elisa制板.docx

<三>elisa实验制板

1. 配制包被液。
由10X→1X 其中一条（8个孔）的用量按1ml计算。
2. 取出待测抗原，放在室温下等待其自然平衡。
取出时注意，手指不能捏到EP管底部，防止手部温度过高对样品产生温度上的影响。取出时摇晃混匀，之后离心一下。
3. 计算抗原用量。
根据目标浓度和包被的条数计算。一条按1ml计算。
4. 包被
一：用微量移液枪加液，按100μl加样。
二：其中移液枪只能打到一档防止产生气泡，并注意防止溅出尽量不贴壁加液。
三：使用排枪加液时，对齐第一个孔并注意与板条方向保持水平。
四：槽子上的手套接触液体的那一面不能用手接触。
五：取出后不宜放太久，应立即放回冰箱。
六：包被完成后，在板子上做好记录，用保鲜膜包好后放入4℃冰箱包被17h。
七：洗板时，洗一次，拍干至板内无气包。
5．封闭
一：配置封闭液
a) 称量BSA时，由于有静电的干扰，用药勺挖取后敲两下，将带静电的BSA敲落。
b) 移取Casein等黏稠液体时，要多润吸几次。
二：按比例稀释，加时用排枪。
三：加完后放入37℃温育2h。并在板子上做好记录。
四：将实验所用到的药品记录下批号等信息。
5. 干燥，封存
一：干燥
a) 封闭完的elisa板取出后，洗板3次，拍干至无气泡。
b) 放入真空箱中
c) 先观察箱中的变色硅胶是否失效。未失效时，放入板，关上箱门，关闭进气阀，打开真空伐，而后打开抽气泵的电源，待箱内气压将至-0.1MPa时开始计时，时间为1h.
二：封存
a) 干燥完成以后，取出需要的板条移植空板架上，剩余的用铝箔袋真空包装。
b) 铝箔袋内应放入干燥片，防止板条受潮，影响板的稳定性。
c) 在铝箔袋上做好记号，写下批号的板的类型。
d) 放入博冰箱保存。