药物分析-第四章-前处理.ppt

中国药科大学药物分析教研室第四章第四章药物定量分析与分析方法物定量分析与分析方法验证 定量分析定量分析样品前品前处理方法理方法定量分析方法特点定量分析方法特点 药品品质量量标准分析方法准分析方法验证1.中国药科大学药物分析教研室一、定量分析一、定量分析样品前品前处理方法理方法 Pretreatment of sample used in quantitative analysis概概述述定量分析定量分析样品前品前处理方法理方法2.中国药科大学药物分析教研室泛影酸泛影酸碘番酸碘番酸磺溴磺溴酞钠三三氯叔丁醇叔丁醇碘苯碘苯酯3.中国药科大学药物分析教研室含金属有机含金属有机药物物酒石酸酒石酸锑钾富富马酸酸亚铁卡巴卡巴胂金属有机金属有机药物物4.中国药科大学药物分析教研室定量分析定量分析样品前品前处理方法理方法不不经有机破坏有机破坏的分析方法的分析方法直接直接测定法定法经水解后水解后测定法定法直接回流后直接回流后测定法定法硫酸水解后硫酸水解后测定法定法经氧化氧化还原后原后测定法定法碱性碱性还原后原后测定法定法酸性酸性还原后原后测定法定法利用利用药物中可游离的金属离子的氧化物中可游离的金属离子的氧化性性测定含量定含量5.中国药科大学药物分析教研室经有机破坏有机破坏的分析方法的分析方法湿法破坏湿法破坏HNO3-HClO4HNO3-H2SO4H2SO4-MSO4干法破坏干法破坏氧瓶燃氧瓶燃烧法法6.中国药科大学药物分析教研室空心空心A.燃燃烧瓶瓶B.铂丝网网C.D.盛固体盛固体样品品滤纸及其折叠法及其折叠法E.F.G.称取液体称取液体样品方法品方法7mm50mm30mm尾部尾部7mm13mm20mm25mm35 6mm16 6mm滤纸滤纸AGFEDCB氧瓶燃氧瓶燃烧装置及称装置及称样方法方法7.中国药科大学药物分析教研室氧瓶燃氧瓶燃烧法法样品品吸收液吸收液测定方法定方法含含氟氟有机有机药物物H2OpH4.3HAc-NaAcBuffer茜素氟茜素氟蓝分光光度法分光光度法含含氯有机有机药物物NaOH溶液溶液银量法量法汞量法汞量法分光法分光法含含溴溴有机有机药物物H2O2-NaOH液液或或NaOH液液-银量法量法分光法分光法硫酸硫酸肼饱和液和液含含碘碘有机有机药物物NaOH液液-银量法量法碘量法碘量法硫酸硫酸肼饱和液和液汞量法汞量法分光法分光法8.中国药科大学药物分析教研室碘苯碘苯酯含量含量测定定取本品取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃，精密称定，照氧瓶燃烧法法进行有机行有机破坏，用破坏，用NaOHT.S.2ml与与H2O10ml为吸收液，待吸收液，待吸收完全后，加吸收完全后，加溴醋酸溴醋酸溶液溶液10ml，密塞，振，密塞，振摇放置放置数分数分钟，加，加甲酸甲酸约1ml，用水洗，用水洗涤瓶口，并通入空气瓶口，并通入空气流流约35min，以除去剩余的溴蒸气，加，以除去剩余的溴蒸气，加KI2g，密塞，密塞，摇匀，用匀，用Na2S2O3液液(0.02mol/L)滴定，至近滴定，至近终点点时，加淀粉指示液，加淀粉指示液，继续滴定至滴定至蓝色消失，并将滴定的色消失，并将滴定的结果用空白果用空白试验校正。每校正。每1ml的硫代的硫代钠液液(0.02mol/L)相当于相当于1.388mg的的C19H29IO2C19H29IO2分子量分子量为416.349.中国药科大学药物分析教研室二、药品品质量量标准分析方法准分析方法验证指指导原原则药品品质量量标准分析方法准分析方法验证药物制物制剂人体生物利用度和生物等效性人体生物利用度和生物等效性试验指指导原原则药物物稳定性定性试验指指导原原则缓释、控、控释制制剂指指导原原则微囊、微球与脂微囊、微球与脂质体制体制剂指指导原原则细菌内毒素菌内毒素检查法法应用用指指导原原则10.中国药科大学药物分析教研室 第三第三节药品品质量量标准分析方法准分析方法验证目的：证明所采用的分析方法适合于相明所采用的分析方法适合于相应的的检测要求要求 效能指标：评价分析方法的尺度价分析方法的尺度效能指标包括:精密度精密度,准确度准确度,检测限限,定量限定量限,选择性性,线性与范性与范围,耐用性耐用性11.中国药科大学药物分析教研室(1)准确度（准确度（accuracy）：测量量值与真与真实值接近的程度接近的程度表示表示:回收率回收率测定方法：回收定方法：回收试验加加样回收回收试验12.中国药科大学药物分析教研室(2)精密度（精密度（precision）：）：定定义:同一同一样品多次品多次测量量值之之间相互接近的程度相互接近的程度表示：表示：标准偏差准偏差(s),相相对标准偏差准偏差(RSD)重复性重复性:同一同一实验室室,同一人多次同一人多次测定的精密度定的精密度中中间精密度精密度:同一同一实验室，不同人，不同室，不同人，不同仪器器测定的精密度定的精密度重重现性性:不同不同实验室，不同人室，不同人测定的精密度定的精密度13.中国药科大学药物分析教研室(3)专属性（属性（specificity）指有其他成分（指有其他成分（杂质、降解物、降解物、辅料等）可能料等）可能存在情况下采用的方法能准确存在情况下采用的方法能准确测定出被定出被测物的物的特性特性)。14.中国药科大学药物分析教研室(4)检测限限（limitofdetection，LOD）：药物能被物能被检出的最低出的最低浓度度(g/ml)测定定:信噪比法信噪比法(S:N=3:1)(5)定量限定量限（1imitofquantitation，LOQ）：）：药物能被定量物能被定量测出的最低出的最低浓度度(g/ml)测定定:信噪比法信噪比法(S:N=10:1)15.中国药科大学药物分析教研室(6)线性与范性与范围（linearityandrange）：）：待待测物物浓度与响度与响应值成成线性关系的性关系的浓度范度范围线性关系：性关系：Y=a+bx（r=0.9999)线性程度：相关系数性程度：相关系数(7)耐用性耐用性（robustness）:测定条件稍有定条件稍有变动时，对测定定结果的影响程度果的影响程度影响因素：被影响因素：被测溶液的溶液的稳定性，流定性，流动相的相的组成和成和pH，商品柱的品牌，柱温等商品柱的品牌，柱温等16.中国药科大学药物分析教研室检验项目和目和验证内容内容项目内容目内容鉴别杂质测定定含量含量测定定及溶出量及溶出量测定定定量定量限度限度准确度准确度精密度精密度重复性重复性中中间精密度精密度专属性属性检测限限定量限定量限线性性范范围耐用性耐用性已有重已有重现性性验证，不需不需验证中中间精密精密度度如一种方如一种方法不法不够专属，可用属，可用其他分析其他分析方法予以方法予以补充充视具体情具体情况予以况予以验证17.中国药科大学药物分析教研室第四第四节、生物、生物样品分析的基本步品分析的基本步骤1.药物从蛋白物从蛋白结合或合或缀合物中合物中释出出蛋白蛋白变性：如性：如应用三用三氯醋酸、醋酸、HClO4、有机、有机溶溶剂(乙醇、丙乙醇、丙酮、乙、乙腈)使蛋白沉淀使蛋白沉淀盐酸水解酸水解酶消化法：最常使用蛋白水解消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶中枯草菌溶素素(一种一种细菌性蛋白分解菌性蛋白分解酶，可在，可在pH7.011.0使使肽键降解降解)18.中国药科大学药物分析教研室19.中国药科大学药物分析教研室样品品固相固相净化化 及及反相高效液相色反相高效液相色谱法法测定血定血浆中茶碱中茶碱 血浆样品0.5ml+0.8ml内标液(0.01mg/ml咖啡因)+2ml甲醇 上清液加于2g Al2O3柱，用甲醇洗脱 收集洗脱液 用空气流挥干 残渣以50.0l流动相溶解 上清液10l进样伍朝筼等 药学学报,1989,24(10):769773旋涡振荡0.5离心15(3000r/min)离心617000r/min20.中国药科大学药物分析教研室血血浆样品品净化化后后空白血空白血浆净化化前前空白血空白血浆Column Zorbax C18 5m 2.5cm4.6mm 254nmPrecolumn YWG-ODS 9-11m 54.6mmMobile Phase:甲醇-醋酸钠(0.05mol/L pH3.0)500512 8 4 0min茶碱咖啡因12 8 4 0min12 8 4 0min21.中国药科大学药物分析教研室50 100 150 200252015105茶碱(g/ml)(min)五例病人血浆茶碱浓度测定6.412.819.225.6 3232.41.81.20.60茶碱(g/ml)标准曲线Y=9.56610-2X+6.15310-3 r=0.999522.