寄生虫诊断1.doc

　　一、临床诊断
　　1.询问病史
　　应详细了解患者的居住地、旅行史、生活行为方式、饮食习惯、感染史、治疗史等。对于长江以南的血吸虫病流行区患者，如有相应的症状和体征应考虑到血吸虫病；我国加入WTO后，大量频繁的人口流动也会带来某些输入性病例（importedcases）；阴道毛滴虫感染多见于性行为不洁的个体；生食淡水鱼虾有感染肝吸虫的可能；与猫密切接触的孕妇如有不良妊娠结局应警惕弓形虫的感染等。
　　2.物理诊断
　　对于某些病原检查不易确诊，而病理变化又具有一定特征的患者，可采用物理检查方法。除了认真体检，注意寄生虫病的特征性表现外，还可辅以各种影象学诊断。例如棘球蚴病的囊性肿大、弓形虫脑炎、血吸虫肝硬化、胆道蛔虫症等可用CT、MRI、超声波或胆道造影等。
　　二、实验室检查
　　1.病原检查
　　在寄生虫感染中，检查出寄生虫病原体是确诊的依据。根据临床诊断提供的线索，通过标本的采集、处理、检验、分析等，做出明确结论，为临床治疗和流行病学调查提供可靠的依据。根据寄生虫的种类、在人体的发育阶段和寄生部位的不同可采集相应的标本（粪便、血液、阴道分泌物、尿液、痰液、组织活检或骨髓穿刺等），采取不同的检查方法。对于肉眼可见的大部分蠕虫和节肢动物，根据其医学教.育网搜集整理标本来源和形态特征可作出初步判断，如粪便中的蛔虫、蛲虫、绦虫节片、组织中的蝇蛆等；对于原虫等肉眼无法见到的小型寄生虫，如阿米巴原虫、阴道毛滴虫、疟原虫、各种蠕虫的卵、疥螨、蠕形螨等则须借助显微镜观察。病原体检查的质量取决于检验医生的责任感和对寄生虫的形态、生活史、致病等基本知识和基本技能的掌握程度。
　　2.免疫学检查
　　有些寄生虫病难以根据症状或体征及病原检查作出诊断，此时需采取免疫学方法辅助诊断。在感染早期、轻度感染、单性感染（仅有雄虫）、隐性感染或由于特殊的寄生部位而使病原检查十分困难以及在流行病学研究中，免疫诊断具有突出的优点。所用的抗原包括同种抗原、生活史某期特异性抗原或基因工程抗原。根据反应原理分为皮内反应和血清学试验（沉淀反应，凝集反应和标记反应）。检测物质包括特异性抗体、循环抗原、免疫复合物。近年来也有学者检测细胞因子以了解机体的免疫状态、抗虫感染的免疫机医学教.育网搜集整理制或作为疗效评价的参考。此外，嗜酸性粒细胞计数和嗜碱性粒细胞脱颗粒试验也可用于蠕虫感染的辅助诊断。上世纪70年代以来，免疫学及免疫学技术取得了长足的进展。近年发展起来的蛋白质芯片技术可望为寄生虫感染的免疫诊断带来又一技术突破。免疫诊断方法应具有高度的特异性（specificity）、敏感性（sensitivity）和可重复性（reproducibility），同时应具有简便、经济、快速且便于基层社区实验室操作等优点。此外，理想的免疫学诊断还应具有能够判别现症感染、估计感染度和疗效考核的价值。
　　3.分子诊断
　　检测的靶物质为寄生虫基因组中特异性的DNA片段。例如根据碱基互补原理可设计并标记DNA探针（probe）进行原位杂交；也可设计合成引物进行聚合酶链反应（PCR），扩增样本中微量的DNA片段。将免疫检测技术与基因扩增技术嫁接而创立的PCR－ELISA，用于疟原虫的检测，最低可测阈值为0.001%的原虫密度。本世纪之交发展起来的DNA微阵列（DNAmicroarray），或称DNA芯片（DNAchips）技术通医学教.育网搜集整理过高通量、自动化的DNA杂交检测，可在一张芯片上同时检测成千上万个DNA片段，将为包括寄生虫病在内的感染性疾病和遗传性疾病的基因诊断带来一场革命。理论上，检测某种寄生虫的特异性DNA片段与检测虫体具有同样的诊断价值。
( 一） 观察临床症状家禽患寄生虫病后，除少数呈现典型症状外，家禽的多数寄生虫病在临床上仅表现消化机能障碍、消瘦、贫血、营养不良和发育受阻、生产性能降低等慢性、消耗性疾病的症状，虽不具特异性，但可作为早期发现疫病的参考。
（二） 调查流行病学资料调查寄生虫病的流行因素，了解发病情况，摸清寄生虫病的传播和流行动态，为确立诊断提供依据。
（三） 实验室诊断实验室诊断是确诊寄生虫病的重要依据，主要包括如下内容：
1.粪便检查：粪便检查是寄生虫病生前诊断的最基本、最常用的方法。多种寄生虫如吸虫、绦虫、线虫、棘头虫、球虫等，寄生于禽的消化系统或呼吸系统，某一发育阶段的病原体，常随禽的粪便排出，因此，检查粪便发现有寄生虫的虫卵、幼虫、虫体或虫体断片，可确诊禽消化系统（包括肝脏）、呼吸系统和泌尿生殖系统的寄生虫病。检查粪便中的虫卵或幼虫等，常用涂片、浮集和沉淀等方法。
（1）直接涂片法：用镊子或小棒取少许新鲜粪便，置载玻片上，滴加清洁常水或50%甘油水数滴，混匀，除去粗渣，加盖玻片后，置显微镜下检查。制片厚度以通过粪便液膜能模糊识别片下字迹为宜。该法简便易行，适用于检查各种蠕虫的虫卵、球虫卵囊等，但检出率较低。
（2）饱和盐水漂浮法：该法的原理是利用比虫卵比重大的溶液作为检查用的漂浮液，使寄生虫的虫卵、球虫卵囊等浮聚于液体表面，取表膜液制片镜检，以提高检出率。该法适用于检查粪便中的线虫卵、绦虫卵和球虫卵囊，方法：取5～10g粪便置于100ml烧杯中，加入少量饱和盐水搅拌混匀后，继续加入10～20倍的饱和盐水，用玻棒搅匀，经细网筛或两层纱布过滤，将滤液置平底试管内，静置30min左右，用直径0.5～1.0cm的金属圈平着接触滤液表面，提起后将粘于金属圈上的液膜抖落于载玻片上，如此多次蘸取不同部位的液面后，加盖玻片镜检。也可将粪便滤液倒入直立的直径1.5～2cm的平口试管或青霉素瓶中，直到液面接近管口时为止，然后用滴管补加粪液，滴至液面凸出管口为止，上放清洁盖玻片，静置30min后，平移此盖玻片于事先放有一滴甘油水的载玻片上镜检。也可将粪便滤液置离心管内，按每min2500～3000转离心漂浮5～10min,取上浮物制片镜检。
（3）反复洗涤沉淀法：该法的原理是虫卵比水重，可自然沉于水底，便于集中检查和提高检出率。主要用于吸虫卵和棘头虫卵的检查，也可用于其他寄生虫卵和球虫卵囊等的检查。方法：取粪便5～10g置于烧杯中，加入少量水捣成泥状，再加入10～20倍水充分搅合，用金属网筛或两层纱布滤入另一烧杯中，静置滤液15～20min后倾去上层液，保留沉渣，再加水与沉淀物重新搅合，静置，如此反复操作，直至上层液透明为止，最后倾去上清液，用滴管或吸管吸取沉淀物滴于载玻片上，加盖玻片后镜检。也可将粪便滤液置离心管中，以每min2500～3000转离心沉淀3～5min，取出后倾去上层液，再加水搅合，离心沉淀，如此反复操作，直到上层液透明为止，最后倒掉上清液，取沉淀物制片镜检。制片厚度要求同直接涂片法。
（4）幼虫检查法：适用于随粪排出的幼虫或粪便培养物、器官组织及土壤、饲料中的幼虫的检查。方法：在固定于漏斗架上的漏斗下端接一根10～15cm长的胶皮管，其下端用止水夹固定。取10～20gg粪便放在漏斗里的金属网筛上，沿漏斗边缘缓缓加入40℃左右的温水，直到把粪便淹没为止，静置0.5～3h，幼虫从粪便中游出，沉于底部；小心打开止水夹，使底部的液体流入离心管内，离心沉淀1min，吸去离心管内的上层液，把底部的沉淀物摇匀，用滴管移至载玻片上，或全部倒入小平皿内，用放大镜或在低倍显微镜下检查有无活动的幼虫。检查时需计数发现的幼虫数目，用以估计动物受侵袭的程度。
2.痰液和鼻液检查：采用直接涂片法或沉淀法（方法同粪便检查）检查虫卵或幼虫，以确诊呼吸系统寄生虫病，如比翼线虫病、类圆线虫病等。
3.血液检查：用于检查寄生于血液内的寄生虫，如住白细胞虫等。将采出的血滴于载玻片一端，按常规推制成血片，姬姆萨氏或瑞氏染色法染色，用油浸镜头检查。
4.体表及皮肤刮下物检查：适用于诊断各种外寄生虫病。蜱、虱、刺皮螨寄生于体表，肉眼可见，不难诊断；疥螨的检查方法，详见鸡膝螨病。
（四） 免疫学诊断有于寄生虫病免疫诊断的方法很多，其中，有些方法如酶联免疫吸附试验、间接血凝试验等，已在某些寄生虫病的生前诊断及流行病学调查中得到较为广泛的应用，为某些寄生虫病的早期诊断、流行病学调查乃至及时制订有效的防制措施提供了重要的科学依据。
（五） 尸体剖检尸体剖检可分为全身性剖检、个别系统剖检及个别器官剖检等。尸体剖检可以查明动物所有器官组织中的寄生蠕虫，包括生前诊断法所不能查出的虫体如不排虫卵的雄虫、幼虫等，并可做到病原蠕虫的计数与种类鉴别，因此，是寄生虫病确诊的重要依据，也是常用的寄生虫病流行病学调查和药物疗效考核的主要方法。通过尸体剖检，观察病理变化，查找病原体，判定感染的寄生虫种类和危害程度，分析致病和死亡原因，从而达到确诊的目的。
应当指出，生前诊断或尸体剖检查到病原体，但是不是由寄生虫引起的发病和死亡，还应该结合临床症状、流行病学资料和病理变化及虫卵、幼虫或虫体计数结果等进行综合判断。