布鲁氏菌病的实验室检查.ppt

布鲁氏菌病的实验室布鲁氏菌病的实验室检查检查 王 月布病简介布病简介 牛种羊种猪种 犬种沙林鼠种 绵羊附睾种Brucella布病血清学诊断布病血清学诊断 标本的采集、保存及运输 1 1）血清学诊断需要的标本类型为人及疑似动物血血清学诊断需要的标本类型为人及疑似动物血清。清。2 2）使用负压采血管或注射器进行采集。使用负压采血管或注射器进行采集。3 3）分离到的血清存放到灭菌后的血清管内。分离到的血清存放到灭菌后的血清管内。4 4）两周内进行实验的血清可两周内进行实验的血清可4 4冷藏保存。冷藏保存。血清的反复冻融会引起布病抗体效价的降低血清的反复冻融会引起布病抗体效价的降低 5 5）检测后的血清检测后的血清-25-25冷冻保存。冷冻保存。6 6）使用冷藏箱进行长距离运输。使用冷藏箱进行长距离运输。注意：采集血清需使用红色或者黄色盖子的负压采注意：采集血清需使用红色或者黄色盖子的负压采血管，其他颜色的采血管会引起血管，其他颜色的采血管会引起RBPTRBPT假阳性。假阳性。负压采血管 血清管 虎红平板凝集实验虎红平板凝集实验器材操作方法操作方法n n在备好的玻璃板上用记号笔划上数排方格，每格在备好的玻璃板上用记号笔划上数排方格，每格约约2.0cm2.0cm 2.0cm2.0cmn n每个方格内加入布病虎红平板凝集抗原每个方格内加入布病虎红平板凝集抗原30ul30ul，备检，备检血清血清30ul30ul。注意：虎红平板凝集抗原使用前需充分摇匀。注意：虎红平板凝集抗原使用前需充分摇匀。n n使用牙签将两者混匀。使用牙签将两者混匀。n n旋转摆动玻璃平板，室温旋转摆动玻璃平板，室温5 5分钟之内观察结果。分钟之内观察结果。n n每个平板需做阴、阳性血清对照，方法同备检血每个平板需做阴、阳性血清对照，方法同备检血清清。结果判断结果判断 阳性阳性 阴性阴性 阴阳性血清对照同时成立，本次实验成立。阴阳性血清对照同时成立，本次实验成立。n n因犬种布鲁氏菌为天然粗糙型，所以产生的血清因犬种布鲁氏菌为天然粗糙型，所以产生的血清抗体为粗糙型布鲁氏菌血清抗体。抗体为粗糙型布鲁氏菌血清抗体。n n检测试剂需使用检测试剂需使用R R型布鲁氏菌虎红平板凝集抗原。型布鲁氏菌虎红平板凝集抗原。n n在条件允许的情况下，建议虎红平板凝集抗原在条件允许的情况下，建议虎红平板凝集抗原（检测（检测S S型布鲁氏菌抗体的虎红平板凝集抗原）和型布鲁氏菌抗体的虎红平板凝集抗原）和R R型布鲁氏菌虎红平板凝集抗原同时进行检测。型布鲁氏菌虎红平板凝集抗原同时进行检测。试管凝集实验试管凝集实验n n器材 小试管小试管 试管架试管架 诊断试剂诊断试剂试管凝集实验试管凝集实验n n器材 吸头吸头 加样枪吸头操作方法操作方法n n每份血清取每份血清取6-86-8支小试管，放于试管架上。支小试管，放于试管架上。n n血清稀释：第一管加入血清稀释：第一管加入960ul960ul生理盐水，其余各管生理盐水，其余各管加入加入500ul500ul生理盐水。第一管内加入备检血清生理盐水。第一管内加入备检血清40ul40ul，混匀后吸出，混匀后吸出500ul500ul血清稀释液加入到第二管内，血清稀释液加入到第二管内，以此类推到最后一管，吸出以此类推到最后一管，吸出500ul500ul血清稀释液弃去。血清稀释液弃去。n n加入抗原：将试管凝集抗原充分混匀后，使用生加入抗原：将试管凝集抗原充分混匀后，使用生理盐水做理盐水做1010倍稀释。加入到血清稀释液中，每管倍稀释。加入到血清稀释液中，每管加入加入500ul500ul。n n充分混匀后，放到充分混匀后，放到3737温箱内，温箱内，20-2220-22小时后取出，小时后取出，在室温下放置在室温下放置1-21-2小时观察结果。小时观察结果。结果判断结果判断n n比浊管配制比浊管配制“+”液体完全透明，菌体呈伞状沉淀或块状颗粒状沉淀，呈100%凝集。“+”液体近于完全透明，菌体呈伞状沉淀，呈75%凝集。“+”液体略微透明，菌体呈较薄伞状沉淀，呈50%凝集。“+”液体不透明，管底有不明显的伞状沉淀，呈25%凝集。“-”液体不透明，无伞状沉淀。结果判断结果判断n n按照操作方法，第一管血清稀释度为按照操作方法，第一管血清稀释度为1:501:50，第二，第二管为管为1:100.1:100.n n效价：以产生效价：以产生50%50%凝集的（凝集的（+凝集程度）血清最高凝集程度）血清最高稀释倍数为受检血清的效价。稀释倍数为受检血清的效价。n n血清抗体效价血清抗体效价1 1：100100及以上，判断为布病抗体阳及以上，判断为布病抗体阳性。性。1:501:50（+）为可疑。）为可疑。布鲁氏菌的分离培养布鲁氏菌的分离培养n n凡从可疑病人、病畜、野生动物或者可疑物中分凡从可疑病人、病畜、野生动物或者可疑物中分离到布鲁氏菌，即可诊断为布鲁氏菌病或带菌。离到布鲁氏菌，即可诊断为布鲁氏菌病或带菌。n n分离培养牛种布鲁氏菌的某些生物型和绵羊附睾分离培养牛种布鲁氏菌的某些生物型和绵羊附睾种布鲁氏菌需要在含有种布鲁氏菌需要在含有5-10%5-10%的二氧化碳条件下进的二氧化碳条件下进行。行。器材器材双向血培养瓶平板方法方法n n使用注射器，无菌采集人或动物全血使用注射器，无菌采集人或动物全血5ml5ml，接种到，接种到双相血培养瓶内。双相血培养瓶内。n n放置含放置含5%-10%5%-10%二氧化碳培养箱内，二氧化碳培养箱内，3737培养。培养。n n如果没有二氧化碳培养箱，将血培养瓶放到烛缸如果没有二氧化碳培养箱，将血培养瓶放到烛缸内，放到内，放到3737温箱内培养。温箱内培养。运送运送n n采集到的双相血培养瓶尽快送至贵州省疾病预防采集到的双相血培养瓶尽快送至贵州省疾病预防控制中心布病实验室，进行培养检测，检测结果控制中心布病实验室，进行培养检测，检测结果会在一个半月内反馈至县疾控中心。会在一个半月内反馈至县疾控中心。n n血培养瓶的运输，不需要冷藏，常温运输。血培养瓶的运输，不需要冷藏，常温运输。谢 谢！