DB41∕T 1810-2019 曲茎石斛培养基播种育苗技术规程.pdf

ICS 65.020.01 B 30 DB41 河南省地方标准 DB41/T 18102019 曲茎石斛培养基播种育苗技术规程 2019 - 03 - 19 发布 2019 - 06 - 19 实施 河南省市场监督管理局 发 布 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 I 目 次 前言 . . II 1 范围 . . 1 2 规范性引用文件 . . 1 3 术语和定义 . . 1 4 制种 . . 1 5 培养基配方 . . 2 6 培养基播种育苗 . . 3 7 炼苗与移栽 . . 3 8 种苗出床分级 . . 5 附录A（资料性附录） 曲茎石斛播种培养基配方 . . 7 附录B（规范性附录） 曲茎石斛瓶苗分级 . . 8 附录C（资料性附录） 曲茎石斛病害防治方法 . . 9 附录D（资料性附录） 曲茎石斛虫害防治方法 . . 10 附录E（规范性附录） 曲茎石斛出床种苗分级 . . 12 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由河南省林业局提出并归口。 本标准起草单位：国有南阳市黄石庵林场、河南伏牛山国家级自然保护区黄石庵管理局。 本标准主要起草人: 高立献、贾赛、张天鹏、高萨娜、王冰、裴新苗、郭利华、何西豪、吴中州、常玮、焦铸锦、董江伟、乔世锴、王玲、王君、薛建敏、薛冰。 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 1 曲茎石斛培养基播种育苗技术规程 1 范围 本标准规定了曲茎石斛培养基播种育苗的术语和定义、制种、培养基配方、培养基播种育苗、炼苗与移栽、种苗出床分级。 本标准适用于曲茎石斛培养基播种育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 496 肥料合理使用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 曲茎石斛Dendrobium flexicaule Z.H.TSi,S.C.Sun et L.G.XU 兰科石斛属多年生草本植物， 附生。 茎圆柱形平卧或斜展， 显著廻折弯曲， 茎长4 cm11 （15） cm,叶24枚互生于茎上部，总状花序，具12朵生于无叶的茎上部，花冠黄绿色展开后粉白色，花瓣长 2.5 cm2.8 cm,中宽1.3 cm，唇瓣具紫色斑块，花期5月。散生于伏牛山海拔800 m1200 m的阴坡、半阴坡山谷的岩石上。 3.2 培养基播种苗 将植物种子直接播种在培养基上，在环境因子可控条件下生产出来的苗体。 3.3 原球茎 兰科植物种子萌发过程中，由种胚形成的扁形球状物。 3.4 无根苗 在曲茎石斛培养基播种中，由圆球茎诱导发育用于扩繁的无根苗体。 4 制种 4.1 母株选择 选择原产伏牛山区植株健壮，无病虫害的曲茎石斛作为制种母株。 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 2 4.2 母株管理 4.2.1 温湿度 母株宜置于荫棚设施中进行培育， 在冬季花芽分化期间夜间温度13 15 ， 白 天 18 20 ；或在阴棚中自然温度越冬。保持60%70%的空气湿度，干旱时及时补水，生长基质严防积水。 4.2.2 施肥 每年的5月开始，宜每15 d施1次腐熟的80100倍液的稀释薄饼肥，入冬后宜施0.1%0.05%的磷酸二氢钾或其它适量磷钾肥。 4.2.3 通风 不定期的打开棚内通风口，经常保持空气流动。 4.3 授粉 4.3.1 授粉方式 同种源异株异花授粉为佳。 4.3.2 授粉时间 自然开花后第 3 d4 d 时授粉，以晴天下午 16:0018:00 点为佳。 4.3.3 授粉方法 将母本花上的唇瓣先摘掉， 然后用牙签或镊子尖头拨开药帽后去除花粉块； 同样方法摘掉父本上的唇瓣，用牙签或镊子尖头取出黄色花粉块，置于容器内或纸上，以备授粉。父母本相近时，可直接进行授粉。 授粉时用牙签或镊子将花粉块轻轻放在已去除花粉块的母本合蕊柱下部凹陷的柱头上 （蕊腔内） ，轻轻压紧或用牙签将蕊柱腔的黏液全部粘上花粉块。 4.3.4 授粉管理 授粉后，应及时挂牌，注明父母本名称、产地、授粉时间、编号等内容，挂在授粉后的花枝上。授粉后7 d左右，若花瓣萎缩，子房开始膨大变绿并能看到果实邹形，说明授粉成功。在花朵完全枯萎后，可向母株喷洒1：1000倍的磷酸二氢钾溶液补充营养，促进果实发育成长。授粉后120 d140 d果实成熟。 4.4 果实采收 10月下旬11月上中旬， 当蒴果开始由绿变黄成熟未开裂前采收， 采收后用纸巾包裹后放入塑料封口袋中，置4 冰箱中保存备用。 5 培养基配方 5.1 基本培养基选择 基本培养基选择为MS。 5.2 培养基配方 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 3 曲茎石斛培养基播种育苗各阶段培养基配方参见附录A。 6 培养基播种育苗 6.1 种子萌发培养 6.1.1 蒴果清洗消毒 将经过后熟未开裂的蒴果，放在流水中洗去表面的灰尘杂质，用牙刷蘸取浓度为10%体积分数的洗洁精溶液刷洗果实表面并浸泡20 min，然后用流水冲洗1 h。在超净工作台上用75%的酒精浸泡30 s，无菌水清洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡10 min后，用无菌水冲洗56次。 6.1.2 播种培养 在超净工作台上用无菌手术刀、 镊子将灭菌好的蒴果剖开， 用无菌镊子均匀撒布于种子无菌萌发诱导培养基（参见附录A）上，在培养瓶中进行固体培养，前期避光培养15 d后，采用光照培养。 6.2 原球茎增殖继代培养 播种培养60 d75 d后，将原球茎均匀地转接到培养瓶中的原球茎增殖继代培养基（参见附录A）上进行继代固体培养。 6.3 丛生芽分化培养 继代培养45 d60 d后，将原球茎均匀转接到培养瓶中的丛生芽分化培养基（参见附录A）上，进行固体培养。 6.4 壮苗生根培养 丛生芽分化培养60 d70 d后，将茎株高1 cm以上的无根苗挑出，转接到培养瓶中的壮苗与生根培养基（参见附录A）上进行固体培养。经过50 d的培育，瓶苗全部生根，生根数多在34条，当幼苗生根后，可继续培养70 d120 d即可出瓶炼苗。 6.5 培养条件 光照强度1500 Lx2000 Lx，光照时间10 h12 h/d，培养温度25 28 。 7 炼苗与移栽 7.1 大棚选址与构建 大棚设施应选在通风排水良好，水源丰富，交通方便无污染的开阔地段建造，大棚为镀锌钢管拱棚结构，宽度8 m，长度因地制宜，高度3.6 m，南北向设置，棚顶覆盖无滴薄膜（或不覆盖薄膜），拱棚架上边覆盖遮阳率为80%的黑色尼龙网，棚下部设防虫网。 7.2 大棚消毒 大棚炼苗7 d10 d前密闭，用45%百菌清烟熏剂每667 用量200 g进行熏蒸剂消毒处理，均匀放置后分别点燃、随即密闭烟熏2 h3 h。 7.3 苗床构建 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 4 苗床规格为长3.0 m，宽1.2 m，高0.5 m，床四周用高10 cm的塑料挡板做床围栏，下铺钢网，上铺塑料网，棚内栽植床分四行摆放。 7.4 基质消毒与铺设 苗床栽培基质为松树皮块. 基质材料规格为大块长2 cm3 cm， 小 块 长0.5 cm1.0 cm， 大块 占 80%，小块占20%，首先基质用水浸泡后，采用蒸汽杀菌的消毒方法处理基质材料，基质蒸煮温度为95 105 ，处理时间100 h120 h。基质铺设厚度为7 cm8 cm，大料放下层，小料放上层。 7.5 炼苗 石斛组培瓶苗在组培室内逐步降至室温处理7 d后，转移至种植大棚内，闭瓶炼苗3 d4 d。尔后先拧松瓶盖1 d左右，第2天至第3天逐步打开瓶盖，使其炼苗10 d15 d，在炼苗期间若发现有轻度感染瓶苗时，用多菌灵800倍液及时清洗消毒，苗体消毒5 min10 min后及时种植。感染严重的瓶苗及时移出大棚销毁。 7.6 出瓶移栽 7.6.1 出瓶 打开瓶盖后的组培苗瓶中加入60%的清水，然后将培养基摇散倒出，用流动的清水将培养基洗净，清洗中做到轻拿轻放。 7.6.2 瓶苗分级 将清洗干净的石斛瓶苗进行分级（见附录B）。 7.6.3 晾苗 在荫棚内按行平摊进行晾苗，至根系由青绿略变为泛白为宜。不应在阳光下和强风处晾苗。晾苗期间， 对石斛小苗根系及时喷雾补水， 水中加入少量的多菌灵溶液 （按正常使用量的1/6比例加入500倍液）和兰花营养液（正常使用量的1/6）。 7.6.4 移栽 栽植曲茎石斛组培瓶苗时间以每年45月为宜。丛行距10 cm10 cm，每床栽29行，每丛57株。栽植方法是把栽培基质扒个小穴， 将根系经过甲基托布津8001000倍液或多菌灵800倍液消毒过的石斛苗放入栽植穴内，根系展开，随即用扒起的基质料覆盖根系至根际处，并用小料覆盖小苗的根际处，栽后用手将每丛向上轻提一下，再把石斛小苗根颈处的基质小料扒开一点，使根际部稍裸露在外为宜。并薄薄撒小料一层，栽后及时浇一次定植水，以浇透为原则。 7.7 大棚育苗管理 7.7.1 温度控制 在生长季节，棚内温度控制在10 30 之间，夏天温度高于30 时采取浇水及通风降温，冬天低于0 时关闭大门或大棚顶覆盖薄膜保温。依大棚自然温度即可越冬和防止霜冻。 7.7.2 湿度控制 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 5 移栽后一周内棚内空气湿度宜保持在90%左右，定植后的7 d内大棚保持密闭。一周后棚内空气相对湿度在60%70%，幼苗叶片较干时应进行浇第二次定植水。以后床面见干时进行喷雾浇水，并逐渐打开通风，夏天高温季节湿度达到70%80%，并保持通风。 7.7.3 水分管理 7.7.3.1 水质要求 以pH值6.5左右的软水为佳，灌溉水质应符合GB 5084的要求。 7.7.3.2 浇水 曲茎石斛苗床栽植后，前2个月内基质以保持潮润为主，床面见干时应及时喷雾水。栽植2个月后，基质以保持湿润为主。 浇水以滴灌或喷灌为好， 不得冲灌。 一般夏季2 d3 d浇一次透水， 春秋季以7 d10 d浇一次透水，冬季以10 d12 d浇一次透水。当棚内空气相对湿度低于30%40%时应及时补水。在生长季节基质应较湿润，生长停滞期，基质以略干为宜。切忌积水烂根。 7.7.3.3 浇水时间 浇水时间宜为上午910点，下午56点。即夏秋季节日落前后浇，春季日出前后浇，冬季在中午浇水为佳。夏天浇水时，应选择在早晨或傍晚进行。 7.7.4 施肥 7.7.4.1 肥料选择 曲茎石斛种植施用果蔬和兰花专用叶面肥，应符合NY/T 496的规定执行。 7.7.4.2 施肥浓度 肥料使用最大浓度不超过0.1%， 一般气温30 以下的阴天施肥浓度为0.1%。 气温超过30 的晴天施肥浓度为0.05%。通过发酵灭菌处理过的沼液使用浓度为5070倍液喷施。 7.7.4.3 施肥时间与次数 栽植后的第一个月内勿施肥。曲茎石斛施肥可结合浇水进行。一般上午910点，下午56点为宜。曲茎石斛生长高峰期为每年48月，此时每月施肥2次，以施多元素复合叶面肥为主；分蘖前期（每年9月份施用2次）喷施0.1%的磷酸二氢钾以有效增加分蘖数。 7.7.5 除草除杂 及时清除大棚内的杂草杂物和床面上的杂菌，以免滋生虫害和成为病菌传播之处。 7.7.6 苗期病虫害防治 病害防治参见附录C，虫害防治参见附录D。农药使用应符合GB/T 8321的规定。 8 种苗出床分级 8.1 出床时间 种苗在每年45月应及时出床。 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 6 8.2 分级 种苗分级应符合附录E的规定。 8.3 包装和运输 将种苗摆放整齐放入塑料包装箱中，防雨淋。运输过程中注意通风保湿。 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 7 A A 附 录 A （资料性附录） 曲茎石斛播种培养基配方 曲茎石斛播种培养基配方见表A.1。 表A.1 曲茎石斛播种培养基配方 培养阶段 固体培养基配方 pH 值 诱导培养基 1/2MSNAA0.3 mg/L0.5 mg/L土豆泥 80 g/L活性炭 1 .5g/L2.5 g/L蔗糖 30 g/L琼脂 8 g/L 5.8 原球茎增殖继代培养基 1/2MS6-BA0.3 mg/LKT0.1 mg/L香蕉汁 100 g/L（或椰乳 100 g/L）蔗糖 25 g/L活性炭 1 g/L1.5 g/L琼脂 8 g/L 5.8 丛生芽分化培养基 1/2MS6-BA2 mg/LNAA0.3 mg/LIBA0.1 mg/L蔗糖 25 g/L活性炭 1 g/L1.5 g/L香蕉汁 80 g/L琼脂 8 g/L 5.8 壮苗生根培养基 1/2MSNAA1.0mg/LIBA0.2 mg/L香蕉汁 80 g/L蔗糖 30 g/L活性炭 1 g/L1.5 g/L琼脂 7 g/L8 g/L 或 MSNAA0.2 mg/LIBA0.5 mg/L香蕉汁 80 g/L +蔗糖 25 g/L活性炭1.5 g/L琼脂 8 g/L 5.8 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 8 B B 附 录 B （规范性附录） 曲茎石斛瓶苗分级 曲茎石斛瓶苗分级见表B.1。 表B.1 曲茎石斛瓶苗分级 等级 苗茎高 （cm） 茎粗/cm 侧 根 叶片数（片） 形态特征 条 粗/cm 长度/cm 3.0 以上 0.2 以上 23 以上 0.1 以上 2.0 以上 23 以上 茎根粗壮肥实， 透明完整， 叶色浓绿，外观良好，无病根烂根，无检疫性病虫害，无折茎断根。 2.52.9 0.150.2 23 0.1 以上 1.5 以上 23 以上 茎根肥实透明， 叶色浓绿， 根系完整， 外观良好， 无检疫性病虫害，无折茎断根，无病根烂根。 2.02.4 0.10.15 12 0.1 以上 1.0 以上 12 以上 茎株健康， 无检疫性病虫害， 无折茎断根，叶色绿，外观良好，无病根烂根。 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 9 C C 附 录 C （资料性附录） 曲茎石斛病害防治方法 曲茎石斛病害防治方法见表C.1。 表C.1 曲茎石斛病害防治方法 病害 种类 病源 危害部位与症状 危害时间与 发病条件 防治方法 软腐病 病源细菌Erwiniacarotovora subsp.carotovra 主要危害部位为叶片、 新芽、新叶、根茎苗。病原菌多从根茎处理浸染,也可以从害虫啃食的伤口叶或植株基部自然脱叶裂口或各种伤口处浸染危害。软腐病发病时叶片先出现水浸状的小斑点，随后扩大为圆形的褐色病斑，病斑的周围有杜渐的淡黄色晕，病叶最后会脱落，易从新芽、新叶的气孔浸入致病。 危害时间主要在夏季58 月为高发期。 发病条件主要是高温多湿环境。 1.对于有软腐病感染的处所， 夏天每半个月至 1 个月，冬天 12 个月 1 次，轮流喷 30.3%四环素 1000 倍液；或 77%氢氧化铜可湿性粉剂 400 倍液喷洒感染处所。 2.对于已感染软腐病的栽植园，苗床或盆栽石斛，每隔 8 d 12 d 1 次，连续 34 次，轮流喷洒 30.3%四环素 1000 倍液；或 18.8%链霉素 1000 倍液。 3.用 20%的恶霉灵乳油 1000 倍液或 70%甲基硫菌灵 500 800 倍液喷雾感染软腐病植株。 叶枯病 病原菌 Sylindrosporium.SP 危害部位：叶片。最先在叶片上产生黑色的小斑点，随后扩大为灰褐色-黑褐色的病斑，之后相近病斑融合成不规则的大型病斑，严重时叶片枯萎脱落。 危害时间 410 月，病菌喜冷凉潮湿条件，在多雨高湿情况下发病严重。 10%苯醚甲环唑粉 1500 倍液与代森锰锌 600 倍液混合均匀喷洒，每 10 d12 d 1 次，连续施用 23 次。 炭疽病 炭疽病病源真菌Colletotrichum gloeospo rioides 危害部位:叶片。 危害症状为病原由各种伤口或自然开口如（气孔、叶尖、叶缘）浸入，初期在叶片上出现淡绿色-淡绿黄色的圆形针尖状小斑点，而后斑点逐渐变成坏疽， 呈黑褐色并逐渐扩大。有时相邻的数个炭疽斑体，各自扩大并融合，形成不特定形状的大型炭疽病斑。 危害时间一般在 18 月。大多发生于高温、多湿植株拥挤、通风不良时易感染此病。 发病时期每隔 7 d10 d 1 次，连续 45 次，喷洒 80%代森锰锌可湿性粉剂 500 倍液；或 70%甲基代森锌可湿性粉剂 500 倍溶液；或 25%咪鲜胺 1500 倍液喷雾防治。 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 10 D D 附 录 D （资料性附录） 曲茎石斛虫害防治方法 曲茎石斛虫害防治方法见表D.1。 表D.1 曲茎石斛虫害防治方法 害虫种类 危害部位与症状 危害时间与条件 防治方法 介壳虫（Diaspisb oisduvalii) 主要危害曲茎石斛叶片。 危害症状是叶片发黄， 茎杆失水， 生长衰退死亡。 一般全年皆可危害，主要在49 月高温时，繁殖更快，危害更重。 因介壳虫类大多怕潮湿应特别注意茎叶上，浇水时淋洒不到的部位，如发现少数介壳虫时， 可以用手指、棉花棒或毛笔沾水刷虫体，并检查较隐密处是否有躲藏。较严重时用药物防治，可用 40%速扑杀乳油7001500 倍液喷雾；或用 1.8%阿维菌素 3000 倍溶液喷洒植株茎叶，7 d10 d 喷洒一次，连续 3 次。可用 5%啶虫脒乳油 2000 倍液 7 d10 d 喷洒一次，连续 3 次。 红蜘蛛 常危害叶片， 吸食汁液， 其聚集危害处常见到如锈蚀般的愈痕、 皱痕或极细小、 密集的红褐色咬痕。 叶片被害后出现淡黄色斑点， 并有一层丝网沾满尘土，叶片渐变焦枯。 危害时间一般在 4 10 月， 6 月危害盛期，78 月成灾，10 月转茎越冬。 干燥的环境条件下易发生，应增加空气湿度多喷水可预防发生。 红蜘蛛对石斛兰危害一般以薄叶种最为严重，但是叶片较厚的革质叶种类也很常见，因性喜干燥，平时浇水要注意叶背的淋湿，少量发生时，也可用棉花棒或毛笔沾水刷出虫体，也可喷施一般虫害用药即能根除，注意喷洒叶背。但虫体数量多危害严重时，则以 1.8%阿维菌素3000 倍液，7 d10 d 喷洒一次，连续 3 次；或用 20%达螨灵可湿性粉剂 30004500 倍，或 15%乳油30004000 倍喷雾防治。 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 11 表D.1 曲茎石斛虫害防治方法（续） 害虫种类 危害部位与症状 危害时间与条件 防治方法 蜗牛及蛞蝓 受害的叶片仅存淡白色的薄膜， 叶肉全部被吃光， 蛞蝓爬过的地方有明显的白色黏液带， 排除的粪便为绿色，长椭圆形，米粒大小。蜗牛主要危害石斛的茎叶， 受害的叶片先呈小孔眼状， 严重时将叶片吃光或是残缺齿状，嫩茎被咬折断。 危害时间为 410 月。洼地、水湿地和杂草丛生处易滋生蜗牛、蛞蝓危害。蛞蝓生活在阴暗潮湿的草丛、落叶或石块下，气温 11.5 18.5 ，土地含水量为 20%30%对蛞蝓生长发育最为有利。高于 26 ，低于 14 时，蛞蝓活动能力下降。蜗牛在高温多湿的季节繁殖最快，每年 5 月中旬10 月上旬是活动盛期， 多在 4 月5 月产卵于草根、枯叶或石块下， 69 月蜗牛活动旺盛，10 月下旬开始减少。 轻微危害或是零星发现时，可用手或镊子抓除，如果情况严重或无法手抓时在植材表面撒上6%聚乙醛饵剂诱杀，或在蜗牛、蛞蝓繁殖旺季每 667 用 8%四聚乙醛甲奈威(悬浮剂)50 mL 兑水 15 kg，均匀喷施床面，可使蜗牛蛞蝓触药死亡，一般 2 周后再施药一次效果更佳。或当清晨蜗牛潜入土中时（阴天可在上午），在栽植地撒生石灰带，使蜗牛沾上石灰失水死亡；或 1%的食盐水喷洒地面防治；人工捕杀也是灭蜗的有效方法之一，即每天日出前或傍晚或阴天活动时在土壤表面和绿叶上捕捉。 鳞翅目幼虫（Lepidoptera） 鳞翅目的幼虫主要是蝴蝶和蛾类的 幼 虫 ， 属 于 鳞 翅 目（Lepidoptera）害虫，是啮咬性的昆虫，以啃食叶片、嫩芽、苗株和花朵为主。 最常见的是斜纹夜盗蛾的幼虫， 在夜间从隐秘处爬出啃食， 吃饱后再爬回隐秘处躲藏， 受害症状为初期危害根茎， 迅速扩展至茎叶， 嫩芽、 苗株、 花朵等部位，严重时全株被吃光，留有残存茎叶，叶截面有不规则的锯齿状。 危害时间为 510 月，夏秋季高温环境下危害严重。 数量少时用手或镊子抓除，不易抓除或较严重时则以 50%西维因可湿性粉剂 800 倍溶液喷洒；或 25%氯氰菊酯乳油 3000 倍液喷雾防治， 每10 d12 d 1 次，连续喷 2 次；或用 1%苦参碱 1500 倍液喷雾防治。 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 18102019 12 E E 附 录 E （规范性附录） 曲茎石斛出床种苗分级 曲茎石斛出床种苗分级见表E.1。 表E.1 曲茎石斛出床种苗分级 等级 苗高/cm 茎粗/cm 侧 根 叶片数 （片） 形态特征 条 粗/cm 长度/cm 5.0 以上 0.3 以上 23 以上 0.1 以上 3.0 以上 34 以上 茎根粗壮肥实，透明完整，叶色浓绿，外观良好，无病根率 20%，无检疫性病虫害，无折茎断根。 4.04.9 0.250.3 以上 23 0.1 以上 2.5 以上 23 以上 茎根肥实透明完整，叶色浓绿，外观良好，无病根率20%，无折茎断根，无检疫性病虫害，根系较完整。 3.03.9 0.2 以上 12 0.1 以上 1.5 以上 12 以上 茎株健康，无检疫性病虫害，无折茎断根，叶色绿，外观良好，根系基本完整， 无病根率20%。 _ 河南省地方标准公共服务平台