陕西3个主产区核桃凋落叶的化感活性及其代谢产物差异分析.pdf

54卷南 方 农 业 学 报 1198陕西3个主产区核桃凋落叶的化感活性及其代谢产物差异分析徐瑞1，郝苑汝1，鱼若萱1，卢璐1，葛香瑞1，孙琳娜1，陈鸿1，翟梅枝1，2*（1西北农林科技大学林学院，陕西咸阳712100；2陕西省核桃工程技术研究中心，陕西咸阳712100）摘要：【目的】探究纬度因子变化对核桃凋落叶化感活性及代谢产物的影响，为核桃凋落叶深度开发利用及核桃林下复合种植提供理论基础。【方法】以陕西3个主产区黄龙、临渭和商州的核桃凋落叶为试验材料，采用室内生物测定法，研究其水提取物及70%乙醇提取物对小麦的化感作用，筛选出最佳提取溶剂，通过液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）鉴定适宜溶剂提取物的成分，进一步探究最佳溶剂提取物对小麦和黑麦草的化感作用，筛选敏感受体。【结果】相同试验条件下，不同产区核桃凋落叶提取物得率不同，2种提取液颜色均随纬度降低而加深。相同浓度处理液的化感活性为醇提物水提物，乙醇可作为提取凋落叶中化感物质的适宜溶剂；对醇提物化感作用的敏感性程度为黑麦草小麦，黑麦草可作为后续试验的敏感受体。3个主产区核桃凋落叶的化感活性依次为黄龙临渭商州。3个主产区核桃凋落叶70%乙醇提取物共检出13类1139种代谢物，黄龙、临渭和商州分别检出601、716和664种，均以脂类和类脂化合物为主；凋落叶中相对含量大于1%的物质有7类（主要为有机酸类）27种，其中丁二酸、对羟基苯甲酸、苹果酸、右旋奎宁酸和石竹烯氧化物等5种化合物是已知的化感物质。【结论】不同产区核桃凋落叶提取物的化感活性随采样地纬度降低而减弱，可能是核桃生长环境的变化造成叶片中化感物质种类及含量不同，从而影响其提取物的化感活性。关键词：核桃；凋落叶；化感活性；代谢产物；主产区中图分类号：S664.1文献标志码：A文章编号：2095-1191（2023）04-1198-09收稿日期：2023-01-30基金项目：陕西省重点研发计划项目（2020NY-039，2023-ZDLNY-18）通讯作者：翟梅枝（1963-），https:/orcid.org/0000-0001-5624-247X，博士，教授，主要从事林源植物副产品活性成分研究工作，E-mail：plum-第一作者：徐瑞（1998-），https:/orcid.org/0000-0001-7037-9739，研究方向为林产化学资源利用，E-mail：南方农业学报Journal of Southern Agriculture2023，54（4）：1198-1206ISSN 2095-1191；CODEN NNXAABhttp:/DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.04.024Allelopathic activity and metabolite differences of walnut leaflitter in the three main producing areas of Shaanxi ProvinceXU Rui1，HAO Yuan-ru1，YU Ruo-xuan1，LU Lu1，GE Xiang-rui1，SUN Lin-na1，CHEN Hong1，ZHAI Mei-zhi1，2*（1College of Forestry，NorthwestA&F University，Xianyang，Shaanxi 712100，China；2Shaanxi Walnut EngineeringTechnology Research Center，Xianyang，Shaanxi 712100，China）Abstract：【Objective】To explore the effects of latitude factor on the allelopathic activity and metabolites of walnutleaf litter，so as to provide a theoretical basis for the deep development and utilization of walnut leaf litter and compositeplanting under walnut forest.【Method】Taking the leaf litter of walnut from Huanglong，Linwei and Shangzhou，the threemain production areas of Shaanxi Province，as research objects，the allelopathic effects of aqueous extract and 70%ethanolicextract on wheat were studied by indoor bioassay.The optimal extraction solvent was selected，and the appropriate solventextracts components were identified by liquid chromatography-tandem mass spectrometry LC-MS/MS to further explorethe allelopathy of the best solvent extracts on wheat and ryegrass and screen the sensitive receptors.【Result】Under thesame experimental conditions，the yield of walnut leaf litter extract varied in different producing areas，and the colors oftwo extracts deepened with decreasing latitude.The allelopathic activity of the same concentration treatment solution wasethanolic extractaqueous extract，indicating that ethanol could be used as a suitable solvent for extracting allelopathicsubstances from walnut leaf litter.The sensitivity level to the allelopathic effect of ethanolic extract was ryegrasswheat，indicating that ryegrass could be used as a sensitive receptor for subsequent experiments.The allelopathic activity of walnut4期11990引言【研究意义】化感作用指植物通过释放化学物质到环境中，对其邻近植物（含微生物）及其自身产生直接或间接的有害或有益作用（师小平等，2020），主要影响植物生长发育和生理代谢过程。核桃（Juglans regia L.）是典型化感植物，在我国分布广泛。近年来，以核桃为主的农林复合种植产业不断发展，由于化感抑制作用的存在，复合系统中作物的正常生长发育会受到抑制，经济效益难以实现最大化（李胜繁，2022），但可通过充分利用农林废弃物，将上述化感抑制作用转为促进作用，同时减少合成化学品的使用、减缓环境恶化（Aci et al.，2022）。凋落物分解是植物释放化感物质最直接有效途径之一（Weir et al.，2004；Rukshana et al.，2014），核桃凋落叶生物量极大，是一种丰富的生物资源，探究核桃凋落叶的化感作用不仅能为核桃凋落叶高附加值利用提供科学参考，也有助于建立科学有效的核桃林下间作和套种模式，提高农林复合生产效益。【前人研究进展】目前关于核桃的化感作用研究主要集中在根、茎、叶、花、果及内果皮等部位（贾彩霞等，2021；王一峰等，2021），且核桃青叶具有较明确的化感活性（orevi et al.，2022）。张如义等（2016）的研究显示核桃凋落叶腐解液在低浓度下促进萝卜（Raphanus sativus L.）种子的发芽及生长，而高浓度下则会抑制其种子萌发，并通过影响植物体内渗透调节物质的积累、破坏细胞膜系统和减弱抗氧化酶活性，以抑制幼苗的正常生长发育。贾孟等（2021）研究指出核桃凋落叶腐解后会导致土壤硝态氮、铵态氮和脲酶等主要土壤环境因子发生显著改变。目前大多数研究主要集中在同一立地条件下核桃凋落叶对不同受体的影响，而植物的化感作用与其生长环境密切相关，植物为增强自身生存竞争能力，会通过化感作用来应对环境改变和其他生物的入侵（孔垂华等，2016；Kong et al.，2019）。化感物质多为植物的代谢产物，植物叶片代谢物质种类及含量是植物响应外界环境变化的重要性状（赵玮晗等，2022）。徐郑等（2015）采用气相色谱质谱（GC-MS）检测核桃凋落叶中代谢物质发现，川西核桃凋落叶的潜在化感物质相对含量高于秦巴山区，且盆栽试验结果表明川西核桃凋落叶分解对小白菜产生的化感作用比秦巴山区强。说明核桃凋落叶中次生物质随生境变化而不同，其化感活性也会受到直接影响。【本研究切入点】目前有关不同生长环境下核桃凋落叶提取物的化感活性及其代谢产物的研究尚未见报道。【拟解决的关键问题】以陕西渭北、关中和陕南3个核桃主产区不同气候土壤条件下的核桃凋落叶为研究对象，采用室内生物测定法，选取生长快、反应敏感的小麦（Triticum aestivum L.）及黑麦草（Loliumperenne L.）为受体植物，探究核桃凋落叶提取物对其种子萌发及幼苗生长的化感效应，筛选出适宜的化感物质提取溶剂及敏感受体，并借助液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）分析鉴定3个主产区核桃凋落叶最佳溶剂提取物的化学成分，明确不同生长环境下核桃凋落叶中代谢物质种类及含量，综合分析3个主产区核桃凋落叶的化感活性，为有效利用核桃凋落叶资源及构建合理的核桃林下复合种植模式提供理论支撑。1材料与方法1.1采样地概况在陕西境内，选择延安黄龙县、渭南临渭区和商洛商州区3个不同气候、土壤条件的10年生核桃园为采样点，种植均为陕西主栽核桃品种香玲。其中，黄龙县位于陕西中北部，属渭北旱塬区；临渭区位于陕西关中地区东部，属西北黄土高原区；商州区位于陕西东南部，属陕南土石山区。3个采样点地理坐标、土壤及生态气候条件详见表1。1.2试验方法1.2.1核桃凋落叶采集于2021年11月中下旬采集核桃凋落叶。每个采样点选择3块标准地，标准地大小30 m20 m。按照五点采样法在每块标准地内leaf litter in different producing areas was in the order of HuanglongLinweiShangzhou.A total of 1139 metabolites in13 categories were detected in the 70%ethanolic extract of walnut leaf litter from the three regions.A total of 601，716 and664 metabolites were detected in Huanglong，Linwei and Shangzhou respectively，all of which were mainly lipids and lipid-like compounds.There were 7 types and 27 species of metabolites with a relative content greater than 1%in leaf litter，mainly organic acids.Five of these metabolites，including succinic acid,4-hydroxybenzoic acid，malic acid，quinic acid andcaryophyllene oxide，were known allelopathic substances.【Conclusion】The synthetic allelopathic effects of walnut leaf litterextracts from the different producing areas decrease with the decrease of sampling latitude，which may be due to changesin the walnut growth environment causing different types and contents of allelopathic substances in the leaves，therebyaffecting the allelopathic activity of the extracts.Key words：walnut；leaf litter；allelopathic activity；metabolites；main producing areasFoundation items：Shaanxi Key Research and Development Plan Project（2020NY-039，2023-ZDLNY-18）徐瑞等：陕西3个主产区核桃凋落叶的化感活性及其代谢产物差异分析54卷南 方 农 业 学 报 1200设置5个1 m1 m小样方，收集15个小样方内地表上的核桃凋落叶为一个采样点样品，带回实验室除杂、晾干、混匀、装袋，并置于阴凉通风处贮存备用。1.2.2核桃凋落叶粗提物及处理液制备粗提物制备：分别取粉碎后过60目筛的每个主产区核桃凋落叶粗粉各2份，每份50 g加入锥形瓶中，按1 10（W V）分别加入500 mL蒸馏水和500 mL 70%乙醇溶液，超声波辅助提取（时间30 min，温度30，功率100 W）后过滤，残渣按上述方法再依次加入300和200 mL溶剂继续浸提2次，最后合并滤液，分别减压浓缩得水提物和醇提物浸膏，每处理3次重复，计算提取物得率，4 下保存备用。用于处理液制备和LC-MS/MS测定分析。处理液制备：称取适量浸膏，用无菌水分别配制成1、5、10、20和40 mg/mL水提物处理液（水提处理）和醇提物处理液（醇提处理）。1.2.3室内生物测定试验采用培养皿滤纸法进行室内生物测定（王田涛等，2021）。最佳提取溶剂筛选试验中，受体植物为周麦18小麦种子（由西北农林科技大学农学院提供），处理液分别为不同浓度的水提物及醇提物处理液；敏感受体筛选试验中，以上述周麦18小麦种子及黑麦草种子（购买于当地种子商店）为受体植物，处理液为不同浓度的最佳溶剂提取物处理液。试验方法：选取大小均一、籽粒饱满的受体种子，用0.3%高锰酸钾溶液消毒10 min，用无菌水冲洗干净并浸泡使其吸胀以利发芽。在90 mm灭菌培养皿中放入2层无菌滤纸，各皿分别加入配制好的处理液10 mL，以无菌水为对照（CK），按55将25粒种子整齐摆放在滤纸上，在（221）、相对湿度80%、光照4000 lx、12 h/12 h（光/暗）条件下培养，每个处理设3个重复。1.2.4幼苗外观、萌发指数及化感效应测定自培养起计时，每24 h统计发芽数，以胚芽（根）长1 mm为发芽标准，于第7 d测量幼苗芽长及最长根长度；参照王田涛等（2021）的方法计算各发芽指标及化感效应指数（RI）：发芽率（%）=第7 d发芽种子总数/供试种子总数100发芽势（%）=自培养起3 d内发芽种子数/供试种子总数100发芽指数（GI）=（Gt/Dt）式中，Gt为第td种子发芽数，Dt为相应种子发芽天数。RI=1-C/T（TC）或RI=T/C-1（T0为促进作用，RI0为促进效应，SE0为抑制效应，以其绝对值大小衡量粗提物化感活性的大小。1.2.5代谢产物LC-MS/MS分析将前期经室内生物测定筛选出来化感活性较强的不同产地核桃凋落叶醇提物样品送北京诺禾致源科技股份有限公司进行LC-MS/MS检测和分析，代谢产物各成分相对百分含量用峰面积计算。色谱条件：色谱柱Hyper-sil Gold column（100.0 mm2.1 mm，1.9 m）；进样量100 L；柱温40；流速0.2 mL/min；正模式：流动相A（体积分数0.1%甲酸），流动相B（甲醇）；负模式：流动相A（5 mmol/L醋酸铵、pH 9.0）、流动相B（甲醇）。色谱梯度洗脱程序见表2。质谱条件：离子源，电喷雾离子源；离子源温度320；扫描方式正负离子扫描；扫描范围1001500 m/z；喷雾电压3500 V；鞘气流速35 psi；辅助气流速10 L/min。采样点Sampleplot黄龙Huanglong临渭Linwei商州Shangzhou地理坐标Geographicalcoordinate1095035E，35355N1093342E，34214N1095343E，335113N海拔（m）Altitude1080530719土壤类型Soiltype灰褐土塿土黄褐土气候类型Climatetype温带，半湿润易旱暖温带，半干旱季风暖温带，半湿润山地年均温（）Annual meantemperature10.211.412.9年日照时数（h）Annual meansunshine hours200020662150年均降水量（mm）Annual meanprecipitation549.3568715无霜期（d）Frost-freeperiod180210215时间（min）Time0.01.53.010.010.111.012.0流动相A（%）Mobile phaseA9898150989898流动相B（%）Mobile phase B2285100222表 1采样点基本信息Table 1Basic information of sample plots表 2色谱梯度洗脱程序Table 2Chromatographic gradient elution procedure4期12011.3统计分析由CD 3.1结合mzCloud数据库搭配mzVault及MassList数据库进行代谢物的定性与定量。使用Excel 2016整理试验数据，SPSS 17.0进行单因素方差分析和Duncan法多重比较，并由Origin 2023制图。2结果与分析2.13个主产区核桃凋落叶提取物得率及提取液颜色以蒸馏水和70%乙醇为溶剂提取3个主产区核桃凋落叶，水提物和醇提物的得率均在20.00%以上，3个主产区核桃凋落叶的醇提物得率均大于水提物得率，并均以商州的得率最高，分别为25.16%和24.32%，其次为黄龙（表3）。由图1可看出，水提液颜色偏棕红色，醇提液颜色偏黄绿色且透亮，且2种提取液颜色均随采样点纬度降低而加深。2.23个主产区核桃凋落叶提取物的化感活性2.2.1不同提取物处理液对小麦种子萌发及幼苗生长的影响由表4可知，水提和醇提处理的萌发指标（发芽率、发芽势、发芽指数）及其RI值均随浓度增加而降低，表明小麦种子萌发受到的抑制作用随浓度升高而加强。处理液浓度在1 mg/mL时，仅商州核桃凋落叶的水提处理对小麦种子萌发有轻微促进作用，其发芽率、发芽势和发芽指数相较于CK分别提高3.03%、6.91%和5.92%；处理液浓度为20 mg/mL时，黄龙核桃凋落叶的2种处理液对萌发指标的抑制作用均达显著水平（P临渭（-0.276）商州（-0.182），醇提处理的则依次为黄龙（-0.653）临渭（-0.611）商州（-0.539）。对比不同处理下的SE，3个主产区核桃凋落叶水提处理和醇提处理对小麦生长发育产生的SE均具有显著差异，表明各地区间核桃凋落叶化感活性的差异达显著水平；相同地区核桃凋落叶2种溶剂提取物处理液间的SE差异也显著，醇提物SE水提物SE。综上所述，3个主产区核桃凋落叶对小麦生长发育产生的化感抑制作用随纬度降低而减弱；醇提物的得率及其处理液的化感活性均高于水提物，说明乙醇可作为提取凋落叶中化感物质的适宜溶剂。2.2.2醇提物处理液对黑麦草种子萌发及幼苗生长的影响由表5可知，3个主产区核桃凋落叶醇提处理对黑麦草种子的萌发均产生抑制作用，且该作用强于小麦种子。随着浓度上升，黑麦草种子萌发受到的抑制作用加强。与CK相比，黄龙和临渭核桃凋落叶醇提处理浓度为1 mg/mL时，对黑麦草种子萌发的抑制作用未达显著水平（P0.05，下同），浓度5 mg/mL时均达显著水平；商州核桃凋落叶醇提处理浓度在5 mg/mL时，萌发指标值与CK相比差异不显著，而浓度10 mg/mL时差异显著。醇提处理浓度为1 mg/mL时，黄龙核桃凋落叶醇提处理产生的抑制作用相对于其余产区较强，相较于CK，其发芽率、发芽势和发芽指数分别降低4.23%、32.26%和22.78%；醇提处理浓度为40 mg/mL时，黄龙和商州核桃凋落叶处理液对萌发指标的抑制率均达100.00%，而临渭核桃凋落叶醇提处理产生的抑制作用均最弱。从各处理的芽长、根长及其RI值可看出，与小采样点Sample plot黄龙Huanglong临渭Linwei商州Shangzhou水提物得率Aqueous extract yield21.560.0420.020.1224.320.08醇提物得率Ethanolic extract yield21.900.0821.760.0425.160.28表 33个主产区核桃凋落叶提取物得率（%）Table 3Extraction yield of walnut leaf litter in the three mainproducing areas（%）图 13个主产区核桃凋落叶提取液颜色Fig.1Color of the extract solution of walnut leaf litter in thethree main producing areas徐瑞等：陕西3个主产区核桃凋落叶的化感活性及其代谢产物差异分析54卷南 方 农 业 学 报 1202采样点Sampleplot黄龙Huang-long临渭Linwei商州Shang-zhou提取方式Extrac-tionmethod水提醇提水提醇提水提醇提浓度（mg/mL）Concen-trationCK15102040CK15102040CK15102040CK15102040CK15102040CK15102040发芽率（%）Germinationrate88.004.00ab82.673.52ab（-0.06）74.677.42abc（-0.15）62.674.81bc（-0.29）50.6717.02cd（-0.42）21.334.81e（-0.76）88.004.00a84.004.00a（-0.05）74.674.80a（-0.15）64.0010.07ab（-0.27）40.002.31bcd（-0.55）16.002.31d（-0.82）88.004.00ab78.6711.40ab（-0.11）70.6710.91abc（-0.20）69.334.80abc（-0.21）65.333.53abc（-0.26）34.679.33de（-0.61）88.004.00a88.0010.07a（0.00）72.0010.07a（-0.18）62.674.80ab（-0.29）44.0016.65bc（-0.50）24.004.62cd（-0.73）88.004.00ab90.673.53a（0.03）85.339.33ab（-0.04）73.332.67abc（-0.17）72.008.00abc（-0.18）14.672.67e（-0.83）88.004.00a85.335.33a（-0.03）74.678.11a（-0.15）48.004.62bc（-0.45）32.001.22cd（-0.64）16.006.11d（-0.82）发芽势（%）Germinationenergy77.337.28ab73.335.33abc（-0.05）62.675.33abc（-0.19）50.672.67cde（-0.34）32.0010.06def（-0.59）16.002.31f（-0.79）77.337.28a50.672.67bc（-0.34）36.004.00cd（-0.53）29.334.81def（-0.62）13.331.33efg（-0.83）10.672.67efg（-0.86）77.337.28ab61.331.39a（-0.21）60.0010.07abc（-0.22）54.677.42bcd（-0.29）53.336.67bcd（-0.31）28.006.93ef（-0.64）77.337.28a61.3313.13ab（-0.21）26.675.81def（-0.66）24.002.30def（-0.69）16.0010.07defg（-0.79）13.334.81efg（-0.83）77.337.28ab82.673.53a（0.07）70.679.62abc（-0.09）54.673.53bcd（-0.29）53.3310.67bcd（-0.31）10.671.33f（-0.86）77.337.28a72.002.31a（-0.07）32.008.00cde（-0.59）13.335.33efg（-0.83）8.004.00fg（-0.90）1.331.33g（-0.98）发芽指数Germinationindex36.293.01ab32.571.41abc（-0.10）29.283.38abcd（-0.19）21.801.66def（-0.40）14.903.94efg（-0.59）6.331.16gh（-0.83）36.293.01a23.040.50cd（-0.36）16.071.70bc（-0.56）13.081.81ef（-0.64）8.461.09efg（-0.77）3.770.55g（-0.90）36.293.01ab27.005.09bcd（-0.25）26.874.09bcd（-0.26）26.621.27bcd（-0.27）24.501.28cde（-0.32）12.773.15fgh（-0.65）36.293.01a26.194.37bc（-0.28）15.242.34de（-0.58）12.851.61ef（-0.65）8.804.51efg（-0.76）5.601.80fg（-0.85）36.293.01ab38.442.42a（0.05）31.614.91abcd（-0.13）24.811.76cde（-0.32）23.363.39cde（-0.36）4.270.92h（-0.88）36.293.01a31.411.89ab（-0.13）16.213.14de（-0.55）7.911.37efg（-0.78）5.492.11fg（-0.85）1.940.49g（-0.95）芽长（cm）Shootlength7.610.39cd9.180.30ab（0.18）9.110.03ab（0.17）7.160.14d（-0.06）2.780.59ef（-0.63）1.310.21g（-0.83）7.610.39a4.860.69bc（-0.36）3.300.17de（-0.57）1.970.61ef（-0.74）1.370.29f（-0.82）1.040.17f（-0.86）7.610.39cd9.510.63ab（0.20）9.400.31ab（0.19）8.070.48bcd（0.05）3.910.99e（-0.49）2.200.86fg（-0.71）7.610.39a6.080.74b（-0.20）4.300.42cd（-0.43）2.990.42de（-0.61）0.840.11f（-0.89）0.650.15g（-0.91）7.610.96cd10.500.19a（0.27）10.400.50a（0.26）8.600.43bc（0.11）1.930.30fg（-0.75）1.000.16g（-0.87）7.610.39a8.320.69a（0.07）4.900.97bc（-0.36）1.200.53f（-0.84）0.920.19f（-0.88）0.520.16c（-0.93）根长（cm）Rootlength8.010.78bcd9.360.95b（0.15）8.610.18bc（0.07）5.530.30e（-0.31）2.360.24fg（-0.71）1.230.19fg（-0.85）8.010.78a6.840.66ab（-0.15）2.830.35cd（-0.65）2.420.87cde（-0.70）1.760.21de（-0.78）0.820.14de（-0.90）8.010.78bcd8.351.91bc（0.04）6.080.80cde（-0.24）5.771.01de（-0.28）2.680.23fg（-0.67）1.210.94fg（-0.85）8.010.78a6.400.56b（-0.20）4.150.72c（-0.48）2.820.35cd（-0.65）1.520.19de（-0.81）0.600.17e（-0.93）8.010.78bcd11.930.28a（0.33）10.500.78ab（0.23）8.281.00bc（0.02）3.740.43ef（-0.53）0.840.26fg（-0.89）8.010.78a8.780.45a（0.08）6.661.09b（-0.17）2.550.79cde（-0.68）1.700.40de（-0.79）0.910.30de（-0.89）SE-0.282c-0.653f-0.276b-0.611e-0.182a-0.539d表 43个主产区核桃凋落叶2种提取物处理液对小麦种子萌发及幼苗生长的化感活性Table 4Allelopathic activity of two extracts from walnut leaf litter in the three main producing areas on wheat seed germination andseedling growth同列数据后不同小写字母表示同种提取方式下各处理间差异显著（P0.05）。括号内数字表示RI。SE列数据后不同小写字母表示处理间差异显著（P0.05）。表5同Different lowercase letters in the same column indicated significant difference between treatments under the same extraction method（P0.05）.Num-bers in parentheses indicated RI.Different lowercase letters after SE column data indicated significant difference between treatments（P临渭（-0.649）商州（-0.645），同样呈随纬度降低化感活性减弱规律，且同一地区核桃凋落叶醇提处理处理下，黑麦草受到的SE小麦受到的SE，差异达显著水平。综上所述，黑麦草的生长发育受到3个主产区核桃凋落叶醇提处理的抑制作用均强于小麦，说明选择黑麦草作为受体植物更敏感。2.33个主产区核桃凋落叶醇提物代谢产物鉴定由LC-MS/MS鉴定结果可知，3个主产区核桃凋落叶醇提物中共鉴定出13大类1139种代谢物质（图2），脂类和类脂分子种类最丰富（22.4%），其次为苯丙酸类和聚酮类化合物（12.6%）及有机杂环化合物（10.1%）。通过韦恩图（图3）可看出，3个主产区核桃凋落叶代谢物种类分别为黄龙601种、临渭716种表 53个主产区核桃凋落叶醇提物处理液对黑麦草种子萌发及幼苗生长的化感活性Table 5Allelopathic activity of ethanolic extracts from walnut leaf litter in the three main producing areas on ryegrass seed germina-tion and seedling growth徐瑞等：陕西3个主产区核桃凋落叶的化感活性及其代谢产物差异分析0.5%0.1%0.1%0.6%0.7%2.4%8.0%9.0%9.2%10.1%12.6%22.4%24.3%Total=1139未确定分类化合物（24.3%）Non-classified compounds（24.3%）脂类和类脂分子（22.4%）Lipids and lipid molecules（22.4%）苯丙酸类和聚酮类化合物（12.6%）Phenylpropionic acids and polyketones compounds（12.6%）有机杂环化合物（10.1%）Organic heterocyclic compounds（10.1%）苯环型化合物（9.2%）Benzene ring type compounds（9.2%）有机酸及其衍生物（9.0%）Organic acids and their derivatives（9.0%）含氧有机物（8.0%）Oxygenated organic matter（8.0%）核苷、核苷酸及其类似物（2.4%）Nucleosides，nucleotides and their analogues（2.4%）生物碱及其衍生物（0.7%）Alkaloids and their derivatives（0.7%）含氮有机物（0.6%）Nitrogenous organic matter（0.6%）木脂素、新木脂素及相关化合物（0.5%）Lignans，neolignans and related compounds（0.5%）均质非金属化合物（0.1%）Homogeneous nonmetallic compounds（0.1%）烃类衍生物（0.1%）Hydrocarbon derivative（0.1%）图 23个主产区核桃凋落叶醇提物总代谢产物分类环形图Fig.2Classifiation ring chart of total metabolites of ethanolic extract of walnut leaf litter from the three main producing areas54卷南 方 农 业 学 报 1204和商州664种，共有的化合物有266种，特有化合物临渭为206种、商州为203种、黄龙为154种。3个主产区核桃凋落叶代谢产物中相对含量1%的物质共7类27种（表6），以有机酸为主。其中，3个主产区共有成分2种，即甜菜碱（4.75%）和DL-水苏碱（12.71%）；黄龙核桃凋落叶中有12种（25.52%），5-羟基间苯二甲酸（5.73%）含量最多，且为独有成分，胆碱（2.58%）、L-苹果酸（1.30%）和3-O-D-半乳糖基-锡-甘油（1.12%）也为其独有成分；临渭核桃凋落叶有13种（24.29%），含量最多的为DL-水苏碱（7.62%），独有物质为2,5-二羟基苯甲醛（1.85%）；商州核桃凋落叶则有11种（31.52%），DL-苹果酸含量（12.94%）最多，4-氨基-2-甲硫基-1,3-噻唑-5-羧酸乙酯（1.59%）为独有成分。3讨论光照、温度和降雨等纬度因子的变