天麻不同炮制品中化学成分的变化研究.pdf

人参研究GINSENG RESEARCH2023 年第 4 期天麻袁为兰科天麻属天麻Gastrodia elata Bl援的干燥块茎袁云南尧贵州尧四川为天麻的道地产区袁我国其他地区袁多以栽培为主遥 天麻性甘尧平袁归肝经袁有平肝尧息风尧止痉尧通络止痛的功效袁主要用于头痛眩晕尧肢体麻木尧半身不遂尧痉挛尧高血压等症1-2遥 现代药理学研究发现天麻还具有镇静镇痛尧催眠尧抗氧化尧抗炎等活性3遥 南北朝时期的叶雷公炮炙论曳中对天麻就有记载4袁现代天麻炮制方法主要有润制与蒸制两种2遥本文依据历史文献袁采用怨 种方法炮制天麻袁研究天麻炮制前后天麻中天麻素尧对羟基苯甲醇含量的变化情况及抗氧化活性的变化情况遥1 材料1.1 仪器HWS12 型电热恒温水浴锅渊上海-恒科技有限公司冤曰电热鼓风干燥箱渊上海-恒科学仪器有限公司冤曰VM-300S 漩涡混匀仪渊宁波市群安实验仪器有限公司冤曰BSA224S-CW 型电子天平渊赛多利斯科学仪器冤曰ReadMax1900Plus 型光吸收酶标仪渊上海闪普生物科技公司冤曰赛默飞Ultimate 3000 高效液相色谱仪遥1.2 试药天麻为人工种植品曰水为娃哈哈纯净水袁甲醇尧乙腈为色谱纯袁磷酸为分析纯曰天麻素渊四川省维克奇生物科技有限公司冤曰对羟基苯甲醇渊四川省维克奇生物科技有限公司冤曰Trolox曰辅料院生姜曰盐曰陈醋曰黄酒曰蜂蜜遥2 方法2.1 天麻炮制品的制备2.1.1 生品天麻洗净去除杂质遥2.1.2 天麻炒黄用天平称取天麻药材10g袁置锅中袁用文火炒制至表面微黄色袁取出袁放凉遥2.1.3 天麻炒焦用天平称取天麻药材10g袁置锅中袁用大火炒至表面焦黄色袁断面色加深为度袁取出袁放凉遥2.1.4 天麻炒炭用天平称取天麻药材10g袁用武火炒至表面焦黑色袁出现火星袁少量淋水浇灭袁取出袁晾干遥2.1.5 盐制天麻用天平称取天麻药材10g袁称取0.5g 食盐加水溶化袁先将药材用大火炒至外皮焦黑色袁边炒边喷淋盐水袁待盐水喷完袁将药材炒干袁取出袁放凉遥2.1.6 姜制天麻用天平称取天麻药材10g袁称取3.3g 生姜袁将生姜置锅中袁加适量水煮袁过滤袁残渣再加水煮袁再过滤袁合并两次生姜的滤液袁适当浓缩袁加入天麻充分闷润袁等姜汁被吸尽后袁再用文火炒干袁取出袁放凉遥2.1.7 酒制天麻用天平称取天麻药材10g袁称取3.3g 黄酒加少量水稀释袁先将药材用大火炒至外皮焦黑色袁边炒边喷淋稀释的黄酒袁待黄酒喷完袁将药材炒干袁取出袁放凉遥2.1.8 醋制天麻用天平称取天麻药材10g袁称取3.3g 陈醋加少量水稀释袁先将药材用大火炒至外皮焦黑色袁边炒边喷淋稀释的陈醋袁待陈醋喷完袁将药材炒干袁取出袁放凉遥2.1.9 蜜制天麻用天平称取天麻药材10g袁称取2.5g 蜂蜜加水溶化袁与天麻拌均袁再置于预热的锅中翻炒袁将药材炒干袁取出袁放凉遥2.2 标准溶液的制备混合对照品院分别取天麻素对照品6.45mg(纯度天麻不同炮制品中化学成分的变化研究单瑞梓1袁薄 旭1袁钟爱娇1,2*袁武子敬1,2*(1.通化师范学院医药学院袁通化 134002曰 2.通化师范学院吉林省长白山药用植物研究重点实验室袁通化 134001)摘要院目的采用9 种不同方法对天麻进行炮制袁考察炮制前后天麻中天麻素尧对羟基苯甲醇含量的变化情况及抗氧化活性的变化情况遥 方法采用HPLC 法测定天麻生品和各炮制品中天麻素和对羟基苯甲醇的含量袁并对不同炮制品进行DPPH 法抗氧化实验遥 结果炮制后姜炙天麻中天麻素含量最高曰炒黄后的天麻中天麻素含量最低曰醋炙天麻中对羟基苯甲醇的含量最高曰炒焦后的天麻中对羟基苯甲醇的含量最低曰炒炭后的天麻抗氧化效果高于其他炮制品遥 结论不同炮制方法对天麻中两种化学成分的含量是有影响的袁各炮制品的抗氧化活性也有差别遥关键词院天麻曰炮制曰天麻素曰对羟基苯甲醇曰含量基金项目院2022 年通化师范学院大学生创新创业训练计划国家级项目袁项目编号院202210202054曰通化师范学院2022 年大学生科研项目袁项目编号院XS22022遥作者简介院单瑞梓袁本科袁研究方向院中药学遥*通信作者院武子敬袁高级实验师袁研究方向院中药化学及药理学遥 耘原mail院.钟爱娇袁助教袁研究方向院中药化学成分分析遥 耘原mail院员员远缘远源猿猿园愿.DOI院10.19403/ki.1671-1521.2023.园4.00827人参研究GINSENG RESEARCH2023 年第 4 期98%)尧对羟基苯甲醇对照品3.125mg(纯度98%)袁精密称定袁 加甲醇超声处理使溶解袁 稀释至25mL袁 再取1ml 加乙腈颐水渊3颐97冤至5mL 容量瓶遥2.3 天麻液相样品的制备分别取天麻生品5.04g袁炒黄天麻5.02g袁炒焦天麻5.00g袁炒炭天麻5.01g袁醋炙天麻10.01g袁姜炙天麻9.17g袁盐炙天麻10.07g袁蜜炙天麻10.03g袁酒炙天麻10.01g遥 均用适量甲醇超声提取60min袁提取2 次袁合并提取液袁浓缩袁定容至25mL 容量瓶中遥2.4 天麻抗氧化活性样品的制备分别取天麻生品2.45mg袁炒黄天麻2.21mg袁炒焦天麻2.71mg袁炒炭天麻2.31g袁醋炙天麻2.48mg袁姜炙天麻2.66mg袁盐炙天麻2.57mg袁蜜炙天麻2.06mg袁酒炙天麻2.71mg遥 加1mL 甲醇溶解袁再将各样品进行梯度稀释袁备用遥2.5 液相条件色谱条件色谱柱为Ultimate Polar RP(4.6mm伊250mm袁5滋m)袁以乙腈为流动相A袁以0.05%磷酸溶液为流动相B袁 比例A颐B=3颐97曰 柱温为30益曰 流速为1.0mL 窑 min-1曰检测波长为220nm遥2.6 抗氧化实验取天麻各炮制品的提取物20mg袁 用甲醇定容到10mL 的容量瓶中袁进行梯度稀释袁参照文献5方法并在文献基础上进一步加以改进袁 在517 nm 处记录各样品的吸光度袁实验使用Trolox 用作阳性对照袁随后计算IC50值遥3 结果与讨论3.1 结果按照野2.5冶项色谱条件进样袁以天麻素和对羟基苯甲醇标准品的各成分质量浓度为横坐标(X)袁峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归袁结果可得各成分在线性范围内均呈现良好的线性关系袁 天麻素的回归方程Y=166.55X-0.2942渊R2=0.9999冤袁在12.9206.4滋g 窑 mL-1范围内呈良好的线性关系曰对羟基苯甲醇的回归方程Y=413.13X-0.2869渊R2=0.9999冤袁在6.25100.0滋g 窑 mL-1范围内呈良好的线性关系遥 测得天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的含量袁结果见表1遥 各样品的液相图谱详见图1耀10遥 天麻各炮制品的抗氧化结果详见表2遥表 1 天麻各炮制品中两种成分的含量表 2 天麻各炮制品的抗氧化结果图 1 标准品天麻素和对羟基苯甲醇的 HPLC 图图 2 天麻生品的 HPLC 图图 3 天麻炒黄的 HPLC 图单瑞梓等院天麻不同炮制品中化学成分的变化研究样品天麻素渊%冤对羟基苯甲醇渊%冤生天麻0.07350.0170炒黄0.00650.0119炒焦0.00860.0113炒炭0.03410.064醋炙天麻0.05460.2271酒炙天麻0.02580.1483姜炙天麻0.06160.1441盐炙天麻0.04260.1381蜜炙天麻0.07140.1287样品DPPH 法IC50渊滋g 窑 mL-1冤生天麻404.74依18.72天麻炒黄674.09依161.22天麻炒焦670.42依17.09天麻炒炭176.75依5.71醋炙天麻671.81依15.88酒炙天麻652.70依20.06姜炙天麻577.50依5.65盐炙天麻827.96依26.16蜜炙天麻951.00依26.50Trolox2.19依0.008228人参研究GINSENG RESEARCH2023 年第 4 期图 4 天麻炒焦的 HPLC 图图 5 天麻炒炙的 HPLC 图图 6 天麻醋炙的 HPLC 图图 7 天麻酒炙的 HPLC 图图 8 天麻姜炙的 HPLC 图图 9 天麻盐炙的 HPLC 图图 10 天麻蜜炙的 HPLC 图3.2 讨论根据上述的实验方法和实验结果袁天麻素的含量依次是天麻生品天麻炒炭天麻炒焦天麻炒黄曰而天麻炒炭后对羟基苯甲醇的含量依次是天麻炒炭天麻生品天麻炒黄天麻炒焦遥天麻经5 种辅料的炮制后袁天麻素的含量也略低于生品袁依次是天麻生品蜜炙天麻姜炙天麻盐炙天麻醋炙天麻酒炙天麻遥天麻加辅料炮制后对羟基苯甲醇的含量均有增加袁依次是醋炙天麻酒炙天麻姜炙天麻盐炙天麻蜜炙天麻遥 在抗氧化实验中袁天麻各炮制品对DPPH 自由基清除能力也各有不同袁依次是天麻炒炭天麻生品姜炙天麻酒炙天麻天麻炒焦醋炙天麻天麻炒黄盐炙天麻蜜炙天麻遥 从实验数据中发现袁天麻经过炮制后化学成分发生了变化袁天麻素的含量经过炮制后含量都降低袁而对羟基苯甲醇在加入辅料炮制后含量都有所增加遥对DPPH 自由基清除能力只有天麻炒炭的清除能力强于生品袁 其他炮制品均弱于生品袁也弱于阳性对照Trolox 的清除能力遥本实验只考察了两种化学成分袁天麻中还有其他的化学成分袁而对DPPH 自由基清除能力与这两种成分的含量没有必然联系袁影响DPPH 自由基清除能力的化学成分将是实验继续研究的方向遥参 考 文 献1国家药典委员会.中华人民共和国药典渊一部冤M.北京院中国医药科技出版社袁2020:59援2樊启猛,陈朝银,林玉萍,等.天麻的炮制研究与规范J.中成药,2013,35(08):1737-1741.3左雅敏,张煜,王燕,等.不同炮制方法对天麻 6个成分含量的影响与评价 J.贵州科学,2018,36(04):83-88.4刘宋 窑 雷敩.雷公炮炙论(辑佚本)M.上海:上海中医学院出版社,1986:67援5Lu Z,Zong C,Tu XX,at al.Antihyperglycemic,antioxidant activities of two Acer palmatum cultivars,and identifification of phenolics profifile by UPLC-QTOF-MS/MS:Newnaturalsourcesoffunctionalconstituents Industrial Crops and ProductsJ.2016,49:522-532.29