GB 7300.501-2021 饲料添加剂 第5部分：微生物 酿酒酵母.pdf

书 书 书犐 犆犛 犆犆犛犅 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准犌犅 代替犌犅犜 饲料添加剂第部分：微生物酿酒酵母犉 犲 犲 犱犪 犱 犱 犻 狋 犻 狏 犲 狊犘 犪 狉 狋：犔 犻 狏 犲犿 犻 犮 狉 狅 狅 狉 犵 犪 狀 犻 狊犿狊犛 犪 犮 犮 犺 犪 狉 狅犿狔 犮 犲 狊犮 犲 狉 犲 狏 犻 狊 犻 犪 犲 发布 实施国 家 市 场 监 督 管 理 总 局国 家 标 准 化 管 理 委 员 会发 布书 书 书前言本文件按照 标准化工作导则第部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件是 饲料添加剂的第 部分。 已经发布了以下部分： 第 部分：氨基酸、氨基酸盐及其类似物 苏氨酸； 第 部分：氨基酸、氨基酸盐及其类似物甘氨酸； 第 部分：氨基酸、氨基酸盐及其类似物蛋氨酸羟基类似物； 第 部分：维生素及类维生素 抗坏血酸 磷酸酯盐； 第 部分：维生素及类维生素维生素油； 第 部分：维生素及类维生素甜菜碱； 第 部分：维生素及类维生素甜菜碱盐酸盐； 第 部分：矿物元素及其络（螯）合物碘化钾； 第 部分：矿物元素及其络（螯）合物亚硒酸钠； 第 部分：酶制剂木聚糖酶； 第 部分：酶制剂植酸酶； 第 部分：非蛋白氮尿素； 第 部分：防腐剂、防霉剂和酸度调节剂碳酸氢钠； 第 部分：着色剂胡萝卜素粉； 第 部分：调味和诱食物质谷氨酸钠。本文件代替 饲料添加剂饲用活性干酵母（酿酒酵母） ，与 相比，除编辑性改动外，主要技术变化如下：）更改了外观与性状要求（见 ， 年版的 ） ；）更改了酵母活细胞数的要求（见 ， 年版的 ） ；）更改了卫生指标（见 ， 年版的 ） ；）增加了酵母活细胞数检测方法的平板法（见附录） 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国农业农村部提出并归口。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： ； 本次为第一次修订。犌犅 引言饲料添加剂是指在饲料加工、制作、使用过程中添加的少量或者微量物质，包括营养性饲料添加剂和一般饲料添加剂。为便于使用，按照产品类别， 饲料添加剂分为以下 个大类： 氨基酸、氨基酸盐及其类似物； 维生素及类维生素； 矿物元素及其络（螯）合物； 酶制剂； 微生物； 非蛋白氮； 抗氧化剂； 防腐剂、防霉剂和酸度调节剂； 着色剂； 调味和诱食物质； 粘结剂、抗结块剂、稳定剂和乳化剂； 多糖和寡糖； 其他。本文件的产品酿酒酵母属于第大类微生物，因酿酒酵母是首个发布的产品标准，所以本文件以 编号，作为 的第 部分。犌犅 饲料添加剂第部分：微生物酿酒酵母范围本文件规定了饲料添加剂酿酒酵母产品的技术要求、取样、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存。本文件适用于以酿酒酵母为菌种，经液态发酵、脱水干燥而制得的饲料添加剂酿酒酵母。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数 饲料中水分的测定 分析实验室用水规格和试验方法 数值修约规则与极限数值的表示和判定 饲料标签 饲料中总砷的测定 饲料中铅的测定原子吸收光谱法 饲料中汞的测定 饲料中镉的测定方法 饲料中沙门氏菌的测定术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。技术要求 外观与性状淡黄色至淡棕黄色颗粒，具有酵母特殊气味，无腐败，无异臭味，无异物。 菌种鉴别应符合酿酒酵母（犛犪 犮 犮 犺 犪 狉 狅犿狔 犮 犲 狊犮 犲 狉 犲 狏 犻 狊 犻 犪 犲）的形态、生理生化和分子生物学特性。 理化指标应符合表的规定。犌犅 表酿酒酵母的理化指标项目要求酵母活细胞数（或个） 水分 酵母活细胞数测定方法采用附录中 平板法时，单位为；采用 染色法时，单位为个。 卫生指标应符合表的规定。表酿酒酵母的卫生指标项目要求铅（ ） 总砷（ ） 汞（ ） 镉（ ） 沙门氏菌 不得检出取样 采样原则样品的采集应遵循随机性、代表性的原则，采样过程应遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。 采样方法 应在同一批次产品中采集样品，每件样品的采样量应满足微生物指标检验的要求，一般不少于 。 独立包装小于、等于 的产品，取完整包装。 独立包装大于 的产品，应用无菌采样器从同一包装的不同部位分别采取适量样品，放入同一个无菌采样容器内作为一件样品。 采集样品的贮存和运输 应尽快将样品送往实验室检验。 应在运输过程中保持样品完整。 应在接近原有贮存温度条件下贮存样品，或采取必要措施防止样品中微生物数量的变化。试验方法除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水符合 中三级水的要求。犌犅 感官检验取适量试样置于干净白色纸片上，在自然光下观察其形态、色泽、有无杂质，嗅其气味。 菌种鉴别按附录执行，以平板法为仲裁法。 酵母活细胞数按附录执行。 水分按 执行。 总砷按 执行。 铅按 石墨炉原子吸收光谱法执行。 汞按 执行。 镉按 执行。 沙门氏菌按 执行。检验规则 组批以相同材料、相同的生产工艺，经连续生产或同一班次生产的同一规格的产品为一批，但每批产品不应超过 。 出厂检验外观与性状、酵母活细胞数、水分为出厂检验项目。 型式检验型式检验项目为本文件第章规定的所有项目。在正常生产情况下，每年至少进行一次型式检验。有下列情况之一时，亦应进行型式检验：）产品定型投产时；）生产工艺、配方或主要原料来源有较大改变，可能影响产品质量时；）停产个月以上，重新恢复生产时；犌犅 ）出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；）饲料行政管理部门提出检验要求时。 判定规则 所验项目全部合格，判定为该批次产品合格。 检验结果中有任何指标不符合本文件规定时，可自同批产品中重新加倍取样进行复检。复检结果即使有一项指标不符合本文件规定，则判定该批产品不合格。沙门氏菌指标不得复检。 各项目指标的极限数值判定按 中全数值比较法执行。标签、包装、运输和贮存 标签标签应符合 的规定。 包装包装材料应清洁卫生、并能防污染、防潮湿、防泄漏。 运输运输工具应清洁卫生、能防暴晒、防雨淋，不应与有毒有害的物品混装混运。 贮存室温贮存，仓库应通风、干燥、能防暴晒、防雨淋，有防虫、防鼠设施，不应与有毒有害的物质混贮。犌犅 附录犃（规范性）酿酒酵母菌种鉴别方法犃 形态鉴别犃 培养基犃 麦芽汁液体培养基：麦芽汁加水稀释至 （巴林糖度计） ， 高压蒸汽灭菌 。犃 麦芽汁琼脂培养基：麦芽汁加水稀释至 （巴林糖度计） ，加琼脂粉， 高压蒸汽灭菌 。犃 产孢子培养基：葡萄糖 ，氯化钾 ，酵母汁 ，醋酸钠 ，琼脂，用蒸馏水配制，装管， 高压蒸汽灭菌 ，搁置斜面。犃 马铃薯葡萄糖琼脂培养基：去皮马铃薯 ，葡萄糖 ，琼脂 ，自来水。将马铃薯洗净，去皮，切成小块，立即放入水中，以免被氧化。煮沸 ，经纱布过滤，滤液加水至，加入葡萄糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管， 高压蒸汽灭菌 。犃 在麦芽汁液体培养基中的生长 静置培养天后，菌体在液体培养基中紧密沉淀于底部，培养液清亮，不形成菌膜。取少量菌体于 倍显微镜下观察，细胞呈卵圆形或圆形，单个或成双，偶尔成簇状，细胞芽殖。细胞长与宽之比为，细胞大小分为大、中、小三型，大型细胞大小为（ ）（ ） ，中型细胞大小为（ ）（ ） ，小型细胞大小为（ ）（ ） 。犃 在麦芽汁琼脂培养基上的生长 培养天后，菌落大而湿润，微隆起或平坦，乳白色，表面光滑无褶皱，边缘整齐。犃 在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上的生长 培养天后，在马铃薯琼脂培养基上生长，无假菌丝或是有比较发达但不典型的假菌丝。犃 在产孢子培养基上的生长 培养天后，能产生子囊孢子，每囊有个个圆形光面的子囊孢子。犃 生理生化特性在麦芽汁琼脂斜面上，于 ， 培养，进行表 中的试验，以验证酿酒酵母生理生化特性。犃 分子生物学鉴定采用核酸序列分析法对菌株基因中 区和转录间区序列保守性进行分析。扩增菌株 区和序列，与 等国际核酸序列数据库中犛犪 犮 犮 犺 犪 狉 狅犿狔 犮 犲 狊犮 犲 狉 犲 狏 犻 狊 犻 犪 犲序列进行同源性比较，序列差异小于，则该菌株为酿酒酵母犛犪 犮 犮 犺 犪 狉 狅犿狔 犮 犲 狊犮 犲 狉 犲 狏 犻 狊 犻 犪 犲。犌犅 表犃 酿酒酵母生理生化特性试验项目结果试验项目结果糖类发酵碳源利用葡萄糖半乳糖，麦芽糖，蔗糖，蜜二糖，棉子糖，乳糖海藻糖，纤维二糖松三糖，乳糖半乳糖，麦芽糖，蔗糖，碳源利用氮源利用蜜二糖，棉子糖，纤维二糖海藻糖， 木糖山梨糖乙醇，甘油，山梨糖赤藓醇甘露醇肌醇熊果苷硝酸钾注：为阳性反应；为阴性反应。犌犅 附录犅（规范性）酵母活细胞数测定方法犅 第一法 平板法（仲裁法）按 第一法进行检测。检测时， 中 所“加入 无菌稀释液”的温度为 。犅 第二法 染色法犅 原理活酵母能将进入细胞的次甲基蓝染色液立即还原脱色，不被染色，而死酵母被染成蓝色，通过显微镜观察即可计算活细胞数。犅 试剂或材料犅 无菌生理盐水： 的氯化钠溶液。犅 次甲基蓝染色液：将 次甲基蓝， 氯化钾， 六水氯化钙， 碳酸氢钠， 葡萄糖，加无菌生理盐水溶解，并定容至 ，密封，室温保存。犅 仪器设备犅 显微镜：放大倍数 以上。犅 血球计数板。犅 血球计数板专用盖玻片。犅 分析天平：精度 。犅 恒温水浴：控温精度 。犅 试验步骤犅 称取 样品，精确至 ，准确加入 无菌生理盐水 ，振荡使充分分散，置 恒温水浴中活化。犅 将活化液振荡均匀，取酵母活化液 至一试管中，加入次甲基蓝染色液 ，摇匀，室温下静置染色 。犅 将盖玻片置于血球计数板计数室上，使之紧紧盖在血球计数板上。取 染色后的菌液（ ）到血球计数板和盖玻片结合处，让菌液自动吸入计数室。菌液中不应有气泡，静置 后，用显微镜观察计数。注：计数板通常有两种规格：一种是个大格中有 个中格，个中格又分 个小格，即 规格，用这种规格计数板，取左上、左下、右上、右下四个中格（即 个小格）进行计数。另一种是个大格分为 个中格，一个中格分为 个小格，即 规格，用这种计数板，则除了左上、左下、右上、右下四个中格外，还需加中央的一个中格（即 个小格）进行计数。注：盖玻片放置好后不要滑动，否则细胞也会移动，滴注后计数时处于水平状态。犅 用 接物镜和 接目镜找出方格后，换用 接物镜，调整微调至视野最清晰，开始计犌犅 书 书 书犌犅 数，当细胞处于方格线上时，计数原则：数上不数下，数左不数右。计出芽时，超过母细胞的二分之一者按细胞计，小于二分之一者忽略不计。染为蓝色的为死细胞，无色的为活细胞，只计活细胞数。注：在显微镜下观察酿酒酵母细胞形态为细胞卵圆形或椭圆形，大小为（ ）（ ） ，胞内可看到明显的细胞核。注：对每个样品重复计数两次，取其算术平均值。犅 结果计算每克试样中活细胞数犡，以数量计，数值以个表示，按式（ ）计算：犡犃 犿犖（ ）式中：犡 每克样品中活细胞数，单位为个每克（个） ；犃 所数小格内活细胞数，单位为个；犿 称取样品的量，单位为克（） ；犖 所数小格数，单位为个。取平行测定结果的算术平均值为测定结果。犅 精密度在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的 。 犅犌版权专有侵权必究书号： 定价： 元