免疫学复习题1.doc

1. Ig的水解片段？
Ig分子可被许多蛋白酶水解，产生不同的片段。免疫学研究中常用的酶是木瓜蛋白酶和胃蛋白酶。用木瓜蛋白酶水解IgG分子，可将其裂解为三个片段，即两个完全相同的抗原结合片段Fab和一个可结晶片段Fc.用胃蛋白酶水解IgG分子，可将其裂解为一个大分子F（ab’）2片段和若干无活性小分子多肽片段pFc’.
2.脾脏的功能？
(1）T细胞和B细胞定居的场所(2)免疫应答发生的场所(3)合成某些生物活性物质(4)过滤作用

3．参与特异性免疫与非特异性免疫的细胞有那些？
有多种细胞参与：针对抗原刺激的应答主要是T细胞和B细胞，但在完成特异性免疫的过程中，还需要其他一些细胞（巨噬细胞，粒细胞等）的参与；

4.什么叫抗体，免疫应答，表位，ADCC？
抗体：B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白
免疫应答：是指免疫系统识别和清除抗原的整个过程
表位：抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团
ADCC: 抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用

5.T细胞，B细胞活化
（1） T细胞活化
T细胞活化的双信号作用。第一信号来自抗原与其受体的结合，即抗原识别，TCR与抗原肽:MHC分子复合物的结合，CD3分子传导活化信号。CD4+T细胞TCR识别抗原肽:MHCII分子复合物，CD8+T细胞TCR识别抗原肽:MHCI分子复合物，T细胞活化的第二信号来自辅助刺激分子(costimulatory molecule)，即抗原提呈细胞上的辅助刺激分子与T细胞表面的相应受体的结合。CD28是活化T细胞最重要的膜分子，它与APC上表达的相应配基分子B7-1(CD80)和B7-2(CD86)相结合，经CD28传递活化信号，增强T细胞对抗原应答，由CD28/B7发出的第二信号，增强细胞因子基因的转录。T细胞活化时由于辅助刺激分子B7与CD28的结合，而诱生T细胞表面表达CTLA-4分子，
（2）B细胞的活化
B细胞经由BCR识别抗原。不同发育和分化阶段B细胞的BCR中的mIg有不同的类别。不成熟B细胞为mIgM，成熟B细胞为mIgM、mIgD或mIgG，也可为mIgA或mIgE。抗原与mIg的可变区特异结合，产生第一活化信号。与BCR组成BCR复合物的Igα（CD79a）和Igβ（CD79b）为信号转导分子，Igα/Igβ把第一活化信号转导入胞内。
活化B细胞体积增大，mIgD消失，胞膜表达一些新的细胞因子的受体，如IL-2及IL-5的受体，细胞因子作用于B细胞，使其增殖、分化。B细胞增殖中又表达IL-6、IL-10及IFNγ等细胞因子受体，B细胞进一步增殖与分化为浆细胞和记忆性B细胞。在B细胞活化、增殖与分化过程中，均需Th细胞的辅助。
6.杀伤肿瘤细胞的体液免疫机制
（1）激活补体系统溶解肿瘤细胞。（2）抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）直接杀伤IgG包裹的肿瘤细胞。（3）调理吞噬作用。（4）干扰肿瘤细胞的某些生物学行为。（5）其他作用。

7.免疫球蛋白的结构，功能？
免疫球蛋白结构：
1.免疫球蛋白的基本结构及其基因天然免疫球蛋白分子均含有四条异源性多肽链，其中，分子量较大的称为重链，而分子量较小的为轻链。同一天然Ig分子中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。
2.免疫球蛋白的功能区免疫球蛋白多肽链内的二硫键连接形成的110个氨基酸残基组成的环状结构称为免疫球蛋白的结构域或功能区。重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，称为可变区（V区），靠近C端氨基酸序列相对稳定的区域，称为恒定区（C区）。重链和轻链的V区分别称为VH和VL.VH和VL各有3个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，称为高变区（HVR）或互补决定区（CDR），一般CDR3变化程度更高。
3.免疫球蛋白的酶解片段在一定条件下，免疫球蛋白分子肽链的某些部分易被蛋白酶水解为不同片段。木瓜蛋白酶水解IgG的部位是在铰链区二硫键连接的2条重链的近N端，可将Ig裂解为两个完全相同的Fab段和一个Fc段。胃蛋白酶作用于铰链区二硫键所连接的两条重链的近C端，水解Ig后可获得一个F（ab‘）2片段和一些小片段pFc’。F（ab‘）2是可同时结合两个抗原表位，故与抗原结合可发生凝集反应和沉淀反应。pFc’最终可被降解，无生物学作用。
4.免疫球蛋白的其他成分Ig轻链和重链除上述基本结构外，某些类别的Ig还含有其他辅助成分，分别是J链和分泌片。J链的主要功能是将单体Ig分子连接为多聚体。分泌片又称为分泌成分，以非共价形式结合于IgA二聚体上，使其成为分泌型IgA（SIgA）。分泌片具有保护分泌型IgA的铰链区免受蛋白水解酶降解的作用，并介导IgA二聚体从黏膜下通过黏膜等细胞到黏膜表面的转运。
免疫球蛋白的功能：
（1）特异性结合抗原
（2）活化补体
（3）结合Fc受体
（4）通过胎盘
8.中枢免疫耐受机制
中枢耐受：是指在中枢免疫器官（胸腺和骨髓）内， T 和B 淋巴细胞在发育中，尚未成熟前，能识别自身抗原的细胞克隆被清除或处于无反应性状态而形成的自身耐受。如T 细胞在胸腺内发育过程中，经过阳性选择和阴性选择，识别自身抗原的未成熟T 细胞凋亡。B 细胞在骨髓内发育到表达mIgM 的未成熟B 细胞，经过阴性选择自身反应性细胞克隆消除或处于无反应性状态。

9.抗原抗体的检测方法有哪些
抗原抗体检测有凝集反映、沉淀反应、放免技术、荧光技术、酶联免疫，化学发光、生物亲和，固相免疫、免疫组化等技术
根据抗原和抗体性质的不同和反应条件的差别，抗原抗体反应表现为不同的形式。颗粒性抗原表现为凝集反应；可溶性抗原表现为沉淀反应；补体参与下细菌抗原表现为溶菌反应，红细胞抗原表现为溶血反应；毒素抗原表现为中和反应等。

10.补体的生物学功能
（1）溶菌和细胞溶解作用
（2）调理吞噬作用
（3）免疫粘附作用
（4）炎症介质作用

11.免疫应答的过程，生物学意义
过程包括：①免疫细胞对抗原分子的识别过程，即抗原分子与免疫细胞的相互作用；②免疫细胞的活化和分化过程，即免疫细胞间的相互作用；③效应细胞和效应分子的排异作用。
意义：（1）免疫应答的生物学意义首先在于对机体的保护性生理作用。通过免疫应答的效应作用，机体可以清除入侵的病原性生物体及其毒性产物，建立起抗感染免疫；可以清除可能不断出现的突变细胞，建立起抗肿瘤免疫；通过自身稳定和免疫调节作用，可以维持机体内环境的平衡与稳定，将免疫反应及炎症反应控制在适当的范围内。
（2）免疫应答的生物学意义还在于一定条件下对机体的致病作用。对抗原 异物发生免疫应答的结果，可能回引起机体组织细胞的损伤和生理功能的紊乱，导致超敏反应性疾病发生。如对自身组织细胞发生排异效应，引起自身组织细胞损伤，则导致自身免疫性疾病。如对病原微生物形成免疫耐受，则易导致持续性感染。在因治疗需要施行同种异型组织器官移植时，免疫应答还会引起移植排斥反应，造成机体和移植物的损伤，其结果对机体也是不利的。

12.细胞因子的作用方式？
细胞因子的作用方式：1.自分泌作用。2.旁分泌作用。3.内分泌作用。

13.什么是单克隆抗体，什么是异嗜性抗原？
单克隆抗体：指将特定的效应T细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行动物细胞融合，形成杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞可以长时间存在并合成特定抗体
异嗜性抗原：是一类与种属特异性无关，存在于不同种系生物间的共同抗原。有些异嗜性抗原的存在可以协助疾病的诊断。

14.什么叫MHC？
主要组织相容性复合体，是存在于脊椎动物某一染色体上编码主要组织相容性抗原的一组紧密连锁的基因群，与免疫应答、免疫调节和移植排斥等有关。

15.细胞因子的共同特点？
(1)相对低的分子量(2)产生的多源性(3)作用方式多样(4)通过配体-受体的模式发挥生物学效应

16.细胞免疫机制及参与细胞免疫的细胞有哪些
细胞免疫指 T细胞受到抗原刺激后，分化、增殖、转化为致敏T细胞(也叫效应T细胞)，当相同抗原再次进入机体的细胞中时，致敏T细胞（效应T细胞）对抗原的直接杀伤作用及致敏T细胞所释放的细胞因子的协同杀伤作用，统称为细胞免疫。同体液免疫一样，细胞免疫的产生也分为感应、反应和效应三个阶段。其作用机制包括两个方面：（1）致敏T细胞的直接杀伤作用。当致敏T细胞与带有相应抗原的靶细胞再次接触时，两者发生特异性结合，产生刺激作用，使靶细胞膜通透性发生改变，引起靶细胞内渗透压改变，靶细胞肿胀、溶解以致死亡。致敏T细胞在杀伤靶细胞过程中，本身未受伤 细胞免疫示意图害，可重新攻击。根据功能不同T细胞可分为三类，其表面均有相应的受体，具有抗原特异性：细胞毒性T细胞(Tc)、辅助性T细胞(TH)、抑制性T细胞(Ts)。
Tc细胞
作用是消灭外来病原。
病毒感染细胞后，细胞表面呈现病毒表达的抗原，并结合到细胞表面的MHC-I类分子的沟中，形成MHC-抗原结合物。被Tc细胞接触、识别后，Tc分泌穿孔素，使靶细胞溶解而死，病毒进入体液，被抗体消灭。癌变细胞也是Tc攻击目标，免疫功能低下的人群容易患癌症。
TH细胞—CD4
又称辅助性T细胞，对各种免疫细胞，Tc、Ts、B都有辅助作用，对于免疫具有重要作用。
TH的受体能识别与MHC-II结合的外来抗原。MHC-II类分子存在于巨噬细胞和B细胞表面。巨噬细胞吞噬入侵的细菌等微生物，在细胞内消化、降解，抗原分子与MHC-II类结合呈现在细胞表面，将抗原传递给具有相同MHC-II类分子的TH，同时，Mφ分泌白介素-1，刺激TH，促使其分泌白介素-2，它促进TH，形成正反馈，刺激T淋巴细胞分化出Tc，刺激B细胞分化出浆细胞和记忆细胞。
Ts细胞—CD8　　
抑制性T细胞，只有在TH的刺激下才发生作用。在外来的抗原消灭殆尽时，发挥作用而结束“战斗”。

17.从外周血中如何分离淋巴细胞
用ficoll密度梯度分离法：
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞，如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的，采用不同方法，考虑(1)细胞纯度；(2)细胞获得量；(3)细胞活力；(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。
(一)　原理:
　　常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是 1.077±0.001 的 聚 蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，犌W水性高，平均分子量为400,000，当密度为1.2g／ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。
(二)　方法:
1.在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。
2.取肝素抗凝静脉血与等量Hank's液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。
3.离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank's液，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带，单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。此外，还含有血小板。
4.用毛细血管插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一短中管中，加入5倍以上体积的Hank's液或RPMI1640，1500rpm×10分钟，洗涤细胞两次。
5.末次离心后，弃上清，加入含有10％小牛血清的RPMI1640，重悬细胞。取一滴细胞悬液与一滴0.2％台盼兰染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。
单个核细胞浓度(细胞数／1毫升细胞悬液)＝4个大方格内细胞总数/4×10４×2(稀释倍数)
6.细胞活力检测：死的细胞可被染成兰色，活细胞不着色。计数200个淋巴细胞。计算出活细胞百分率。
活细胞百分率＝活细胞数/总细胞数×100％
用本法分离PBMC，纯度在90％以上，收获率可达80～90％，活细胞百分率在95％以上。　　

18.抗原的免疫原性及影响因素
免疫原性：是指能够刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的能力。即指抗原能刺激特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质抗体和致敏淋巴细胞的特性。也指抗原刺激机体后，机体免疫系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫反应。
影响因素　　
1)异物性：是指抗原与自身成分相异或未与宿主胚胎期免疫细胞接触过的物质。抗原与机体之间种系关系越远、组织结构差异越大、免疫原性越强。同种异体间，由于遗传类型不同、组织细胞结构也有差异，也具有免疫原性。凡胚胎时期未与免疫活性细胞接触过的自身成分也具有免疫原性。
2)理化状态：①分子量大小：一般分子量大于10KD免疫原性较强，在一定范围内分子量越大免疫原性越强；②化学性质：一般蛋白质抗原的免疫原性强，核酸和多糖的抗原性弱，脂质一般没有抗原性；③结构的复杂性：苯环氨基酸能增强抗原的免疫原性；④物理状态：一般聚合状态的蛋白质较其单体免疫原性强，颗粒性抗原强于可溶性抗原；④分子构象和易接近性：BCR易接近的抗原决定簇免疫原性强。
3)机体因素：遗传因素、年龄、性别和健康状态。
4)免疫方法：免疫抗原的剂量、途径、次数以及免疫佐剂的选择。

19. 机体如何从分子细胞水平进行免疫调节
细胞水平的免疫调节
1.抗原提呈细胞的免疫调节作用
成熟树突状细胞（DC）、激活的巨噬细胞和B细胞均高表达MHC分子，及协同刺激分子可有效提呈抗原，启动免疫应答；而未成熟的DC、未激活的巨噬细胞和未受抗原刺激的B细胞不能有效表达协同刺激分子，故不能有效激活T细胞，反可易诱发T细胞的耐受。
2.T细胞的免疫调节作用
正常CD4+T细胞可辅助B细胞分化和产生抗体；CD8+T细胞则具有细胞杀伤作用；某些CD4+T细胞亦具有杀伤效应。
CD4+Th0细胞在IL-12和IL-4的作用下，可分化为Th1或Th2细胞，前者主要介导细胞免疫，而后者则主要介导体液免疫。Th1和Th2细胞本身亦可分泌多种不同细胞因子，发挥广泛的生物学功能。Th1分泌的IEN-γ可抑制Th0细胞向Th2细胞分化；而Th2细胞分泌的IL-10可增强Th2细胞而抑制Th1细胞的生成。因此，Th1细胞大量扩增并释放细胞因子，可抑制Th2细胞及其介导的体液免疫应答；反之，Th2细胞大量扩增并释放细胞因子，可抑制Th1细胞及其介导的细胞免疫应答。
3.NK细胞的免疫调节作用
NK细胞可显著抑制B细胞分化及抗体产生；某些NK细胞株可溶解LPS激活的B细胞；NK细胞也可通过释放IL-2、IEN-γ、TNF-α和GM-CSF等细胞因子增强T细胞功能，从而调节机体免疫应答。
分子水平的免疫调节
1.MHC分子对T细胞的调节作用
MHC分子控制T细胞的发育。
MHC分子限制T细胞对抗原的识别
MHC分子限制CTL对靶细胞的杀伤，CTL仅杀伤MHC分子基因型相同的靶细胞
2.抗原分子的免疫调节作用
不同化学性质的抗原所诱导的免疫应答类型不同。蛋白质抗原既可激发体液免疫又可激发细胞免疫，能刺激抗体的类别转换及亲和力成熟的发生并诱导记忆性细胞；多糖及脂类抗原一般不能诱导MHC限制性的T细胞应答，刺激产生的抗体多为IgM，诱导体液免疫应答时不依赖于T细胞的辅助。不同抗原剂和接种途径可改变免疫应答的性质和强度，小剂量或大剂量抗原易引起特异性T细胞耐受，而适中剂量的抗原才能有效诱导免疫应答；皮内或皮下接种往往能激发免疫应答，而静脉或口服接种则易诱导免疫耐受。
3.抗体分子的免疫调节作用
抗体本身具有对特异性免疫应答的负反馈调节作用。在抗原免疫动物前或免疫初期输入特异性抗体可使该动物产生相同特异性抗体的能力下降。这种负反馈调节可能与抗体可中和相应抗原移去抗原对免疫细胞的刺激、诱生抗独特型抗体有关。
4.免疫复合特分子的免疫调节作用
低度的IgG抗体与相应抗原结合形成的小分子免疫复合物的生成具有抑制作用。免疫复合物中的多价抗原在被B细胞表面抗原受体识别结合的同时，复合物上的IgG的Fc段结合同一B细胞表面的Fc受体，这种交联可使特异性的B细胞处于抑制状态。
5.补体分子的免疫调节作用
不同补体组分通过与细胞表面相应补体受体结合而实现其免疫调节作用。例如，滤泡树突状细胞通过表面的C3b受体捕获C3b-抗原-抗体复合物，持续性活化B细胞；B细胞表面的CD21分子是C3b的受体，抗原分子和C3b的共价结合物可高效活化B细胞。