人源化抗体的制备策略.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,人源化抗体的制备策略有哪些,1,目录,一、,嵌合抗体,二、,CDR,移植的人源化抗体,三、完全人源化抗体,1.,抗体库技术,2.,转基因小鼠技术,2,一、,嵌合抗体,应用,DNA,重组技术将小鼠抗体基因上的可变区与人抗体基因的恒定区重组,再将重组后的基因导入骨髓瘤细胞中表达。根据所用的载体质粒标记基因产物,选用适当的抗生素或制剂进行筛选,再用与传统技术相似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗体的细胞株。,二、,CDR,移植的人源化抗体,鼠源性抗体,V,区中的,FR,仍残留一定的免疫原性,这种抗体还远非真正的人源化抗体,有些还能产生很强的抗独特型反应。为减少鼠源成分,人们进一步用人的,FR,替代鼠,FR,形成更为完全的人源化抗体,即 除 了,3,个,CDR,是 鼠 源 的 外,其 余 全部是人源结构,又称,CDR,移植抗体,(CDR-grafted antibody),或改型抗体,(reshaped antibody),。,3,三、,完全人源化抗体,1.,抗体库技术,噬菌体抗体库技术的产生依赖于,3,项实验技术的发展,:,一是,PCR,技术的发展使人们可以用一组引物,(,免疫球蛋白可变区中骨架部分的保守序列,),通过,RT-PCR,直接从,B,淋巴细胞总,RNA,克隆出全套免疫球蛋白可变区基因,从而使抗体库的构建简单易行,;,二是噬菌体展示技术,(,即将抗体通过与噬菌体外壳蛋白融合表达在噬菌体的表面,进而经亲和富集法筛选表达有特异活性的抗体,),的建立,实现了基因型和表型的统一,提供 了 高效率的筛选系统,这是噬菌体抗体库技术的核心,;,三是从大肠杆菌分泌表达有结合功能的免疫球蛋白分子片段。,噬菌体抗体库将基因型和表型统一于一体,将选择能力与扩增能力偶联起来,具有强大的筛选功能,能够在体外模拟体内的抗体生成过程,使抗体工程技术进入了一个新的时代。噬菌体抗体库技术的发展使体外不经过免疫获得抗体成为可能。由于它发生于体外,因此不依赖体内抗原识别和提呈系统,在理论上可以产生抗任何物质的抗体。目前噬菌体抗体库技术也存在不足之处,如从未经免疫动物的抗体库获得的抗体亲和力不高、受外源基因转化率的限制、抗体库的库容不足以涵盖一些动物的抗体多样性等。因此,大容量抗体库是获得高亲和力抗体和针对稀有抗原抗体的关键。,4,2,转基因小鼠技术,通过基因敲除技术使小鼠自身的基因失活并导入新基因,创造出携带人体抗体重、轻链基因 簇,而 自 身 抗 体 基 因 失 活 的 转 基 因 小 鼠。这 种 转 人 抗 体 基 因 小 鼠,(human antibody mouse,HuMab),所携带的人,DNA,片段具 有 完备的功能,可以有效地进行同种型转换和亲和力成熟。,转基因小鼠制备的人抗体,其功效优于其他技术生产的抗正常人体蛋白单抗。小鼠识别抗原和动员抗原的抗体系统仍保持完整,容易把人体蛋白识别为异物。此外,由于抗体是体内产生的,经历了正常装配和成熟过程,从而保证成品具有较高的靶结合亲和力。但转基因小鼠也存在一些缺陷,即转基因通常有体细胞突变和其他独特的序列,导致不完整的人序列,;,而且,由 于抗体是在小鼠体内装配,因而产生的单抗具有鼠糖基化的模式,所以这些单抗最终并不是全人源化的。,5,谢,谢,THANK,YOU,6,