中毒症状，其剂量与高剂量和低剂量成等比级数关系。,发育毒性和致畸作用,第51页,2025/1/1 周三,52,假如已掌握或能预计人体实际接触量，也可将实际接触量作为低剂量，并以其,10,倍左右为最高剂量。,急性毒性较强受试物，所采取剂量应稍低，反之可较高。,最高剂量组能引发母体轻度中毒，仍未观察到致畸作用，则可确认为该原因不含有致畸作用。,发育毒性和致畸作用,第52页,2025/1/1 周三,53,3,、动物交配处理,将性成熟雌雄动物按雌雄,1:1,或,2:1,百分比同笼交配。每日将已确定受孕雌鼠随机分入各剂量组和对照组。确定受孕方法是阴栓检验或阴道涤片精子检验，出现阴栓或精子之日即为受孕“,0”,日，也有些人作为第,l,日。,发育毒性和致畸作用,第53页,2025/1/1 周三,54,接触受试物方式与路径应与人体实际接触情况一致。大鼠和小鼠普通可自受孕后第,5,天开始接触受试物，每日一次，连续到第,15,天。如研究器官易感性，则应在上述期间增加动物组数，将受试物每日分别给予不一样组动物，依据畸形出现情况，确定受试物敏感时间和靶器官,。,发育毒性和致畸作用,第54页,2025/1/1 周三,55,试验期间天天称取母鼠体重。依据体重增加，随时调整剂量，观察受孕动物妊娠情况和胚胎发育情况。受孕动物体重连续增加，表示妊娠过程及胚胎发育正常。,发育毒性和致畸作用,第55页,2025/1/1 周三,56,4,、胎仔检验,自然分娩前,1,2,日将受孕动物处死剖腹，取出子宫及活产胎仔，统计死胎及吸收胎。普通大鼠在受孕后第,19,20,天，小鼠第,18,19,天，家免在第,29,天。胎仔在临近出生期间，发育进展极为快速。相差半日，发育情况即有显著差异，骨骼发育尤为显著。,发育毒性和致畸作用,第56页,2025/1/1 周三,57,孕鼠处死后，从子宫顶端依次取出其中活产幼仔、死胎以及吸收胎，并统计编号。,大鼠和家免还应取出卵巢，统计黄体数用来代表排卵数。,黄体为,排卵,后由,卵泡,快速转变成富有血管腺体样结构。,活产胎仔取出后，先检验性别，逐只称重，并按窝计算平均体重，然后进行畸形检验。,为确保哺乳机会，普通主张每窝保留,8,只幼仔，并尽可能雌雄数量相等。,发育毒性和致畸作用,第57页,2025/1/1 周三,58,畸形检验,外观畸形肉眼检验，比如露脑；,肉眼检验内脏及软组织畸形，如腭裂；,骨骼畸形检验，比如颅顶骨缺损等。,发育毒性和致畸作用,第58页,2025/1/1 周三,59,动物试验缺点：,1,、动物试验结果外推到人不必定性：,因为致畸作用存在种属差异和品系差异，故对一个受试物须屡次重复同一试验，均出现一定畸胎发生率，才能认为畸胎发生与该受试物相关。,最少应能在两种以上试验动物试验中都显示必定能够致畸作用才能可靠推导于人。,但只要受试物在一个动物含有致畸作用，就应警觉它对人类含有潜在危险性。,发育毒性和致畸作用,第59页,2025/1/1 周三,60,2,、动物高剂量接触与人类实际低剂量接触区分,阿司匹林和磺胺类药品,对大鼠有致畸作用，但这些药品人类已长久使用，并未发觉必定致畸作用，可能是人所利用剂量未到达可引发致畸程度。,维生素,A,常见作致畸阳性对照物，给大鼠,1000mg/kg,剂量可引发畸胎，按此剂量推算，,50kg,体重人天天应服用,50ml,鱼肝油，才会产生致畸作用，而人类极难摄取如此大量鱼肝油，故到当前为止，维生素,A,并未被列为人类致畸物。,一定要考虑人类实际接触剂量。另外更要重视流行病学调查，设法搜集接触者流行病学及临床资料，只有将动物试验结果与流行病学调查资料结合起来，进行综合分析，才能得出正确结论。,发育毒性和致畸作用,第60页,2025/1/1 周三,61,对大多数化学物质来说，,三段生殖毒性试验,设计通常是最适当，关键原因是,各个生殖阶段之间不得有间隔,，即在三个相关联阶段接触受试物时期最少有一天重合，并能直接或间接地评价生殖过程全部阶段。,发育毒性和致畸作用,第61页,2025/1/1 周三,62,生殖发育过程可分为,6,个阶段,A.,从交配前到受孕,：检验成年雄性和雌性生殖功效、配子发育与成熟、交配行为、受精。,B.,从受孕到着床,：检验成年雌性生殖功效、胚胎着床前发育、着床。,C.,从着床到硬腭闭合,：检验成年雌性生殖功效、胚体发育、主要器官形成。,发育毒性和致畸作用,第62页,2025/1/1 周三,63,D.,从硬腭闭合到妊娠结束,：检验成年雌性生殖功效、胚体发育与生长、器官发育与生长。,E.,从出生到断乳,：检验成年雌性生殖功效、新生仔对宫外生活适应性、断乳前发育与生长。,F.,从断乳到性成熟,：检验断乳后发育与生长，对独立生活适应、到达完全性功效。,发育毒性和致畸作用,第63页,2025/1/1 周三,64,三段生殖毒性试验,生育力和早期胚胎发育毒性试验（普通生殖毒性试验）,胚体,-,胎体毒性试验,(,致畸试验,),出生前后发育毒性试验,(,围生期毒性试验,),发育毒性和致畸作用,第64页,三段生殖试验图解,.,生育力和早期胚胎发育毒性试验（普通生殖毒性试验）,.,胚体,-,胎体毒性试验（致畸试验）,.,出生前后发育毒性试验（围产期毒性试验）,发育毒性和致畸作用,第65页,2025/1/1 周三,66,二、人群流行病学研究,（一）人类证据取得,流行病学调查：在接触外来化合物人群中进行调查。调查观察指标可参考相关临床诊疗检验指标，还可进行染色体畸变检验。,发育毒性和致畸作用,第66页,2025/1/1 周三,67,（二）发育毒性资料使用,1,、化学物致畸潜力分类和安全系数确定,2,、,ICH,人类用药危险度分类,3,、依据动物试验人群调查资料对致畸物分级,4,、确认人类致畸物标准,发育毒性和致畸作用,第67页,2025/1/1 周三,68,三、发育毒性替换试验,（一）体外预筛试验,1,、大鼠全胚胎培养,2,、器官培养,3,、胚胎细胞微团培养,4,、小鼠胚胎干细胞试验,发育毒性和致畸作用,第68页,2025/1/1 周三,69,（二）体内预筛试验（,C.K,试验）,又名生殖发育毒性筛选试验,依据：大多数出生前受到损伤将在出生后表现为存活力下降和或生长障碍。所以在仔鼠出生后，观察其外观畸形，胚胎致死，生长迟缓等发育毒性表现，而不进行传统常规试验中内脏和骨骼检验，就可到达筛选目标。,优点：所用动物少，检测终点少，试验周期短，能提供相关化学物对生殖和或发育可能发生影响初步信息。,发育毒性和致畸作用,第69页,2025/1/1 周三,70,1,、化学物致畸潜力分类和安全系数确定,依据动物试验中发育毒性效应类型、严重性和发生率将化学物分为四类，并要求各类型不一样安全系数范围，用以评定待测物发育毒性危险度。,发育毒性和致畸作用,第70页,国际生命科学院,(International Life Sciences Institute,ILSI)1989,年提出,发育毒性和致畸作用,第71页,2025/1/1 周三,72,2,、,ICH,人类用药危险度分类,:,ICH,：人用药品注册技术要求国际协调会。,ICH,在研究设计中要求：被同意新药要依据动物发育毒性研究结果和从人类使用经验得到信息，将该药品在妊娠用药类别中定位，并要求医生在开处方时恪守，以使怀孕妇女按要求使用这些药品。,发育毒性和致畸作用,第72页,A,、,B,、,C2,：仅在假如显著地需要时，在怀孕期间可使用。,C1,：仅在假如证实可能效益与对胎儿可能危险比较是可,取时，在怀孕期间可使用。,D,：假如在怀孕期间使用，应通知病人对胎儿可能危害。,X,：在怀孕或可能怀孕妇女中禁止使用。,发育毒性和致畸作用,第73页,3,、依据动物试验人群调查资料对致畸物分级,依据欧共体（,EEC,）和经济与发展组织（,OECD,）提议,发育毒性和致畸作用,第74页,2025/1/1 周三,75,4,、确认人类致畸物标准,(1),一个特殊缺点或几个缺点并发,(,综合征,),频率突然增加。,(2),缺点增加与某种已知环境改变相交联，如一个新药广泛使用巧合。,(3),已知在妊娠特殊阶段暴露于接触环境改变，产生有特征性缺点综合征。,(4),缺乏妊娠时引发特征性缺点婴儿产生其它共同因子。,发育毒性和致畸作用,第75页,2025/1/1 周三,76,已知人类致畸物,电离辐射：,放射治疗、放射性碘、原子武器,感染：,风疹、巨细胞病毒、单纯性疱疹、梅毒、弓形体病毒,代谢失调：,克汀病、糖尿病、苯丙酮酸尿、男性化肿瘤、高温,药品和化学品：,反应停、,Abameetin,、酒精、氨基蝶呤、雄性激素、麻 醉剂、抗甲状腺药品、白消安、咖啡因、氯代联苯类、香豆素抗凝剂、环磷酰胺、二已基乙烯雌酚、敌螨普、三氟氯溴乙烷、异维,A,酸、锂、甲巯咪唑、有机汞化合物、有机溶剂类、苯妥因、腐霉利、四环素、三甲恶唑烷二酮、丙,(,基,),戊酸,发育毒性和致畸作用,第76页,2025/1/1 周三,77,1,、生育力和早期胚胎发育毒性试验 （普通生殖毒性试验）,研究目标,：评价化学毒物对配子发生和成熟、交配行为、生育力、胚体着床前和着床影响。,试验动物,：最少一个，首选大鼠。每组雌雄各,16,20,只（窝）。,给药时间,：交配前雄性,4,周，雌性,2,周，交配期（,2,3,周），雌性着床前（大鼠孕,6,天）。,终末处理,：雄性证实交配并使雌性受孕成功后处死，雌性在受孕,13,15,天终止妊娠。,发育毒性和致畸作用,第77页,2025/1/1 周三,78,观察指标,雄性,：饮水量、摄食量、体重改变、睾丸、附睾重量及脏器系数、附睾精子计数、活动度和形态观察、生育率、睾丸附睾病理组织学检验；,雌性,：饮水量、摄食量、体重改变、普通健康情况及死亡数、交配行为、受孕率、卵巢和子宫组织学检验；,孕鼠,：妊娠体重改变，处死后检验黄体数、着床数、吸收胎、死胎和活胎数。,结果评定,：,F0,代和,F1,代毒性及,NOAEL,，考虑各组受影响窝数等。,发育毒性和致畸作用,第78页,2025/1/1 周三,79,2,、胚体,-,胎体毒性试验 （致畸试验）,研究目标,：评价母体自胚泡着床到硬腭闭合期间接触受试物对妊娠雌性和对胚体,-,胎体发育有害影响。,试验动物,：通常两种，啮齿类首选大鼠，非啮齿类可选家兔，每组雌雄各,16,20,只（窝）。,给药时间,：大鼠、小鼠孕,6,15,天，家兔孕,6,18,天。,终末处理,：妊娠结束前一天处死，胎仔二分之一茜素红染色，观察骨骼，另二分之一,Bouins,液固定，观察内脏。,发育毒性和致畸作用,第79页,2025/1/1 周三,80,观察指标,母体,：体重改变、中毒症状、黄体数、着床数、吸收胎、早死胎、晚死胎和活胎数、胎盘重量；,胎仔,：性别、体重、身长、外观畸形、内脏畸形、骨骼畸形和发育情况。,结果评定,：母体毒性及,NOAEL,，胚胎毒性、致畸性及,NOAEL,。,发育毒性和致畸作用,第80页,2025/1/1 周三,81,3,、出生前和出生后发育毒性试验,（围生期毒性试验）,研究目标,：研究母体自着床至断乳期间接触化学毒物对妊娠哺乳母体、孕体及子代发育直至成熟有害影响。,试验动物,：最少一个，首选大鼠，每组雌雄各,16,20,只（窝）。,给药时间,：雌性从着床到哺乳期结束，大鼠孕,15,天至产后,28,天。,终末处理,：断乳后处死母体和个别幼仔，每窝选,8,只抚育到性成熟并交配，评价生育力,F1,代在,F2,代出生后处死。,发育毒性和致畸作用,第81页,2025/1/1 周三,82,观察指标,母体,：饮水量、摄食量、体重改变、中毒情况及死亡率、妊娠分娩时间、产仔数、受孕率；,F1,代,：性别百分比、外观畸形、出生存活率、培育存活率、生长指数，生剪发育和断乳前神经行为检测；哺乳后处死检验主要脏器及睾丸附睾或卵巢子宫重量、内脏畸形；断乳后行为测试，交配行为及受孕率。,结果评定,：母体毒性及,NOAEL,，胚胎毒性、致畸性、子代神经行为影响及,NOAEL,。,发育毒性和致畸作用,第82页,2025/1/1 周三,83,思索题：,名词解释：,发育毒理学,发育毒性,发育毒性和致畸作用,第83页,2025/1/1 周三,84,判断题,胚胎毒性是指孕体死亡和生长发育迟缓，而不包含结构畸形。,不一样发育毒物作用与不一样发育阶段产生不一样效应。,最轻易引发畸形阶段是器官形成期,经典致畸作用剂量,反应曲线斜率大，从,NOAEL,到胚胎,100%,死亡剂量只差,2-4,倍。,从,NOAEL,到胚胎死亡剂量之间剂量范围叫致畸带，致畸带越宽致畸物，致畸危险性越大。,发育毒性和致畸作用,第84页,