康乃馨设计方案组培.doc

康乃馨试验方案设计
1 康乃馨品种的筛选
选取不同品种的康乃馨幼苗，采取高垄种植，栽培基质为园土，种植前的土壤消毒采用多菌灵 4 袋（80g/袋）、辛硫磷 4 瓶(500ml/ 瓶)，灌溉采用人工浇水。记录定植幼苗时间，栽植深度为 4cm～5cm，每 7d 观察记载生长发育状况，测定种苗性状、不同品种康乃馨的花期表现、茎高与分枝性表现、摘心后的反应、抗病性、抗冻性等指标。从而选取最适合进行组培的材料。
2 康乃馨 组织培养
2.1外植体的处理
在品种优良、花色纯正、花形好、无病虫寄存的优良单株上进行采芽，要选择基部健壮的侧芽，芽的长度一般不宜超过12cm。芽超过12cm，中上部的芽已经开始花芽分化，不能采用。采芽后进行清理，逐层剥去叶片，注意不要撕破表皮，切取2cm当年生带腋芽茎段，经流水冲洗干净后，在超净工作台上一组用 75%的酒精浸泡 1min，再用 0.1%的升汞溶液灭菌 8min，最后用无菌水冲洗 5～6 次，在各个灭菌及漂洗程序中要不断摇动，使药液充分接触，灭菌彻底。最后取出放在无菌滤纸上吸干水分待用，消毒后接种于 MS培养基培养，培养温度 25±1℃，光照 10~12 h/d，光强 1600~2000lx下培养。
2.2　初代生芽培养基筛选　
分为4个参照对比，每种培养基接20瓶，每瓶平均2株
( 1 ) ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ；
( 2 ) ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ；
( 3 ) ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ；
( 4 ) ＭＳ＋６－ＢＡ 0．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ。
将带腋芽茎节接种苗接种在不同诱导芽萌动的培养基上，经过一段时间后进行观察并记录
2.3　继代增殖培养基筛选　
分为3个参照对比，每种培养基接20瓶，每瓶平均2枝。
( 5 ) ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ；
( 6 ) ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ ｍｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ　０．２ ｍｇ／Ｌ；
( 7 ) ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ。
经初代培养，将香石竹的带腋芽的茎节诱芽获得的长势较好芽苗切取下来接种到继代培养基（5）、（6）、（7）上，经过20d的培养。
2.4 生根培养基筛选　
分4个参照对比，每种培养基接20瓶，每瓶平均1枝。
( 8 ) ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ；
( 9 ) １／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ ｍｇ／Ｌ；
( 10 )１／２ＭＳ＋６－ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．５ ｍｇ／Ｌ；
( 11 )１／２ＭＳ＋６－ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ。
将较好的香石竹带腋芽的茎节诱芽获得的无根芽苗，切除基部的老化或褐变的愈伤部分，分别接种在生根培养基（8）、（9）、（10）、（11）上，培养15d并观察记录生长状况
3 防止康乃馨苗玻璃化试验
取健壮的香石竹组培苗,以MS为基本培养基,pH为5.8~6.0,每处理接种20瓶,每瓶3苗,培养温度在(25+1)℃,每天光照时数12 h, 培养30d后,调查玻璃化发生情况.试验通过4个单因素试验对香石竹的玻璃化现象进行研究。
3.1 BA浓度
基本培养基:MS+NAA 0.01mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L;BA浓度分为5个水平:0、0.2、0.5、1、2 mg/L。
3.2 琼脂用量
基本培养基:MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.01 mg/L+蔗糖30 g/L;琼脂浓度分为4个水平:6、7、8、10 g/L。
3.3蔗糖浓度
基本培养基:MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.01 mg/L+琼脂8.0 g/L蔗糖处理浓度分为4个水平: 10、20、30 g、40 g/L。
3.4 活性炭
培养基为:MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.01 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8.0g/L;设加入活性炭0.5 g/L和不加活性炭2个处理。
2.3 康乃馨脱毒处理
康乃馨茎尖脱毒培养：将消毒好的材料放在20倍解剖镜下用刀片将嫩梢上幼叶由外向内层层剥除，使透明状的生长点充分暴露，然后切取0.1~0.3mm带有1~2对叶原基的茎尖分生组织，立即接种于灭菌处理过的培养基MS+BA2+NAA0.01上培养。培养室的温度为22°C (±2 °C)，每天光照12小时，光强度为1500Lux。时间为12天左右。