西尼罗病的研究进展及诊断技术.pptx

单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2/3/2020,#,西尼罗病的研究进展及诊断技术,主讲人：练雨,导师：王鲜忠,学,号：,112016328001893,十,大导致动物死亡的疾病,埃博拉,-,大猩猩,壶菌病,-,蛙类和蝾螈,西尼罗脑炎,-,鸟类，人类和马,白鼻症,-,蝙蝠,炭疽,-,主要影响食草动物，同时会感染一些哺乳动物，包括肉食动物、人猿和人类,袋獾面部肿瘤,-,澳大利亚的塔斯马尼亚袋獾,犬瘟,-,肉食野生动物,衣原体病毒,-,考拉常患的性病,疥螨,-,影响超过,100,多种不同的物种，从澳大利亚袋熊，到红狐，欧洲猞猁和北美狼,瘟疫,-,臭名昭著的黑死病，鼠疫杆菌，野生啮齿动物,简介,西尼罗病是,由,西尼罗病毒（,(West Nile Virus,WNV,）引起的，是一种,人兽共,患病,。,近年来,西尼罗病毒病出现在欧洲和北美的温带区域，对人和动物的健康构成了威胁,。,西尼罗,病毒最初是,1937,年从乌干达西尼罗地区一名发热的妇女血液中分离出来而被发现，因此得名为西尼罗病毒。此后在以色列、法国、南非、阿尔及利亚和俄罗斯等国都有过暴发流行。,生物学特征,西尼罗病毒属于黄病毒科，黄病毒属，与乙型脑炎、圣路易脑炎、黄热病、登革热、丙型肝炎等病毒同属。,单股正链,RNA,病毒，约有,10000,11000,个碱基对，具有感染性。电镜下该病毒呈中等大小，直径,21nm,60nm,圆形颗粒，有囊膜，核衣壳蛋白,(C),、膜蛋白,(M),和包膜蛋白,(E),为病毒结构蛋白。,对有机溶剂，紫外线敏感。,流行病学,-,传染源,：,主要为鸟类。,超过,80%,的感染者只是轻微症状或无症状，其中只有约,1%,会发生脑炎并死亡，因此患者和隐形感染者也是该病毒的传染源。,流行病学,-,传染途径,传播途径主要是在蚊类和鸟之间循环，典型的鸟宿主虫媒病毒，蚊类主要是库蚊，在欧洲和北美尖音库蚊是主要媒介，在亚洲则是三带喙库蚊和致乏库蚊。,病毒在鸟体内循环，产生高水平的病毒血症,蚊子叮咬病鸟后被感染。,WNV,存在于蚊子的唾液腺里,当其再叮咬其它动物时即发生感染。,在干旱、蚊虫少的地区,可能存在蜱,鸟,蜱的传播周环。,流行病学,-,终末宿主,哺乳动物,因为人和马等哺乳动物感染,WNV,之后,只会引起短暂的低水平病毒血症,所以普遍认为其是终末宿主。,流行病学,-,发病主要季节,主要发生在夏末或秋初,而在美国南部的气候条件下,全年都可以发生。,临床症状,病鸟的症状包括厌食、失重、嗜睡和羽毛带血脱落,晚期鸟可有头颤动、绿尿酸,(,盐,),、,血尿、中心盲视、对周围环境无知觉、腿笨拙脆弱和死前严重颤动等症状,。,感染,WNV,存活者可能受脑部破坏或其他生理功能退化影响，包括干扰鸟的导航技能。对存活鸟机体内部病理损伤包括肾、胰和心脏的损伤。感染,WNV,后无症状的存活者不一定是没有损伤的,。,病毒存在部位,病毒血症,减弱后,病毒颗粒和病毒,RNA,仍可在一些鸟的组织中存在,。,在,鸟,卵巢和睾丸,组织中检测到病毒颗粒,增加了成鸟经卵传递病毒的可能性,。,有些,鸟,肾,中有高浓度病毒,25,种实验鸟大部分在感染期均可从,口腔和泄殖腔,中检测到病毒颗粒,这对粪,-,口传播的可能有重要提示,。,诊断方法,病原学,诊断,血清学诊断,分子生物学,诊断,诊断方法,病原学诊断,病毒分离鉴定,抗原捕获,基于,膜的电化学生物传感器技术,诊断方法,血清,学,诊断,补体,依赖性细胞,毒性反应,基于,微球的免疫测定,方法,表面,增强,拉曼散射,ELISA,方法,快速、重复性好、成本低、通量大，近年来发展迅速，已经建立,了,IgG,间接,ELISA,（,IgM,ELISA,）、,IgM,抗体捕获,ELISA,（,MAC,ELISA,）,和,阻断,ELISA,（,blocking,ELISA,）,等,诊断方法,分子生物学,诊断,Real-time,实时,快速反转录环介导恒温,扩增,依赖,核酸序列的扩增,技术,治疗及预防,目前临床尚无西尼罗病毒疫苗获准,上市,处在,临床试验阶段的有,ChimeriVax(,期临床,),、,WN-DEN4,(,期临床,),和,VRC303(,期临床,),，已有,3,种兽,用疫苗,West,Nile-Innovator,、,Vetera,和,Recom-bitek,获准,上市,治疗及预防,防止,蚊虫在春季的大量繁殖。可通过加强水体管理，使用,化学和,生物学方法阻断幼虫的繁殖。应储备足够的喷洒用化学,药物,，以应付携带,WNV,成蚊的大量出现,。,治疗及预防,个人防护：,加强,个人的防蚊意识，,蚊虫活动,高峰时间尽量减少外出，外出时应着长袖衣裤,等,治疗及预防,出入境,卫生,检疫：,加强,出入境卫生,检疫，,特别是在,WNV,流行季节，对来自流行区的货物、,交通运输,工具等应做好灭蚊,处理。,做好,动物特别是鸟类的入境,检疫工作。,对,来自流行区的人员，,如果出现,发热、头痛、皮疹、淋巴结,肿大,等相关症状，应提高警惕，进行相关实验室检查，一旦确诊,为,WNV,感染，应立刻采取相应措施，进行防蚊隔离,治疗。,国内现状,迄今为止，我国尚未发现,WNV,感染的临床病例,，,我国存在,WNV,传入的自然,条件：作为,WNV,宿主的鸟类品种繁多，,有多种,库蚊属蚊可以传播,WNV,，它们几乎分布于除内蒙古、,青海等,少数省份以外的我国各地,。,随着,国际交流的日益频繁，,WNV,传入我国,境内的可能性非常大,。,此外,，目前我国每年都有,相当数量,病因不明的病毒性脑炎临床病例，由于国内尚未对,WNV,引起,足够的重视及开展进一步研究，因此，也不能完全排除已,存在,WNV,感染病例的可能性，对,WNV,应提高警惕。,Thanks!,病毒分离与鉴定,病毒,检测,的,金标方法,该病毒的分离所需时间,长,、对样品,要求高，且需在生物,安全,级,以上实验室,进行,方法：将,脑脊髓液、血液或组织器官等样品的上清液,接种到,Vero,、,RK-13,或,AP61,等,细胞单层，每天观察,细胞,病变,（,cytopathic effect,，,CPE,），如果,CPE,不明显可以,结合间接免疫荧光方法进行鉴定，也可以,使用分子生物学,方法进行检测。,抗原捕获,ELISA,用制备的非结构,蛋白,NS1,的单克隆抗体,和兔高免血清分别作为捕获抗体和,检测抗体,用,以,检测,感染,WNV,的,的非结构,蛋白,NS1,基于膜的电化学纳米生物传感技术,将,针对蛋白,结构,域,的,lg,抗体,作为,识别,WNV,粒子,的探针，建立了,基于膜,的电化学纳米生物传感技术用于,检测,WNV,粒子或,病毒,的蛋白。,该,方法可以,检测个病毒粒子,/100mL,，,灵敏度非常高，可以,和,PCR,技术,相,媲美。,这种方法对于,病毒感染早期的诊断比较有用,，此时,宿主机体内尚未出现抗体,补体依赖性细胞,毒性反应,检测马血清,中,NS1,抗体,的检测,方法,将转染的细胞中稳定表达,的,WNV,g101,毒株,的,NS1,蛋白,作为抗原，灭活的待检血清和细胞孵育,后加入,补体，诱导细胞释放乳糖脱氢酶，通过检测,乳糖脱氢酶,从而检测,血清中,NS1,抗体,基于微球的免疫测定,方法,该技术基于抗原与微球的共价结合，用,流式细胞仪进 行检测,，,可在几小时内得到检测结果,.,用于检测接种,疫苗,或自然感染马的血清中,的,IgG,抗体,表面增强,拉曼散射,该方法,以蛋白包被,的纳米金为活性基底，以孔雀绿标记,的,A/G,蛋白,为报告分子,。,将包被蛋白,的纳米金粒子与兔,免疫血清孵育,然后,通过激光检测孔雀绿，从而产生,相应的表面,增强,拉曼散射信号,。,