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如何申请国家自然科学基金.pptx

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1、怎样申请怎样申请国家自然科学基金国家自然科学基金如何申请国家自然科学基金第1页第一部分第一部分基金委面上项目基金委面上项目评审基本程序及主要步骤评审基本程序及主要步骤如何申请国家自然科学基金第2页 初初 审:审:由各学科处组织实施。由各学科处组织实施。申请者不具备申请资格或违反相关要求;申请者不具备申请资格或违反相关要求;手续不完备或申请书不符合要求手续不完备或申请书不符合要求;内容不符合资助范围或超出资助能力内容不符合资助范围或超出资助能力;申请者以往资助项目执行不利。申请者以往资助项目执行不利。如何申请国家自然科学基金第3页 查查 重:重:由基金委信息中心组织实施。由基金委信息中心组织实施

2、。高职申请与负担(含参加)面上、重点、重大高职申请与负担(含参加)面上、重点、重大高职申请与负担(含参加)面上、重点、重大高职申请与负担(含参加)面上、重点、重大 累计不超出累计不超出累计不超出累计不超出3 3 3 3项;项;项;项;在职硕士不作为限项申请条件但只可申请在职硕士不作为限项申请条件但只可申请在职硕士不作为限项申请条件但只可申请在职硕士不作为限项申请条件但只可申请 面上项目;面上项目;面上项目;面上项目;申请者同期只能申请一项,每个项目申请者限申请者同期只能申请一项,每个项目申请者限申请者同期只能申请一项,每个项目申请者限申请者同期只能申请一项,每个项目申请者限 为一人为一人为一人

3、为一人;高职申请者当年申请及负担在研面上项目累高职申请者当年申请及负担在研面上项目累高职申请者当年申请及负担在研面上项目累高职申请者当年申请及负担在研面上项目累 计不超出计不超出计不超出计不超出3 3 3 3项项项项;不含有高职申请者申请及负责在研面上项不含有高职申请者申请及负责在研面上项不含有高职申请者申请及负责在研面上项不含有高职申请者申请及负责在研面上项 目不超出一项目不超出一项目不超出一项目不超出一项;青年基金只能取得一项资助。青年基金只能取得一项资助。青年基金只能取得一项资助。青年基金只能取得一项资助。如何申请国家自然科学基金第4页 同行评议(一审):同行评议(一审):由基金委各学科

4、处组织实施。由基金委各学科处组织实施。由基金委各学科处组织实施。由基金委各学科处组织实施。基本程序:基本程序:每份申请书选择同行评议教授(每份申请书选择同行评议教授(每份申请书选择同行评议教授(每份申请书选择同行评议教授(5 5 5 5位);位);位);位);函请同行评议:对项目进行定性定量评价;函请同行评议:对项目进行定性定量评价;函请同行评议:对项目进行定性定量评价;函请同行评议:对项目进行定性定量评价;收回评议卡;收回评议卡;收回评议卡;收回评议卡;对定量部分进行计算机判读、打分、排序;对定量部分进行计算机判读、打分、排序;对定量部分进行计算机判读、打分、排序;对定量部分进行计算机判读、

5、打分、排序;据学科资助项目数据学科资助项目数据学科资助项目数据学科资助项目数130130130130确定第二轮评审项目。确定第二轮评审项目。确定第二轮评审项目。确定第二轮评审项目。如何申请国家自然科学基金第5页教授评审组或专业委员会评审(二审)。教授评审组或专业委员会评审(二审)。主要对一审推荐项目进行评议,筛除主要对一审推荐项目进行评议,筛除主要对一审推荐项目进行评议,筛除主要对一审推荐项目进行评议,筛除 30 30 30 30。再次对二审会确定资助项目进行审查:再次对二审会确定资助项目进行审查:深入查重;深入查重;以往负担项目是否按期完成;以往负担项目是否按期完成;是否有违反基金委相关申请

6、要求。是否有违反基金委相关申请要求。基金委员会委务会审议。基金委员会委务会审议。下发同意、未同意通知。下发同意、未同意通知。如何申请国家自然科学基金第6页第二部分第二部分 怎样撰写国家自然科学基金怎样撰写国家自然科学基金申请书申请书如何申请国家自然科学基金第7页一、摘一、摘 要(限要(限400400字)字)包含:包含:研究方法、内容、目标、科学意义等研究方法、内容、目标、科学意义等 如:如:“用用方法(伎俩)进行方法(伎俩)进行研究,探索研究,探索/证证实实问题,对说明问题,对说明机制机制 揭示揭示规律有主要意规律有主要意义,为义,为奠定基础提供奠定基础提供思绪思绪”如何申请国家自然科学基金第

7、8页 探索肺炎链球菌感受态形成探索肺炎链球菌感受态形成对毒力表示影响对毒力表示影响 细菌在自然状态下可取得感受态而发生细菌在自然状态下可取得感受态而发生转化,这种基因重组方式是许多主要生命现转化,这种基因重组方式是许多主要生命现象和生命过程起始和源头。象和生命过程起始和源头。本研究经过插入本研究经过插入复制失活或替换失活方法,构建肺炎链球菌复制失活或替换失活方法,构建肺炎链球菌感受态缺点菌株,用体内环境信号感受态缺点菌株,用体内环境信号探讨肺炎探讨肺炎球球菌致病是否与其感受态形成和转化相关。菌致病是否与其感受态形成和转化相关。为揭示转化过程对于肺炎链球菌致病能力影为揭示转化过程对于肺炎链球菌致

8、病能力影响机制提供理论依据。响机制提供理论依据。如何申请国家自然科学基金第9页二、立论依据二、立论依据对对基基础础研研究究,着着重重结结合合国国际际科科学学发发展展趋趋势势,叙叙述述项目科学意义项目科学意义 对对应应用用基基础础研研究究,着着重重结结合合学学科科前前沿沿,围围绕绕国国民民经经济济和和社社会会发发展展中中主主要要科科技技问问题题叙叙述述其其应应用用前前景景如何申请国家自然科学基金第10页在研究领域(疾病防治)层面在研究领域(疾病防治)层面从研究方向展开从研究方向展开围绕本项目拟处理问题围绕本项目拟处理问题进行归纳分析进行归纳分析提出构想提出构想从研究领域从研究领域(疾病防治)(疾

9、病防治)切入切入研究意义研究意义立论依据立论依据如何申请国家自然科学基金第11页1 1、项目标研究意义、项目标研究意义 存在问题:存在问题:存在问题:存在问题:对科学意义阐述不足或夸大。对科学意义阐述不足或夸大。对科学意义阐述不足或夸大。对科学意义阐述不足或夸大。撰写方法:撰写方法:撰写方法:撰写方法:从疾病入手,简述其特点、危害,当前从疾病入手,简述其特点、危害,当前从疾病入手,简述其特点、危害,当前从疾病入手,简述其特点、危害,当前 主要治疗方法及其存在问题。主要治疗方法及其存在问题。主要治疗方法及其存在问题。主要治疗方法及其存在问题。简明分析该病发病机理和主要研究热点,引出当前存简明分析

10、该病发病机理和主要研究热点,引出当前存简明分析该病发病机理和主要研究热点,引出当前存简明分析该病发病机理和主要研究热点,引出当前存在主要问题,也就是本项目要处理问题,以此为切入点在主要问题,也就是本项目要处理问题,以此为切入点在主要问题,也就是本项目要处理问题,以此为切入点在主要问题,也就是本项目要处理问题,以此为切入点提出假设,阐述假如实现预期目标,对该病甚至相关疾提出假设,阐述假如实现预期目标,对该病甚至相关疾提出假设,阐述假如实现预期目标,对该病甚至相关疾提出假设,阐述假如实现预期目标,对该病甚至相关疾病预防、治疗含有理论意义和临床价值。病预防、治疗含有理论意义和临床价值。病预防、治疗含

11、有理论意义和临床价值。病预防、治疗含有理论意义和临床价值。如何申请国家自然科学基金第12页 基基因因转转移移,是是基基因因重重组组最最原原始始方方式式。我我们们能能够够从从肿肿瘤瘤组组织织中中找找到到病病毒毒基基因因,也也能能够够发发觉觉一一些些病病原原体体DNADNA在在不不一一样样宿宿主主之之间间传传递递过过程程中中发发生生着着变变异异,比比如如耐耐药药性性在在细细菌菌中中传传输输,这这都都是是自自然然界界中中普普遍遍存存在在基基因因转转移移现现象象。而而细细菌菌基基因因转转移移包包含含结结合合(conjugationconjugation)、转转导导(transductiontransd

12、uction)、融融合合(fusionfusion)及及转转化化(transformationtransformation)四四种种方方式式,我我们们这这里里所要讨论是转化。所要讨论是转化。如何申请国家自然科学基金第13页 什么叫做转化呢?它是指细菌在一定状态(感什么叫做转化呢?它是指细菌在一定状态(感什么叫做转化呢?它是指细菌在一定状态(感什么叫做转化呢?它是指细菌在一定状态(感受态受态受态受态-指细菌能够摄取外来游离或质粒指细菌能够摄取外来游离或质粒指细菌能够摄取外来游离或质粒指细菌能够摄取外来游离或质粒DNADNADNADNA一个状态,一个状态,一个状态,一个状态,它能够在试验室中诱导产

13、生,也可发生于细菌自然它能够在试验室中诱导产生,也可发生于细菌自然它能够在试验室中诱导产生,也可发生于细菌自然它能够在试验室中诱导产生,也可发生于细菌自然生长某一阶段)下摄取外来生长某一阶段)下摄取外来生长某一阶段)下摄取外来生长某一阶段)下摄取外来DNADNADNADNA过程。过程。过程。过程。已发觉有五种已发觉有五种已发觉有五种已发觉有五种细菌能够在自然状态下产生感受态而发生转化:细菌能够在自然状态下产生感受态而发生转化:细菌能够在自然状态下产生感受态而发生转化:细菌能够在自然状态下产生感受态而发生转化:肺肺肺肺炎链球菌炎链球菌炎链球菌炎链球菌(S.pneumoniae(S.pneumon

14、iae(S.pneumoniae(S.pneumoniae,S.pn)S.pn)S.pn)S.pn)、枯草杆菌、枯草杆菌、枯草杆菌、枯草杆菌(B.subitilusB.subitilusB.subitilusB.subitilus)、流感嗜血杆菌()、流感嗜血杆菌()、流感嗜血杆菌()、流感嗜血杆菌(H.influenziaH.influenziaH.influenziaH.influenzia)、)、)、)、血链球菌(血链球菌(血链球菌(血链球菌(S.sanguisS.sanguisS.sanguisS.sanguis)和淋病奈瑟氏菌)和淋病奈瑟氏菌)和淋病奈瑟氏菌)和淋病奈瑟氏菌(N.go

15、norrhea N.gonorrhea N.gonorrhea N.gonorrhea),),),),其中肺炎链球菌转化效率最高其中肺炎链球菌转化效率最高其中肺炎链球菌转化效率最高其中肺炎链球菌转化效率最高,转化结果是细菌遗传特征发生改变,表现出与亲代转化结果是细菌遗传特征发生改变,表现出与亲代转化结果是细菌遗传特征发生改变,表现出与亲代转化结果是细菌遗传特征发生改变,表现出与亲代不一样遗传性状。不一样遗传性状。不一样遗传性状。不一样遗传性状。如何申请国家自然科学基金第14页 1928 1928年年GriffthGriffth发觉了肺炎链球菌发觉了肺炎链球菌(S.(S.pneumoniae)p

16、neumoniae)荚膜转化现象,荚膜转化现象,19441944年年AreryArery等等证实了转化物化学本质是证实了转化物化学本质是DNADNA,证实生命遗传,证实生命遗传物质是物质是DNADNA。细菌转化不但是许多主要生命现细菌转化不但是许多主要生命现象起始和源头,转化机理研究也一直是生命象起始和源头,转化机理研究也一直是生命科学中一个非常主要问题。科学中一个非常主要问题。本研究从肺炎链本研究从肺炎链球菌转化入手来探讨其对细菌毒力表示影响。球菌转化入手来探讨其对细菌毒力表示影响。如何申请国家自然科学基金第15页 尽管肺炎链球菌转化机制尚不十分清楚,尽管肺炎链球菌转化机制尚不十分清楚,但其

17、过程大致可分为但其过程大致可分为6 6个阶段:个阶段:1 1)肺炎链球)肺炎链球菌被诱导成为感受态;菌被诱导成为感受态;2 2)外来)外来DNADNA吸附于细吸附于细菌壁上;菌壁上;3 3)核酸酶与外来)核酸酶与外来DNADNA结合;结合;4 4)核酸)核酸酶降解其中一条链,使之成为单链(酶降解其中一条链,使之成为单链(ssDNAssDNA););5 5)ssDNAssDNA被摄入细菌胞内被摄入细菌胞内6 6)进入细胞内)进入细胞内ssDNAssDNA以同源重组方式整合于肺炎链球菌染色以同源重组方式整合于肺炎链球菌染色体上。体上。如何申请国家自然科学基金第16页 肺炎链球菌作为一个肺炎链球菌作

18、为一个自然界广泛存在自然界广泛存在致病致病菌,肺炎链球菌可引发脑膜炎、中耳炎、鼻窦菌,肺炎链球菌可引发脑膜炎、中耳炎、鼻窦炎和败血症等疾病。炎和败血症等疾病。在在7070年代,未经治疗肺炎年代,未经治疗肺炎球菌感染死亡率为球菌感染死亡率为30-35%30-35%11,经几十年研究,经几十年研究,其感染引发菌血症死亡率仍高达其感染引发菌血症死亡率仍高达25-30%25-30%22。抗。抗生素应用因为耐药菌快速增加而越来越失去治生素应用因为耐药菌快速增加而越来越失去治疗价值。而最新肺炎链球菌多价结合疫苗特异疗价值。而最新肺炎链球菌多价结合疫苗特异性和有效性远远未到达令人满意程度性和有效性远远未到达

19、令人满意程度33。寻找寻找体内新毒力基因,揭示肺炎球菌致病机理,才体内新毒力基因,揭示肺炎球菌致病机理,才能从根本上处理其感染治疗问题。能从根本上处理其感染治疗问题。如何申请国家自然科学基金第17页 2 2、国内外现实状况分析(综述)、国内外现实状况分析(综述)存在问题:存在问题:存在问题:存在问题:文件复习不够,对国内外现实状况缺乏真正了解,文件复习不够,对国内外现实状况缺乏真正了解,文件复习不够,对国内外现实状况缺乏真正了解,文件复习不够,对国内外现实状况缺乏真正了解,提出问题他人已处理提出问题他人已处理提出问题他人已处理提出问题他人已处理-低水平重复低水平重复低水平重复低水平重复。对研究

20、方法不熟悉,简单移植或夸大其作用,对研究方法不熟悉,简单移植或夸大其作用,对研究方法不熟悉,简单移植或夸大其作用,对研究方法不熟悉,简单移植或夸大其作用,缺乏实际应用可行性缺乏实际应用可行性缺乏实际应用可行性缺乏实际应用可行性-无法实现预期目标无法实现预期目标无法实现预期目标无法实现预期目标。对国内外现实状况只是简单罗列,缺乏归纳分析,对国内外现实状况只是简单罗列,缺乏归纳分析,对国内外现实状况只是简单罗列,缺乏归纳分析,对国内外现实状况只是简单罗列,缺乏归纳分析,缺乏逻辑性和针对性缺乏逻辑性和针对性缺乏逻辑性和针对性缺乏逻辑性和针对性-总结与表示不够总结与表示不够总结与表示不够总结与表示不够

21、。(如何申请国家自然科学基金第18页撰写方法:要撰写方法:要紧紧围绕紧紧围绕此次申请项目标主题。此次申请项目标主题。1、从疾病切入,、从疾病切入,简明叙述简明叙述国内外研究结果,国内外研究结果,并引出当前热点研究方向。并引出当前热点研究方向。2、从研究方向展开,、从研究方向展开,较详细地分析较详细地分析国内外在国内外在本方向研究进展,引出说明疾病发病机理或创造本方向研究进展,引出说明疾病发病机理或创造新治疗方法新治疗方法关键问题关键问题所在。所在。3、围绕关键问题,、围绕关键问题,详细叙述详细叙述国内外以往研国内外以往研究结果、当前现实状况及今后发展趋势。综合分析究结果、当前现实状况及今后发展

22、趋势。综合分析后提出后提出当前还未处理问题当前还未处理问题。如何申请国家自然科学基金第19页 4 4 4 4、对拟采取技术方法进行介绍和分析。、对拟采取技术方法进行介绍和分析。、对拟采取技术方法进行介绍和分析。、对拟采取技术方法进行介绍和分析。成熟方法要简明介绍,重点说明能够应用于本研究依成熟方法要简明介绍,重点说明能够应用于本研究依成熟方法要简明介绍,重点说明能够应用于本研究依成熟方法要简明介绍,重点说明能够应用于本研究依据。据。据。据。新方法要详细介绍其原理,并说明能够应用于本研究新方法要详细介绍其原理,并说明能够应用于本研究新方法要详细介绍其原理,并说明能够应用于本研究新方法要详细介绍其

23、原理,并说明能够应用于本研究理论依据和试验依据。理论依据和试验依据。理论依据和试验依据。理论依据和试验依据。要尤其注意问题:必须对项目中所利用技术方法原理、要尤其注意问题:必须对项目中所利用技术方法原理、要尤其注意问题:必须对项目中所利用技术方法原理、要尤其注意问题:必须对项目中所利用技术方法原理、流程及在实际应用中可能出现问题要十分清楚,绝不能流程及在实际应用中可能出现问题要十分清楚,绝不能流程及在实际应用中可能出现问题要十分清楚,绝不能流程及在实际应用中可能出现问题要十分清楚,绝不能是一个简单移植。是一个简单移植。是一个简单移植。是一个简单移植。比如:蛋白质融合表示,理论上能够实现融合,比

24、如:蛋白质融合表示,理论上能够实现融合,比如:蛋白质融合表示,理论上能够实现融合,比如:蛋白质融合表示,理论上能够实现融合,但存在但存在但存在但存在“活性、表示载体选择、纯化活性、表示载体选择、纯化活性、表示载体选择、纯化活性、表示载体选择、纯化”等问题。等问题。等问题。等问题。5 5 5 5、提出本项目标研究构想。、提出本项目标研究构想。、提出本项目标研究构想。、提出本项目标研究构想。如何申请国家自然科学基金第20页 肺炎链球菌在正常情况下并不致病,肺炎链球菌在正常情况下并不致病,40%40%健健康人咽喉部都有寄生康人咽喉部都有寄生22,其只是在一定条件下引,其只是在一定条件下引发疾病,如病

25、毒引发上呼吸道感染时、小儿高烧发疾病,如病毒引发上呼吸道感染时、小儿高烧时常转为肺炎。已经必定环境信号控制着细菌毒时常转为肺炎。已经必定环境信号控制着细菌毒力基因表示力基因表示44。问题是肺炎链球菌致病是否与环问题是肺炎链球菌致病是否与环境原因诱导其感受态形成和转化相关?从我们当境原因诱导其感受态形成和转化相关?从我们当前掌握资料来看,国内外还未见到类似报道或想前掌握资料来看,国内外还未见到类似报道或想法。法。如何申请国家自然科学基金第21页 当前对肺炎链球菌转化机理研究概况:操纵当前对肺炎链球菌转化机理研究概况:操纵子子comCDEcomCDE为各种环境原因如为各种环境原因如CaCa2+2+

26、、O O2 2浓度、生长浓度、生长阶段、细菌密度等调整其感受态发生唯一共同调阶段、细菌密度等调整其感受态发生唯一共同调控点控点55,6 6,77,也是肺炎链球菌控制许多蛋白质基,也是肺炎链球菌控制许多蛋白质基因表示开关因表示开关88。而已。而已有文件报道当有文件报道当S.pnS.pn进入感受进入感受态后,可开启一些蛋白包含自溶素表示态后,可开启一些蛋白包含自溶素表示99,而自,而自溶素是溶素是S.pnS.pn一个比较主要毒力因子一个比较主要毒力因子,当其被激活当其被激活后可释放细胞壁毒力因子和溶血素;最新研究发后可释放细胞壁毒力因子和溶血素;最新研究发觉,有三个可被感受态刺激蛋白(觉,有三个可

27、被感受态刺激蛋白(CspCsp)诱导表)诱导表示蛋白基因变异时,肺炎链球菌毒力减弱示蛋白基因变异时,肺炎链球菌毒力减弱1010。如何申请国家自然科学基金第22页 依据以上研究背景,依据以上研究背景,我们研究思绪为:采我们研究思绪为:采取插入失活伎俩,分别使基因取插入失活伎俩,分别使基因comCcomC、D D、E E失活,失活,从而构建一系列感受态缺点菌株。经过体内毒从而构建一系列感受态缺点菌株。经过体内毒力试验及体外粘附试验比较其与野生菌株致病力试验及体外粘附试验比较其与野生菌株致病能力,以确定自然条件下形成感受态与细菌致能力,以确定自然条件下形成感受态与细菌致病关系。病关系。如何申请国家自

28、然科学基金第23页 本研究从转化过程中感受态形成方面探讨本研究从转化过程中感受态形成方面探讨其对肺炎链球菌毒力影响,其对肺炎链球菌毒力影响,意义在于意义在于:1.1.因为感受态发生与细菌各种蛋白表示调控相关,因为感受态发生与细菌各种蛋白表示调控相关,而其形成与各种环境原因相关,所以本课题为而其形成与各种环境原因相关,所以本课题为从体内研究环境原因对于肺炎链球菌致病性影从体内研究环境原因对于肺炎链球菌致病性影响开辟了一条新路径。响开辟了一条新路径。2.2.同时感受态形成可引发细菌发生转化,可能会同时感受态形成可引发细菌发生转化,可能会造成外源基因整合,使肺炎链球菌生物性状发造成外源基因整合,使肺

29、炎链球菌生物性状发生改变,这也可能与其致病相关,本研究探讨生改变,这也可能与其致病相关,本研究探讨转化过程对于肺炎链球菌致病能力影响,为深转化过程对于肺炎链球菌致病能力影响,为深入深入了解细菌致病机理提供新依据。入深入了解细菌致病机理提供新依据。如何申请国家自然科学基金第24页注意事项注意事项 注意逻辑性和层次感,并随时点题。注意逻辑性和层次感,并随时点题。文字表示要精雕细琢,防止假大空。文字表示要精雕细琢,防止假大空。参考文件必须提供作者全名、出处。参考文件必须提供作者全名、出处。参考文件必须引用近年文件。参考文件必须引用近年文件。要注意参考国内相关专业著名教授论著。要注意参考国内相关专业著

30、名教授论著。文件回顾不能回避国内外最新研究进展。文件回顾不能回避国内外最新研究进展。如何申请国家自然科学基金第25页 三、研究方案三、研究方案 1 1、研究目标、研究目标 存在问题:存在问题:存在问题:存在问题:目标过大目标过大目标过大目标过大 撰写要求:撰写要求:撰写要求:撰写要求:有限目标,与研究内容相呼应有限目标,与研究内容相呼应有限目标,与研究内容相呼应有限目标,与研究内容相呼应 如:探索如:探索如:探索如:探索问题,明确问题,明确问题,明确问题,明确关系,揭示关系,揭示关系,揭示关系,揭示规律,规律,规律,规律,说明说明说明说明原理(机制),建立原理(机制),建立原理(机制),建立原

31、理(机制),建立方法等方法等方法等方法等如何申请国家自然科学基金第26页 本研究目标是:本研究目标是:探探讨讨S.pnS.pn感感受受态态发发生生是是否否与与其其致致病病相相关关,重重点说明点说明:1 1)体体内内环环境境是是否否诱诱导导S.pnS.pn转转化化过过程程(感感受受态态发生)。发生)。2 2)S.pnS.pn毒毒力力因因子子表表示示是是否否与与体体内内环环境境诱诱导导细细菌感受态形成与转化过程相关。菌感受态形成与转化过程相关。如何申请国家自然科学基金第27页 2 2、研究内容:、研究内容:存在问题:内容过多,一个研究周期难以完成;存在问题:内容过多,一个研究周期难以完成;存在问题

32、:内容过多,一个研究周期难以完成;存在问题:内容过多,一个研究周期难以完成;内容分散,不能集中说明研究目标。内容分散,不能集中说明研究目标。内容分散,不能集中说明研究目标。内容分散,不能集中说明研究目标。撰写要求:内容要适当,确保研究周期内完成;撰写要求:内容要适当,确保研究周期内完成;撰写要求:内容要适当,确保研究周期内完成;撰写要求:内容要适当,确保研究周期内完成;与目标相辅相成,为研究目标服务。与目标相辅相成,为研究目标服务。与目标相辅相成,为研究目标服务。与目标相辅相成,为研究目标服务。篇幅要适度,注意与技术路线区分。篇幅要适度,注意与技术路线区分。篇幅要适度,注意与技术路线区分。篇幅

33、要适度,注意与技术路线区分。确定研究目标、内容依据:确定研究目标、内容依据:确定研究目标、内容依据:确定研究目标、内容依据:回答一个科学问题;回答一个科学问题;回答一个科学问题;回答一个科学问题;依据研究周期、资助强度来确定。依据研究周期、资助强度来确定。依据研究周期、资助强度来确定。依据研究周期、资助强度来确定。如何申请国家自然科学基金第28页 研究内容研究内容(一一):经过:经过S.pnS.pn操纵子操纵子comCDEcomCDE基因基因失活及体外转化试验得到感受态缺点失活及体外转化试验得到感受态缺点S.pnS.pn菌株菌株。1.分别设计分别设计S.pnS.pn基因基因comCcomC、c

34、omDcomD、comEcomE中游中游PCRPCR引物,构建含有引物,构建含有S.pncomCS.pncomC、comDcomD、comEcomE中游基因中游基因序列序列pEVP3pEVP3质粒。质粒。2.2.将将构构建建pEVP3pEVP3质质粒粒转转化化S.pnS.pn得得到到感感受受态态缺缺点点菌,并经过体外转化试验以确定其感受态缺点。菌,并经过体外转化试验以确定其感受态缺点。如何申请国家自然科学基金第29页 研究内容研究内容研究内容研究内容(二二二二):构建可被荧光汇报是否发生感受态:构建可被荧光汇报是否发生感受态:构建可被荧光汇报是否发生感受态:构建可被荧光汇报是否发生感受态菌株。

35、(菌株。(菌株。(菌株。(cinAcinAcinAcinA是是是是S.pnS.pnS.pnS.pn感受态发生之后表示蛋白基因,感受态发生之后表示蛋白基因,感受态发生之后表示蛋白基因,感受态发生之后表示蛋白基因,与外源基因同源重组相关,所以将荧光蛋白基因接与外源基因同源重组相关,所以将荧光蛋白基因接与外源基因同源重组相关,所以将荧光蛋白基因接与外源基因同源重组相关,所以将荧光蛋白基因接于其后,荧光表示可汇报感受态发生)于其后,荧光表示可汇报感受态发生)于其后,荧光表示可汇报感受态发生)于其后,荧光表示可汇报感受态发生)1)1)1)1)将绿色荧光蛋白(将绿色荧光蛋白(将绿色荧光蛋白(将绿色荧光蛋白

36、(gfpgfpgfpgfp)基因替换)基因替换)基因替换)基因替换pEVP3pEVP3pEVP3pEVP3质粒中质粒中质粒中质粒中LacZLacZLacZLacZ基因,得到荧光汇报质粒。基因,得到荧光汇报质粒。基因,得到荧光汇报质粒。基因,得到荧光汇报质粒。2)2)2)2)设设设设计计计计S.pncinAS.pncinAS.pncinAS.pncinA基基基基因因因因下下下下游游游游PCRPCRPCRPCR引引引引物物物物,构构构构建建建建含含含含有有有有cinAcinAcinAcinA基基基基因因因因下下下下游游游游序序序序列列列列荧荧荧荧光光光光质质质质粒粒粒粒(pEVP4)(pEVP4)

37、(pEVP4)(pEVP4)。将将将将pEVP4pEVP4pEVP4pEVP4质质质质粒粒粒粒转转转转化感受化感受化感受化感受态态态态缺点和非缺点缺点和非缺点缺点和非缺点缺点和非缺点S.pnS.pnS.pnS.pn,得到,得到,得到,得到转转转转化菌株。化菌株。化菌株。化菌株。如何申请国家自然科学基金第30页 研研究究内内容容(三三):体体外外转转化化试试验验以以验验证证感感受受态态缺缺点点菌菌不不能能发发生生转转化化,且且荧荧光光表表示示确确实实可可汇汇报感受态发生。报感受态发生。1)1)做做体体外外转转化化试试验验,验验证证所所构构建建菌菌株株能能被被荧荧光光表表示示汇汇报报感感受受态态发

38、发生生,且且感感受受态态缺缺点点菌菌不能发生转化。不能发生转化。2)2)检检测测基基因因comC、D、E表表示示情情况况,深深入入佐佐证所构建菌株为需要菌株。证所构建菌株为需要菌株。如何申请国家自然科学基金第31页 研研研研究究究究内内内内容容容容(四四四四):经经经经过过过过感感感感受受受受态态态态缺缺缺缺点点点点和和和和非非非非缺缺缺缺点点点点菌菌菌菌粘粘粘粘附附附附试试试试验验验验及及及及体体体体内内内内毒毒毒毒力力力力试试试试验验验验分分分分析析析析细细细细菌菌菌菌感感感感受受受受态态态态发发发发生生生生是是是是否否否否与与与与其其其其致致致致病毒力相关。病毒力相关。病毒力相关。病毒力

39、相关。1)1)1)1)分分分分别别别别用用用用感感感感受受受受态态态态缺缺缺缺点点点点和和和和非非非非缺缺缺缺点点点点菌菌菌菌处处处处理理理理A A A A549549549549细细细细胞胞胞胞,观察二者处理后细胞粘附菌落多少改变。观察二者处理后细胞粘附菌落多少改变。观察二者处理后细胞粘附菌落多少改变。观察二者处理后细胞粘附菌落多少改变。2)2)2)2)分分分分别别别别将将将将感感感感受受受受态态态态缺缺缺缺点点点点和和和和非非非非缺缺缺缺点点点点菌菌菌菌注注注注射射射射入入入入BALB/ctBALB/ctBALB/ctBALB/ct小鼠体内,观察二者感染小鼠致死率是否不一样。小鼠体内,观察

40、二者感染小鼠致死率是否不一样。小鼠体内,观察二者感染小鼠致死率是否不一样。小鼠体内,观察二者感染小鼠致死率是否不一样。3)3)3)3)分别将感受态缺点和非缺点菌滴入分别将感受态缺点和非缺点菌滴入分别将感受态缺点和非缺点菌滴入分别将感受态缺点和非缺点菌滴入QSQSQSQS小鼠鼻黏膜小鼠鼻黏膜小鼠鼻黏膜小鼠鼻黏膜上,观察二者感染小鼠致死率是否不一样。上,观察二者感染小鼠致死率是否不一样。上,观察二者感染小鼠致死率是否不一样。上,观察二者感染小鼠致死率是否不一样。如何申请国家自然科学基金第32页 研研究究内内容容(五五):检检测测感感受受态态缺缺点点及及非非缺缺点点菌菌基基因因comCcomC、D

41、D、E E在在体体外外和和体体内内表表示示情情况况,以以深深入入验验证证细细菌菌毒毒力力改改变变是是否否与与其其感感受受态态形形成成相关。相关。1)1)1)1)合成基因合成基因合成基因合成基因comCcomCcomCcomC、D D D D、E E E E探针,做探针,做探针,做探针,做northern blotnorthern blotnorthern blotnorthern blot。2 2 2 2)制备基因)制备基因)制备基因)制备基因comCcomCcomCcomC、D D D D、E E E E蛋白抗体,做蛋白抗体,做蛋白抗体,做蛋白抗体,做western blotwestern

42、blotwestern blotwestern blot。如何申请国家自然科学基金第33页 3 3、拟处理关键问题:、拟处理关键问题:存在问题:未能抓住关键问题或抓得不准。存在问题:未能抓住关键问题或抓得不准。存在问题:未能抓住关键问题或抓得不准。存在问题:未能抓住关键问题或抓得不准。撰写要求:找出关键问题,写出处理方法。撰写要求:找出关键问题,写出处理方法。撰写要求:找出关键问题,写出处理方法。撰写要求:找出关键问题,写出处理方法。什么是关键问题什么是关键问题什么是关键问题什么是关键问题?-研究过程中对达预期目标有主要影响研究过程中对达预期目标有主要影响研究过程中对达预期目标有主要影响研究过

43、程中对达预期目标有主要影响 一些研究内容或原因。一些研究内容或原因。一些研究内容或原因。一些研究内容或原因。-为达预期目标所必须掌握关键技术或为达预期目标所必须掌握关键技术或为达预期目标所必须掌握关键技术或为达预期目标所必须掌握关键技术或 研究伎俩。研究伎俩。研究伎俩。研究伎俩。如何申请国家自然科学基金第34页 4 4、研究方法、研究方法 存在问题:存在问题:存在问题:存在问题:过于简单:在试验方案中只有方法名称而无详细步骤。过于简单:在试验方案中只有方法名称而无详细步骤。过于简单:在试验方案中只有方法名称而无详细步骤。过于简单:在试验方案中只有方法名称而无详细步骤。过于繁杂:大量罗列一些常规

44、试验方法。过于繁杂:大量罗列一些常规试验方法。过于繁杂:大量罗列一些常规试验方法。过于繁杂:大量罗列一些常规试验方法。撰写要求:撰写要求:撰写要求:撰写要求:以研究项目标需求为前提,尽可能采取当前以研究项目标需求为前提,尽可能采取当前以研究项目标需求为前提,尽可能采取当前以研究项目标需求为前提,尽可能采取当前 最先进方法和伎俩,并将其操作步骤和关键步骤体最先进方法和伎俩,并将其操作步骤和关键步骤体最先进方法和伎俩,并将其操作步骤和关键步骤体最先进方法和伎俩,并将其操作步骤和关键步骤体 现在技术路线当中。现在技术路线当中。现在技术路线当中。现在技术路线当中。如何申请国家自然科学基金第35页 5

45、5、技术路线、技术路线 存在问题:存在问题:存在问题:存在问题:不清楚,不详细。不清楚,不详细。不清楚,不详细。不清楚,不详细。撰写要求:撰写要求:撰写要求:撰写要求:清楚、详细、注意逻辑性。清楚、详细、注意逻辑性。清楚、详细、注意逻辑性。清楚、详细、注意逻辑性。撰写方法:撰写方法:撰写方法:撰写方法:以时间次序为根本设计技术路线以时间次序为根本设计技术路线以时间次序为根本设计技术路线以时间次序为根本设计技术路线以研究内容为根本设计技术路线以研究内容为根本设计技术路线以研究内容为根本设计技术路线以研究内容为根本设计技术路线分大小标题,突出逻辑关系。分大小标题,突出逻辑关系。分大小标题,突出逻辑

46、关系。分大小标题,突出逻辑关系。详细地写清楚每个详细步骤。详细地写清楚每个详细步骤。详细地写清楚每个详细步骤。详细地写清楚每个详细步骤。如何申请国家自然科学基金第36页 6 6、可行性分析、可行性分析 理论分析理论分析理论分析理论分析 研究伎俩、方法分析研究伎俩、方法分析研究伎俩、方法分析研究伎俩、方法分析 预试验结果分析预试验结果分析预试验结果分析预试验结果分析 所用特殊试验材料(试剂)分析所用特殊试验材料(试剂)分析所用特殊试验材料(试剂)分析所用特殊试验材料(试剂)分析 对所具备试验条件进行分析对所具备试验条件进行分析对所具备试验条件进行分析对所具备试验条件进行分析 对项目组组员搭配及其

47、利用技术方法能力分析对项目组组员搭配及其利用技术方法能力分析对项目组组员搭配及其利用技术方法能力分析对项目组组员搭配及其利用技术方法能力分析如何申请国家自然科学基金第37页 CP1250CP1250肺肺炎炎链链球球菌菌及及质质粒粒pEVP3pEVP3由由MorrisonMorrison教教授授赠赠予予,人人肺肺癌癌上上皮皮A A549549细细胞胞已已从从中中科科院院上上海海细细胞胞所所购购得得,流流式式细细胞胞仪仪荧荧光光记记数数测测定定在在我我校校儿儿童童医医院院完完成成,PCRPCR引引物物由由北北京京赛赛北北盛盛生生物物有有限限企企业业合成。合成。研究发觉,肺炎链球菌在感受态产生后可使

48、研究发觉,肺炎链球菌在感受态产生后可使一些蛋白表示,其中包含自溶素,这表明其感受一些蛋白表示,其中包含自溶素,这表明其感受态产生与细菌毒力改变相关,所以研究转化过程态产生与细菌毒力改变相关,所以研究转化过程与细菌致病之间关系是有事实基础。与细菌致病之间关系是有事实基础。如何申请国家自然科学基金第38页 当当前前研研究究表表明明肺肺炎炎链链球球菌菌感感受受态态形形成成都都受受到到操操纵纵子子comCDEcomCDE调调控控,所所以以失失活活基基因因comCcomC或或comDcomD或或comEcomE可可使使菌菌株株不不能能产产生生感感受受态态,已已经经有有经经过过失失活活这这几几个个基基因因

49、构构建建感感受受态态缺缺点点菌菌株株文文件件报报道道。cinAcinA为为转转化化相相关关基基因因,所所以以用用它它为为汇汇报报基基因因以以确确定定肺肺炎炎链链球球菌菌在在体体内内是是否否发发生生感感受受态态,已已经经有有构构建建cinA-LacZcinA-LacZ融合基因菌株报道。融合基因菌株报道。本本试试验验室室已已掌掌握握肺肺炎炎链链球球菌菌体体外外转转化化方方法法,而而粘粘附附及及毒毒力力试试验验方方法法已已经经有有多多篇篇报报道道。所所以以本本研研究技术路线从理论上讲是合理,而方法是成熟。究技术路线从理论上讲是合理,而方法是成熟。如何申请国家自然科学基金第39页 7 7、创新性、创新

50、性 对创新了解:创新性与先进性是有根本区分。对创新了解:创新性与先进性是有根本区分。对创新了解:创新性与先进性是有根本区分。对创新了解:创新性与先进性是有根本区分。原始创新:原始创新:原始创新:原始创新:填补空白或修改传统理论;填补空白或修改传统理论;填补空白或修改传统理论;填补空白或修改传统理论;新技术、新方法创造创造。新技术、新方法创造创造。新技术、新方法创造创造。新技术、新方法创造创造。跟踪创新:跟踪创新:跟踪创新:跟踪创新:在前人工作基础上补充、完善现有理论;在前人工作基础上补充、完善现有理论;在前人工作基础上补充、完善现有理论;在前人工作基础上补充、完善现有理论;对原有技术、方法进行

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