篇维生素类药物分析.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第十二章,维生素类药物的分析,维生素：,是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。,人体不能合成维生素,VitA,、,D,、,E,、,K,等,脂溶性,水溶性,VitB VitC,、叶酸、烟酸,-H,维生素,A,醇,-COCH,3,维生素,A,醋酸酯,-COC,15,H,31,维生素,A,棕榈酸酯,R:,第一节 维生素,A,溶解性,（一）,不溶于水,易溶于有机溶剂和植物油等,性质,一、,为一个具有,共轭多烯侧链的,环己烯,（二）,具有,UV,吸收,325-328nm,V,A,主要为全反式,V,A,存在多种立体异构化合物,如：新维生素,A,a,新维生素,A,b,新维生素,A,c,异维生素,A,a,，异维生素,A,b,维生素,A 325.5 100%,新维生素,Aa 328 75%,新维生素,Ab 320.5 24%,新维生素,Ac 310.5 15%,异维生素,Aa 323 21%,异维生素,Ab 324 24%,相对生物效价,VitA,2,VitA,3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,鲸醇,或有金属离子存在时氧化,维生素,A,醋酸酯在临床上较常用,共轭多烯侧链 易被氧化,（三）,环氧化物,VitA,醛,VitA,酸,（四）,与三氯化锑发生呈色反应,CHCl,3,三氯化锑反应,（一）,无醇,CHCl,3,鉴别,二、,蓝色,紫红,条件,无水无醇,三氯化锑水解生成氯化氧锑,乙醇可与,C,+,作用而使正电荷消失,方法 取维生素,A,油溶液,1d,，加氯仿,10 ml,，振摇溶解，取出两滴，加氯仿,2 ml,，与,25%,三氯化锑氯仿液,0.5 ml,反应，成蓝色，渐成紫红。,BP,（,2005,）,max,为,326nm,一个吸收峰,UV,法,（二）,max,为,350,390nm,三个吸收峰,且在,332nm,的波长处,有较低的吸收峰或拐点,去水,VitA,（,VitA,3,）,VitA,HCl,讨论 维生素,A,有五个共扼双键，无水乙醇溶液在,326 nm,处有最大吸收，盐酸催化加热脱水，成,6,个双键，故，波长红移，同时在,350-390,之间出现,3,个吸收峰。,max,为,326nm,一个吸收峰,max,为,350,390nm,三个吸收峰,USP,显色剂 磷钼酸,规定,斑点颜色,和,Rf,值,BP,显色剂 三氯化锑,（三）,TLC,法,对照品法,VitA,在,325-328nm,处有最大吸收,可用于含量测定,.,但是含有,立体异构体,;,氧化降解产物,;,光照产物；合成中间体,;,副产物,;,稀释用油,等杂质会有紫外吸收,干扰,VitA,在紫外区的测定,.,为了得到准确的测定结果，消除非,VitA,产生的无关吸收所引起的误差，故采用,“,三点校正法,”,测定。,(,一,)UV,法 （三点校正法）,三,.,含量测定,三点校正法,1.,测定原理：本法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算吸收度,A,校正值后，再计算含量，故本法称为,“,三点校正法,”,。主要基于以下两点：,（,1,）杂质的吸收在,310340nm,波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；,（,2,）物质对光的吸收具有,加和性,。,2.,波长的选择：,（,1,）三点波长的选择原则为：,一点选择在,Va,的最大吸收波长处（即,1,）,VitA,的,max,（,2,）,2,3,分别在,1,的两侧各选一点,测定对象 纯度高的,VitA,醋酸酯,第一法 等波长差法,3,-,1,=,1,-,2,1,=328nm ,2,=316nm ,3,=340nm,=12nm,第二法 等吸收度法,(,皂化法,),测定对象,VitA,醇,1,=325nm ,2,=310nm ,3,=334nm,测定法,（,1,）基本步骤,:,第一步,A,值的选择,要求：,所选,A,值中杂质的干扰已基本消除,维生素,A,的含量用生物效价即国际单位（,IU/G,）表示。维生素,A,的国际单位表示如下：,/IU,注意：,C,为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 换算因子,维生素,A,的含量用生物效价即国际单位,（,IU/G,）,来表示。维生素,A,的国际单位表示如下：,换算因子的定义为单位 所相当,的效价,/IU,/IU,第四步：求标示量,方法：,（,2,）,第一法 维生素,A,醋酸酯,判断 是否在,326,329nm,之间,改用第二法,是,否,求算,并与规定值比较,规定值 差值,判断差值是否超过,有一个以上超过,无超过,计算,A,328,（校正）,用,A,328,计算,0,3%,15%,3%,第二法,第二法,VitAD,胶丸中,VitA,的含量测定,精密称取本品,(,规格,10000,VitAIU/,丸,),装量差异项下（平均装量,0.08262g/,丸,）的内容物,0.2399g,至,250ml,量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取,2.0ml,，置另一,20 ml,量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为,328nm,，并在下列波长处测得吸收度为,A,300,：,0.354,A,316,：,0.561,A,328,：,0.628,A,340,：,0.523,A,360,：,0.216,A,300,/A,328,：,0.555,A,316,/A,328,：,0.907,A,328,/A,328,：,1.000,A,340,/A,328,：,0.811,A,360,/A,328,：,0.299,求本品中维生素,A,的含量？,A,300,/A,328,：,0.564,A,316,/A,328,：,0.893,A,328,/A,328,：,1.000,A,340,/A,328,：,0.833,A,360,/A,328,：,0.344,0.555,0.907,1.000,0.811,0.299,+0.01,0.01,0,+0.02,+0.04,=,=,=,=,=,适用于维生素,A,醇,（等吸收度法也称为皂化法）,第一法无法消除杂质干扰时用此法,（,3,）第二法,水溶性,脂溶性,判断,max,是否在,323,327nm,之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,判断,A,300,/A,325,是否小于或等于,0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,A,325(,校正,),0,3%,3%,（二）三氯化锑比色法,标准曲线法,1.,原理：维生素,A,与,三氯化锑的无水氯仿,溶液作用,产生,不稳定的蓝色,在,618nm620nm,波长处有最大吸收,符合,Beer,定律,.,2.,方法：取维生素,A,对照品，制成系列浓度的氯仿溶液，加入一定量的,三氯化锑无水氯仿,溶液，在,5s,10s,内,于,620nm,波长处测定吸收度，绘制标准曲线。按同法测定供试液的吸收度，根据标准曲线计算含量。,3.,注意事项：,呈色不稳定,要求操作迅速。一般规定加入三氯化锑后应在,5s,10s,内测定,水分干扰测定,三氯化锑水解产生,SbOCl,而使溶液浑浊，影响比色,温度影响较大,样品测定时的温度与绘制标准曲线温差,1,专属性差,常使测定结果偏高,三氯化锑有腐蚀性,氨基嘧啶环,CH,2,噻唑环,(,季铵碱,),连接而成的季铵类化合物,HCl,Cl,-,第二节 维生素,B,1,的分析,(,盐酸硫胺,),二、性质,（一）溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性,（二）硫色素反应：噻唑环在碱性介质中开环，再与嘧啶环上的氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。,嘧啶环,伯氨,噻唑环,季铵,1,、可与酸成盐,2,、与生物碱,3,、含量测定,非水碱量法,（四）,碱性,（三）,UV,共轭双键,max,=246,nm,ChP,鉴别试验,二、,（一）,硫色素反应,硫色素,(O),方法 取本品约,5mg,，加氢氧化钠,2.5ml,，加铁氰化钠试液,0.5ml,与正丁醇,5ml,强烈振摇,2min,放置分层，上面醇层显强烈蓝色荧光。加酸消失，再加碱又重现。,专属性反应。,(,二,),沉淀反应,VitB,1,H,+,H,+,H,+,H,+,S,元素反应,Cl,-,反应,（三）其他反应,三、,含量测定,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,（一）,非水溶液滴定法,原理：维生素,B,1,分子含有,2,个碱性,的已成盐的,伯胺,和,季铵,基团，在非水溶液中均与,HClO,4,作用，,根据消耗,HClO,4,的量可以计算维生素,B,1,的含量。,讨论：,1.,加入,Hg(Ac),2,溶液,2.,有,2,个碱性基团，与,HClO,4,比例,1,：,2,3.,用本法替代硅钨酸重量法,(,二,)UV ChP,片剂、注射剂,=421,（每片）相当于标示量的,%=,A=ECL,W,D,注射剂,（每,ml,）相当于标示量的,%=,规格,g/ml,ml,V,D,（一）结构,为,L-,抗坏血酸，在化学结构上和糖类似。有,4,种光学异构体，,L,构型的右旋体活性最强。具有二烯醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳（,C,4,，,C,5,），性质活泼。,L,抗坏血酸,第三节 维生素,C,（二）性质,溶解性,易溶于水，水溶液呈酸性；在乙醇,中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。,2,酸性,C,3,OH,的酸性较强。,pK,1,=4.17,，,C,2,OH,的酸性较弱,pK,2,=11.57,。故表现为一元酸的性质。能与碳酸氢钠成钠盐。,二烯醇结构,二酮基结构,强还原性,二烯醇结构的还原性极强。,有活性,有活性,无活性,L,抗坏血酸,去氢抗坏血酸,二酮古洛糖酸,THANK YOU,SUCCESS,2024/12/17 周二,67,可编辑,光学活性,手性,C,（,C,4,、,C,5,）,L(+),抗坏血酸活性最强,*,*,5,水解性,50,6,具糖的性质 结构与糖类相似,有糖类的显色反应,水解、脱羧,7,紫外特征,243nm,或中性,二,.,鉴别试验,(,一,),与氧化剂反应,1,、与,AgNO,3,反应,(ChP2005),2,、与,2,，,6-,二氯靛酚反应,(ChP2005),氧化型,玫瑰红色,还原型,蓝色,OH,（,玫瑰色）,（无色）,3,、与碱性酒石酸铜反应,USP,4,、与,KMnO,4,反应,糖类的反应,（二）,或盐酸,50,吡咯,USP,（蓝色）,(,糠醛,),（戊糖）,50,(,吡咯,),脱羧,(,三,)UV (BP),维生素,C,在,0.01mol/L HCl,中,在,243nm,有最大吸收,指示剂 淀粉指示液,三 含量测定,(,一,),碘量法,1.,原理,维生素,C,在,醋酸,酸性条件下,可被,碘定量氧化,.,根据消耗碘的体积,可以计算维生素,C,的含量,H,+,取本品约,0.2g,，精密称定，加,新沸过的冷水,100ml,与,稀醋酸,10ml,使溶解，加,淀粉指示液,1ml,，立即用,碘滴定液（,0.1mol/L,）滴定,，,至溶液显蓝色，在,30,秒内不褪,。,每,1ml,碘滴定液,(0.1mol/L),相当于,8.806mg,的,C,6,H,8,O,6,2.,方法,3.,讨论,（,1,）酸性环境,d.HAc,减慢,VitC,被,O,2,氧化速度,（,2,）,新沸冷,H,2,O,赶走水中,O,2,（,3,）立即滴定,减少,O,2,的干扰,（,4,）附加剂干扰的排除,片剂,滑石粉,过滤,注射剂,抗氧剂,丙酮,Na,2,SO,3,NaHSO,3,Na,2,S,2,O,3,Na,2,S,2,O,5,(,二,),2,，,6-,二氯靛酚滴定法,1.,原理,自身指示终点法,终点：,显示过量的,2,，,6-,二氯靛酚的颜色（粉红色）,2.,方法,（定量过量）,（测剩余染料）,3.,讨论,（,1,）酸性环境,HPO,3,-HAc,稳定,VitC,（,2,）快速滴定,2min,内,防止其他还原性物质干扰,（,3,）剩余比色测定,（,4,）缺点,不稳定,需经常标定,贮备液 贮存一周,*,*,*,第三节 维生素,E,的分析,苯并二氢吡喃醇的衍生物,苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称生育酚醋酸酯,主要有,，,，,等异构体，其中以,-,异构体的生理活性最强。,结构分,3,部分：,苯环,+,二氢吡喃环,+,饱和烃链,生物效价,右旋体,:,消旋体,=1.4,：,10,（天然品）（合成品）,dl,生育酚醋酸酯,一,、,性质,1,、溶解性 为微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶于有机溶剂，不溶于水,2,、,UV,苯环,3,、酯键 易水解生成游离生育酚,4,、氧化性,维生素,E,在无氧条件下对热稳定,加热,200,也不破坏，但对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化。其氧化产物为,-,生育醌或,-,生育酚二聚体。,二、鉴别试验,（一）硝酸反应,橙红色,75,15,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO,3,强氧化剂,取本品约,30mg,，加无水乙醇,10ml,溶解后，加硝酸,2ml,，摇匀，在,75,加热,15,分钟，溶液应显,橙红色,。,（二）三氯化铁联吡啶反应,原理：,维生素,E,在碱性条件下，水解生成游离的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可被,FeCl,3,氧化生成对,-,生育醌，同时,Fe,3+,被还原为,Fe,2+,，,Fe,2+,与联吡啶生成红色的配位离子。,生育酚,对,-,生育醌,O,弱氧化剂,Fe,2+,+,红色,=41.0,45.5,max,=284nm,min,=254nm,(,三,)UV,法,V,E,0.01%,无水乙醇溶液,薄层板 硅胶,G,展开剂 环己烷,-,乙醚（,4,：,1,）,显色剂 硫酸（,105 5,）,VitE R,f,=0.7,(,四,)TLC,法,游离生育酚,利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化。故在一定条件以,消耗硫酸铈滴定液体积来控制游离生育酚的限量。,检查,三、,原理,（一）,中国药典采用硫酸铈滴定法检查制备过程中未酯化的生育酚,硫酸铈滴定液（,0.01mol/L,）,二苯胺（亮黄灰紫）,（二）试剂,（,M,生育酚,=430.8,）,例,取本品,0.10g,，加无水乙醇,5ml,溶解后，加二苯胺试液,1,滴，用硫酸铈液（,0.01,mol/L,）滴定，消耗硫酸铈液（,0.01,mol/L,）,不得过,1.0ml,。,2.15,限量,（三）,药典规定,消耗硫酸铈液（,0.01mol/L,）,1.0ml,若硫酸铈液浓度不是,0.01mol/L,，,应重新计算硫酸铈的消耗量,四、,含量测定,GC,法（,Ch.P,、,USP,、,BP,）,（一）,GC,特点,1,、,选择性好,灵敏度高,速度快,分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强的药物不适宜用,GC,法，,V,E,沸点达,350,，但可以不经衍生化直接用,GC,法,载气,N,2,固定液,硅酮（,OV-17,）,担体硅藻土或高分子多孔小球,柱温,265,检测器氢火焰离子化检测器,(FID),内标,正三十二烷,R2,VitE,测定的色谱条件,2,、,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品,+,内标）,内标物,对照液（对照,+,内标）,是样品中不存在的物质,与被测组分峰靠近,能与各组分完全分离,与被测组分的量接近,BP GC,内标 正三十二烷,R1.4,USP GC,内标 十六酸十六醇酯,R1.0,JP HPLC,外标,R2.6,样品,dl,生育酚,固定相,十八烷基硅烷键合硅胶,流动相甲醇,-,水（,49,：,1,）,检测波长,292nm,R,2.6,JP-RP-HPLC,法（外标法）,（二）,在三氯醋酸或盐酸存在下，经,水解、脱羧、失水后，加入吡,咯即产生蓝色产物的药物应是,A.,氯氮卓,B.,维生素,A,C.,普鲁卡因,D.,盐酸吗啡,E.,维生素,C,中国药典采用,以下何法测定维生素,E,含量,A.,酸碱滴定法,B.,氧化还原法,C.,紫外分光光度法,D.,气相色谱法,E.,非水滴定法,中国药典采用,气相色谱法测定维生素,E,含,量，内标物质为,A.,正二十二烷,B.,正二十六烷,C.,正三十烷,D.,正三十二烷,E.,正三十六烷,下列药物的碱性溶液，加入,铁氰化钾后，再加正丁醇，,显蓝色荧光的是,A.,维生素,A,B.,维生素,B,1,C.,维生素,C,D.,维生素,D,E.,维生素,E,既具有酸性又具有还原性的,药物是,A.,维生素,A,B.,咖啡因,C.,苯巴比妥,D.,氯丙嗪,E.,维生素,C,维生素,C,的鉴别反应，常采,用的试剂有,A.,碱性酒石酸铜,B.,硝酸银,C.,碘化铋钾,D.,乙酰丙酮,E.,三氯醋酸和吡咯,测定维生素,C,注射液的含量,时，在操作过程中要加入,丙酮，这是为了,A.,保持维生素,C,的稳定,B.,增加维生素,C,的溶解度,C.,使反应完全,D.,加快反应速度,E.,消除注射液中抗氧剂的干扰,能发生硫色素特征反应的药物,是,A.,维生素,A,B.,维生素,B,1,C.,维生素,C,D.,维生素,E,E.,烟酸,可发生以下反应或现象的药物为,A.,维生素,B,1,B.,维生素,C,C.,两者均能,D.,两者均不能,与碘化汞钾生成黄色沉淀,在乙醚中不溶,与,2,6-,二氯靛酚反应使颜色消失,硫色素反应,A,C,B,A,维生素,A,的鉴别试验为,A.,三氯化铁反应,B.,硫酸锑反应,C.2,6-,二氯靛酚反应,D.,三氯化锑反应,E.,间二硝基苯的碱性乙醇液反,应,中国药典规定维生,素,A,的测定采用紫外分光光度法,（三点校正法），此法又分为,A,等波长差法,B,等吸收比法,C,皂化法,D,差示分光法,E,双波长法,用三点校正法（三波长校正法）测定维生素醋酸酯含量时，采用未校正吸收度（实测值）计算含量，必须满足以下条件：,A,在环己烷溶液中，最大吸收波长在,326-329nm,之间,B,在异丙醇溶液中，最大吸收波长在,326-329nm,之间,C,在各测定波长处的吸收度与,328nm,波长处的吸收度比值的规定值之差在,-0.02-+0.02,之间,D,校正吸收度与未校正吸收度之差在未校正吸收度的,3%,之间,E,校正吸收度与未校正吸收度之差在未校正吸收度,-15%,-3%,之间,用三点校正法（三波长校正法）测定维生素醋酸酯含量时，以下叙述正确的是,A,原理是维生素,A,可以与三氯化锑反应显色,B,杂质吸收在测定波长范围内为线性，且随波长增加吸收度增强。,C,当最大吸收波长在,326-329nm,之间时，不一定不需皂化处理。,D,当校正吸收度与未校正吸收度之差在未校正吸收度的,3%,以内时，使用校正吸收度计算含量,维生素,E,的鉴别试验有,A,硫色素反应,B,硝酸氧化呈色反应,C,硫酸,-,乙醇呈色反应,D,碱性水解后加三氯化铁乙醇,液与联吡啶乙醇液呈色反,应,下面哪些描述适用于维生素,A,A.,分子具有长二烯醇侧链，易被氧化,B.,具有较长的全反式共轭多烯结构,C.,含酯键，经水解后产生苯并二氢吡,喃衍生物，易被氧化,D.,与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳,定蓝色，很快转变为紫红色,E.,样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加,热后，呈橙红色,维生素,E,在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离,，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。,生育酚,维生素,C,是,元弱酸，具有强,性，易被氧化剂氧化，常用,作其它制剂的,剂。,一,还原,抗氧,维生素,E,中游离生育酚的检查时,规定消耗硫酸铈滴定液（,0.01mol/L,）,不得过,1.0ml,，现硫酸铈滴定液的实,际浓度为,0.01053mol/L,，应不得超过,多少,ml,？,A.0.95 B.0.97,C.0.99 D.0.92,E.1.05,用化学方法将化合物进行鉴别,中国药典维生素,C,的含量测定,取本品约,0.2g,，精密称定，加,新,沸过的冷水,100ml,与,稀醋酸,10ml,使溶,解，加淀粉指示液,1ml,，立即用碘滴,定液,(0.1mol/L),滴定，至溶液显蓝色，,在,30,秒内不褪。,已知：取样量为,0.2084g,，消耗碘滴,定液,22.75ml,。碘滴定液的浓度校正因子,F=0.9981,维生素,C,的摩尔质量为,176.13,要求：,（,1,）解释划线部分,（,2,）计算,1ml,碘滴定液,(0.1mol/L),相当于多少,mg,的维生素,C,（,3,）计算本品的含量是否符合规定,（规定本品含,C,6,H,8,O,6,应不低于,99.0%,）,根据下列药物结构，请为每一种原料药和每一种制剂各,1,种可行的含量测定方法,要求写出方法的名称，原理，操作方法，主要条件（溶剂，试剂，滴定剂，显色机，指示剂及终点颜色，空白试验，化学计量关系）含量计算式，以及注意事项,原料药 片剂,原料药,注射液,THANK YOU,SUCCESS,2024/12/17 周二,132,可编辑,