1、食品卫生监测技术食品卫生监测技术食品卫生监测技术第1页第三章食品卫生检测技术第一节有毒有害物质测定第二节食品添加剂测定第三节食品中有害矿物元素测定第四节常见食品掺假判别和检验学习关键点:了解食品卫生检测普通方法、原理,重点掌学习关键点:了解食品卫生检测普通方法、原理,重点掌学习关键点:了解食品卫生检测普通方法、原理,重点掌学习关键点:了解食品卫生检测普通方法、原理,重点掌握食品卫生检测操作技术。握食品卫生检测操作技术。握食品卫生检测操作技术。握食品卫生检测操作技术。思索与模拟实训题食品卫生监测技术第2页第三章食品卫生检测技术第一节有毒有害物质测定一、食品中黄曲霉毒素B1测定二、食品中N亚硝胺化
2、合物测定三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)食品卫生监测技术第3页一、食品中黄曲霉毒素B1测定(一)原理(二)试剂(三)仪器和用具(四)操作步骤(五)计算(六)注意事项第一节有毒有害物质测定第三章食品卫生检测技术食品卫生监测技术第4页第三章第一节 有毒有害物质测定一、食品中黄曲霉毒素B1测定(一)原理样品中黄曲霉毒素样品中黄曲霉毒素B1经有机溶剂提取,浓缩、净经有机溶剂提取,浓缩、净化以及薄层分离前处理后,在波长化以及薄层分离前处理后,在波长365nm紫外光下产紫外光下产生兰紫色荧光,依据其在薄层板上显示荧光最低检出生兰紫色荧光,依据其在薄层板上显示荧光最低检出量来测定含量。量来测定含
3、量。食品卫生监测技术第5页第三章第一节 有毒有害物质测定一、食品中黄曲霉毒素B1测定(二)试剂1、三氯甲烷、甲醇、苯、乙腈、丙酮2、正己烷(沸程3060)或石油醚(沸程6090).3、无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水4、苯乙腈(98:2)混合溶液:量取98ml苯,加2ml乙腈,混匀。5、甲醇水(55:45)溶液:配制方法同上。6、三氟乙酸、无水硫酸钠、氯化钠7、硅胶G,薄层色谱用。食品卫生监测技术第6页第三章第一节 有毒有害物质测定一、食品中黄曲霉毒素B1测定(二)试剂8、AFTB1标准溶液制备:用百万分之一微量分析天平精密称取11.2mgAFTB1标准品,先加入2ml乙腈溶解后,再用苯稀释至1
4、00ml。然后避光置于4冰箱中保留。最终进行AFTB1标准溶液浓度测定。(此标准溶液浓度为10g/ml)。9、AFTB1标准使用液:精密吸收1ml10g/ml标准溶液于10ml容量瓶中,加苯乙腈混合液至刻度,混匀。此溶液浓度为1g/ml。食品卫生监测技术第7页第三章第一节 有毒有害物质测定一、食品中黄曲霉毒素B1测定(二)试剂10、AFTB1标准使用液:精密吸收1.0ml1g/mlAFTB1标准使用液于5ml容量瓶中,加苯乙腈混合液稀释至刻度,摇匀。此溶液浓度为0.2g/ml。11、AFTB1标准使用液:精密吸收1.0mlAFTB1标准使用液于5ml容量瓶中,加苯乙腈混合液稀释至刻度,摇匀。此
5、溶液浓度为0.04g/ml。12、50/L次氯酸钠溶液:取100g漂白精,加入500ml水,搅拌均匀。另将160g工业用碳酸钠(Na2CO310H2O)溶于500ml温水中,再将两液混合,搅拌,澄清后,再过滤即可。食品卫生监测技术第8页第三章第一节 有毒有害物质测定一、食品中黄曲霉毒素B1测定(三)仪器和用具 1、小型粉碎机、样筛、电动振荡器2、全玻璃浓缩器、电子恒温水浴锅、薄层板涂布器3、玻璃板:5cm20cm。4、展开槽:内长25cm,宽6cm,高4cm。5、紫外光灯:100125W,带有波长365nm滤光片6、微量进样器、蒸发器:50ml食品卫生监测技术第9页第三章第一节 有毒有害物质测
6、定一、食品中黄曲霉毒素B1测定(四)操作步骤1、样品提取、净化、样品提取、净化2、样品测定(单向展开法)、样品测定(单向展开法)食品卫生监测技术第10页第三章 第一节 一、(四)操作步骤1、样品提取、净化、样品提取、净化(1)玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、)玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等。花生酱等。称取20g粉碎过筛样品(面粉、花生酱不需粉碎),置于250ml具塞锥形瓶中,加30ml正乙烷或石油醚和100ml甲醇水溶液,在瓶塞上涂上一层水,盖严防漏。振荡30min,静置片刻,以叠成折叠式快速定性滤纸过滤于分液漏斗中,等下层甲醇水溶液分清后,放出甲醇水溶液于另一具
7、塞锥形瓶中。取20.0ml甲醇水溶液提取液(相当于4g样品)置于另一个125ml分液漏斗中,加20mlCHCl3,振摇2min,静置分层(如出现乳化则可滴加甲醇使其分层),放出CHCl3层,经盛有约10g先用CHCl3湿润无水硫酸钠慢速定量滤纸过滤于50ml蒸发皿中,分液漏斗中再加5mlCHCl3重复振摇提取,CHCl3层一并滤于蒸发皿中,最终用少许CHCl3洗滤器,洗液并于蒸发皿中。食品卫生监测技术第11页第三章 第一节 一、(四)操作步骤1、样品提取、净化、样品提取、净化(1)玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、)玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等。花生酱等。将蒸发皿
8、放在通风橱内于65水浴上通风挥干,然后放在冰箱内冰却23min后,准确加入1ml苯乙腈混合液(或将CHCl3用浓缩蒸馏器减压吹干蒸干,然后再准确加入1ml苯乙腈混合液)。用带橡皮头滴管管尖将残渣充分混合,假如有苯结晶析出,则将蒸发皿取下,继续溶解、混合,晶体则马上消失,再用此滴管吸收上清液转移于2ml具塞试管中。食品卫生监测技术第12页第三章 第一节 一、(四)操作步骤1、样品提取、净化、样品提取、净化(2)花生油、香油、菜油等)花生油、香油、菜油等 称取4g混匀样品于小烧杯中,用20ml正己烷或石油醚将样品转移于125ml分液漏斗中。用20ml甲醇水溶液分数次洗烧杯,洗液一并转入分液漏斗中,
9、振摇2min,静置分层后,将下层甲醇水溶液移于第二只分液漏斗中,再用5ml甲醇水溶液重复振摇提取一次,提取液一并转移入第二只分液漏斗中,在第二只分液漏斗中加入CHCl3,以下自“振摇2min,静置分层”起同(1)中操作。食品卫生监测技术第13页第三章 第一节 一、(四)操作步骤1、样品提取、净化、样品提取、净化(3)酱油、醋)酱油、醋 称取10g样品于小烧杯中,为预防提取乳化,加0.4g氯化钠,移入分液漏斗中,烧杯用15mlCHCl3分数次洗涤,洗液并入分液漏斗中。以下自“振摇2min,静置分层”起同(1)中操作。最终加入2.5ml苯乙腈混合液,此溶液每毫升相当于4g样品。食品卫生监测技术第1
10、4页第三章 第一节 一、(四)操作步骤1、样品提取、净化、样品提取、净化(4)干酱类(包含豆豉、腐乳制品)干酱类(包含豆豉、腐乳制品)(5)发酵酒类)发酵酒类样品提取方法同(3)(酱油、醋类),但不加0.4g氯化钠。称取20g研磨均匀样品置于250ml具塞锥形瓶中,加入20ml正己烷或石油醚与50ml甲醇水溶液。振荡30min,静置片刻,以叠成折叠式快速定性滤纸过滤,将滤液静置分层后,取24ml甲醇水层(相当于8g样品,其中包含8g干酱类样品本身约含有4ml水体积在内)置于分液漏斗中,加入20mlCHCl3,以下自“振摇2min,静置分层”起同(1)中操作。最终加入2ml苯乙腈混合液。此溶液每
11、1毫升相当于4g样品。食品卫生监测技术第15页第三章 第一节 一、(四)操作步骤2、样品测定(单向展开法)、样品测定(单向展开法)(1)薄层板制备薄层板制备 称取约3g硅胶G,加入相当于硅胶量23倍左右水,用力研磨12min至成糊状后马上倒入涂布器内,推成520cm,厚度约0.25mm簿层板三块。在空气中干燥大约15min后,放入100烘箱内活化2h,取出在干燥器中保留。普通可保留23d,若放置时间较长,可再进行干燥活化后使用。食品卫生监测技术第16页第三章 第一节 一、(四)操作步骤2、样品测定(单向展开法)、样品测定(单向展开法)(2)点样)点样将簿层板边缘附着吸附剂刮净,在距薄层板下端3
12、cm处做一个基线,然后在基线上用微量注射器滴加样液。一块板可滴加4个点,点距边缘和点间距约为1cm,点直径约为3mm。要求在同一块板上滴加点大小应一致,可用吹风机冷风边吹边加。滴加样点以下:第一点:10l、0.04g/mlAFTB1标准使用液。第二点:20l样品溶液。第三点:20l样液10l0.04g/mlAFTB1标准使用液。第四点:20l样液10l0.2g/mlAFTB1标准使用液。食品卫生监测技术第17页第三章 第一节 一、(四)操作步骤2、样品测定(单向展开法)、样品测定(单向展开法)(3)展开与观察)展开与观察加入10ml无水乙醚于展开槽内,预展12cm,取出挥干。再于另一展开槽内加
13、入10ml丙酮:三氯甲烷(8:92)溶剂,展开1012cm,取出在紫外光下观察结果,方法以下:第一点滴加10lAFTB1标准使用液,其中含AFTB10.04g/ml(最低检出量5g/kg)。可作为检验薄层板好坏及色谱是否适当,能检出最低检出量。假如展开后此点无荧光,则说明薄层板或色谱条件存在问题。食品卫生监测技术第18页第三章 第一节 一、(四)操作步骤2样品测定(单向展开法)样品测定(单向展开法)(3)展开与观察)展开与观察第三点和第四点上滴加了样液和AFTB1标准液,可使样液中AFTB1荧光点和标液AFTB1荧光点重合。加以认证。第三点是用来检验最低检出量在样液中是否能正常展现,假如第一点
14、呈阳性,第三点呈阴性则说明样品提取存在问题,可能存在荧光猝灭剂,应重新提取。第四点主要是起定位作用。AFTB1Rf值约0.6。第二点起判断作用。假如第二点(样液)在AFTB1标准点对应位置(Rf0.6)处呈阴性,而其它各点均呈阳性,则说明样品中AFBT1含量在5g/kg(最低检出量)以下,假如第二点在其对应位置上呈阳性,则需进行确证试验。食品卫生监测技术第19页第三章 第一节 一、(四)操作步骤2、样品测定(单向展开法)、样品测定(单向展开法)(4)确证试验)确证试验为了证实在薄层板上样液展现荧光确系由AFTB1产生,则在样点上滴加三氟乙酸,产生AFTB1衍生物,继续展开后,此衍生物Rf值约为
15、0.1左右。方法以下:依次在薄层板左边滴加两个点:第一点:10l 0.04g/mlAFTB1标准使用液。第二点:20l样液。在以上两点处各加一小滴三氟乙酸盖于其上,经反应5min后,用电吹风机吹热风2min,热风吹到薄层板上温度不得高于40,再于薄板右边滴加以下两点。第三点:10l0.04g/mlAFTB1标准使用液。第四点:20l样液。同前展开后,在紫外光下观察样液是否产生与AFTB1标准点相同衍生物。第三点和第四点,可作为样液与标准衍生物空白对照。食品卫生监测技术第20页第三章 第一节 一、(四)操作步骤2、样品测定(单向展开法)、样品测定(单向展开法)(5)稀释定量)稀释定量样液中AFT
16、B1荧光点荧光强度与AFTB1标准点(最低检出量)荧光强度一致,则表示样品AFTB1含量在5g/kg;如样液中荧光强度比最低检出量强,则依据其强度预计降低点样量或将样液稀释后再点样,直至样液点荧光强调与最低检出量荧光强度一致为止,滴加样式以下:第一点:10g/ml AFTB1标使液。第二点:依据详细情况点10l样液。第三点:依据详细情况点15l样液。第四点:依据详细情况点20l样液。食品卫生监测技术第21页第三章第一节 有毒有害物质测定一、食品中黄曲霉毒素B1测定(五)计算X=0.0004式中:X 样品中AFTB1含量,g/kg;V1 稀释前样液体积,ml;V2 出现一样最低荧光强度时滴加样液
17、点样量,l;D 样液总稀释倍数;m 稀释前相当样品质量,g;0.0004 AFTB1最低检出量,g。食品卫生监测技术第22页1、本法灵敏度较高,轻易产生误差。如薄层板制作不平整、不均匀,点样间距太小等都会产生误差。2、AFTB1标准贮备液应密封于具塞试管中,在4oc冰箱中避光保留。假如在保留期间体积显著降低,应及时补充溶剂。使用前,应对其测定标准液浓度。3、AFT是一个剧毒和强致癌性物质,所以,在使用时尤其注意其安全保护。如试验时应佩戴口罩,配标液时应戴乳胶手套。如被标液污染时应及时用50g/L次氯酸钠溶液浸泡消毒。试验结束后应做好清洗消毒工作,对于剩下AFT标液以及呈阳性样液,应先用50g/
18、L次氯酸钠处理后方可倒在指定地方。试验所用玻璃器皿消毒后再进行清洗(用50g/L次氯酸那浸泡5min)。第三章第一节 有毒有害物质测定一、食品中黄曲霉毒素B1测定(六)注意事项食品卫生监测技术第23页第三章食品卫生检测技术二、食品中N亚硝胺化合物测定(一)原理(二)试剂(三)仪器和用具(四)操作步骤(五)计算(六)注意事项第一节有毒有害物质测定食品卫生监测技术第24页第三章 第一节 有毒有害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(一)原理本法是测定食品中挥发性本法是测定食品中挥发性N亚硝胺总量方法。亚硝胺总量方法。食品中挥发性亚硝胺经水蒸气蒸馏纯化后,经过食品中挥发性亚硝胺经水蒸气蒸馏纯化后,经
19、过紫外光照射,分解释放为亚硝酸根。然后利用强碱性紫外光照射,分解释放为亚硝酸根。然后利用强碱性离子交换树脂浓缩,在酸性条件下与对位氨基苯磺酸离子交换树脂浓缩,在酸性条件下与对位氨基苯磺酸形成重氮盐,最终与形成重氮盐,最终与N萘乙烯二胺二盐酸盐形成红色萘乙烯二胺二盐酸盐形成红色偶氮染料。颜色深浅与偶氮染料。颜色深浅与N亚硝胺含量成正比。亚硝胺含量成正比。食品卫生监测技术第25页第三章 第一节 有毒有害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(二)试剂1、0.1mol/L磷酸缓冲溶液(PH7):分别吸收0.1mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)61.9ml和0.1mol/L磷酸氢二钠(NaH2PO4
20、)39.0ml,将二者混合而成缓冲溶液。2、300g/L醋酸溶液3、0.5mol/L氢氧化钠溶液4、1.7mol/L盐酸溶液5、100g/ml二乙基亚硝胺标准溶液6、100g/ml亚硝酸钠标准溶液7、1mol/L氢氧化钠溶液:用正丁醇饱和食品卫生监测技术第26页第三章 第一节 有毒有害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(二)试剂810g/L硫酸锌溶液9强碱性离子交换树脂:交链度8,粒度150目。10显色剂:显色剂A10g/L对位氨基苯磺酸300g/L醋酸溶液显色剂B2g/LN1萘乙烯二胺二盐酸盐300g/L醋酸溶液显色剂C10g/L对位氨基苯磺酸1.7mol/L盐酸溶液显色剂D10g/LN1
21、萘乙烯二胺二盐酸盐溶液食品卫生监测技术第27页第三章 第一节 有毒有害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(三)仪器和用具 分光光度计分光光度计紫外灯:紫外灯:BR69盘形杀菌灯(盘形杀菌灯(10W)食品卫生监测技术第28页第三章 第一节 有毒有害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(四)操作步骤1、亚硝胺标准曲线绘制、亚硝胺标准曲线绘制准确吸收亚硝胺标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10ml,分别放入小培养皿中,在小培养皿中分别加入PH7磷酸缓冲溶液,使溶液总体积为2.0ml,摇匀。在紫外光下照1min。然后依次加入0.5ml显色剂A,摇匀,再加入0.5ml显色剂B
22、,使溶液呈玫瑰红色后,分别在550nm波长下用分光光度计测定其吸光度,然后绘制其标准曲线。食品卫生监测技术第29页第三章 第一节 有毒有害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(四)操作步骤、样品制备、样品制备液体样品:称取10.020.0g样品(依据样品中亚硝胺含量大小称量),移入100ml容量瓶中,加入0.5mol/L氢氧化钠溶液,调整其浓度为1mol/L,摇匀后过滤,搜集滤液备用。固体样品:将固体样品捣碎或研磨搅拌均匀,称取20.0g,用正丁醇饱和过1mol/L氢氧化钠溶液将其转移入100ml容量瓶中至刻度,摇匀后浸泡过夜,最终离心取清液备用。食品卫生监测技术第30页第三章 第一节 有毒有
23、害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(四)操作步骤、挥发性、挥发性N亚硝胺总量测定亚硝胺总量测定吸收样品50ml清液置于蒸馏瓶内,将其进行夹层保温水蒸气蒸馏,搜集馏出液25ml,用300g/L醋酸溶液调整其PH值至34。再继续蒸馏,再搜集馏出液25ml,用0.5mol/L氢氧化钠调至PH78。在紫外光下照射15min,经过强碱性离子(氯离子型)交换柱(1cm0.5cm)浓缩,用少许蒸馏水水洗,然后用1mol/L氯化钠溶液洗脱亚硝酸根,然后分管搜集洗脱液,每管1ml,直至所搜集洗脱液加入显色剂不显色为止。在管中各加入1.0mlPH7磷酸缓冲溶液、0.5ml显色剂A,摇匀,然后再加入0.5ml显
24、色剂B,待溶液呈玫瑰红色后,在分光光度计以550nm波长下测定其吸光度,依据其吸光度,从标准曲线中查得每管亚硝胺含量,计算其总含量。食品卫生监测技术第31页第三章 第一节 有毒有害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(五)计算X 1000 式中:X挥发性N亚硝胺含量,g/kg;m1相当于挥发性N亚硝胺标准量,g;m测定时样品溶液相当于样品量,g。食品卫生监测技术第32页第三章 第一节 有毒有害物质测定二、食品中N亚硝胺化合物测定(六)注意事项 对于亚硝酸盐含量高样品,因为二甲胺与亚硝酸盐在酸性条件下能结合产生亚硝胺,所以,会影响N亚硝胺测定结果。能够用一样比色法计算出亚硝酸盐相当于挥发性N亚硝
25、胺含量X0,然后再减去X0得到实际样品中挥发性N亚硝胺含量。食品卫生监测技术第33页第三章食品卫生检测技术三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(一)原理(三)试剂(四)主要仪器(五)操作方法(六)定性定量(七)注意事项第一节有毒有害物质测定(二)特点及适用范围食品卫生监测技术第34页第三章 第一节 有毒有害物质测定(一)原理三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)食品中残留有机磷农药经有机溶剂提取并经净化、浓缩后,注入气相色谱仪,气化后在载气携带下于色谱柱中分离,并由火焰光度检测器检测。当含有机磷样品于检测器中富氢火焰上燃烧时,以HPO碎片形式,放射出波长为526mn特征光,这种光
26、经过滤片选择后,由光电倍增管接收,转换成电信号,经微电流放大器放大后,由统计仪统计下色谱峰。经过比较样品峰高和标准品峰高,计算出样品中有机磷农药残留量。食品卫生监测技术第35页第三章 第一节 有毒有害物质测定三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(二)特点及适用范围本法采取火焰光度检测器,对含磷化合物含有高选择性和高灵敏性,而且对有机磷检出极限比碳氢化合物高10000倍,故排除了大量溶剂和其它碳氢化合物干扰,有利于痕量有机磷农药分析。本法适合用于粮食、果蔬、食用植物油中常见有机磷农药残留量测定。为国家标准方法,最低检出量为0.10.25ng。食品卫生监测技术第36页第三章 第一节 有毒有
27、害物质测定三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(三)试剂1、二氯甲烷、丙酮;2、无水硫酸钠:经650灼烧4h后,贮于密封瓶中备用;3、50g/L硫酸钠溶液:称取5g硫酸钠,用少许水溶解并稀释至100ml;4、中性氧化铝:色谱用,经300活化4h后备用;5、活性炭:称取20g活性炭,用3mol/LHCL浸泡过改变多夜,抽滤后,用水洗至无氯离子,于120下烘干备用;食品卫生监测技术第37页第三章 第一节 有毒有害物质测定三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(三)试剂6、有机磷农药标准贮备液:精密称取有机磷农药标准品敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、稻瘟净、杀螟硫磷及虫螨磷各1
28、0.0mg,分别置于10ml容量瓶中,用苯(或氯仿)溶解并稀释至100mL。此溶液含农药1mg/ml,作为贮备液贮于冰箱中;7、有机磷农药标准混合溶液:临用时,用二氯甲烷将有机磷标准贮备液稀释成二组标准混合溶液,各有机磷农药浓度为:第一组每ml含敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷,甲拌磷各1g,第二组每ml含稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷、虫螨磷各2g;食品卫生监测技术第38页第三章 第一节 有毒有害物质测定三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(三)试剂8有机磷农药标准混合溶液:系列分别吸收2组有机磷标准混合溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml于2组6个10ml容量
29、瓶中,用二氯甲烷分别稀释至刻度。此系列标准混合液中每一组含敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷等各种农药系列浓度均依次为0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10g/ml;第二组含稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷、虫螨磷等各种农药系列浓度均依次为0.00、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20g/ml。此系列标准混合溶液应依据GC仪灵敏度于临用前配制。食品卫生监测技术第39页第三章 第一节 有毒有害物质测定三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(四)主要仪器1气相色谱议,附火焰光度检测器2电动振荡器、KD浓缩器食品卫生监测技术第40页第三章 第一节 有毒有害物质测定三
30、、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(五)操作方法1、样品预处理(提取、净化和浓缩)样品预处理(提取、净化和浓缩)、色谱分析条件、色谱分析条件、测定、测定食品卫生监测技术第41页第三章 第一节 三(五)操作方法1、样品预处理(提取、净化和浓缩)样品预处理(提取、净化和浓缩)(1)蔬菜)蔬菜将蔬菜切碎混匀。称取10g混匀样品置于250ml具塞锥形瓶中,加30至100g无水硫酸钠(视蔬菜含水量而定)脱水,猛烈振荡后,如有固体Na2SO4存在,说明所加无水Na2SO4已够。加20.8g活性炭(视蔬菜色素含量而定)脱色。加70ml 二氯甲烷在振荡器上振摇 0.5h,经滤纸过滤,量取35ml滤液于
31、通风柜中室温自然挥发至近干,用二氯甲烷少许屡次研洗残渣,移入10ml或5ml具塞刻度试管中,并定容至2ml备用。食品卫生监测技术第42页第三章 第一节 三(五)操作方法1、样品预处理(提取、净化和浓缩)样品预处理(提取、净化和浓缩)()粮食将样品磨粉(稻谷先脱壳),过20目筛,混匀。称取10g置于具塞锥形瓶中,加入0.5g中性氧化铝(小麦、玉米再加0.2g活性炭)及20ml二氯甲烷,振摇0.5h,过滤,滤液直接进样。若农药残留量过低,则加30ml二氯甲烷,振摇过滤,量取15ml滤液经KD浓缩器浓缩并定容至2ml进样。食品卫生监测技术第43页第三章 第一节 三(五)操作方法1、样品预处理(提取、
32、净化和浓缩)样品预处理(提取、净化和浓缩)()植物油()植物油称取5g混匀样品,用50ml丙酮分次溶解并洗入分液漏斗中,摇匀后加10ml水,轻轻旋转振摇1min,静置1h以上,弃去下面析出油层,上层溶液自分液漏斗上口倾入另一分液漏斗中,当心尽可能不使剩下油滴倒入(如乳化严重,分层不清,则放入50ml离心管中,于2500r/min转速下离心0.5h,用滴管吸出上层清液)。加30ml二氯甲烷,100ml50g/L Na2SO4溶液,振摇1min,静置分层后,将二氯甲烷层移至蒸发皿中,丙酮水溶液再用10mL二氯甲烷提取一次,分层后,合并入蒸发皿中,自然挥发后,用二氯甲烷少许屡次研洗蒸发皿中残渣,并入
33、具塞量筒中,并定容至5ml。加3g无水硫酸钠振摇脱水,再加1g中性氧化铝、0.2g活性炭(毛油可加0.5g)振摇、脱色、过滤、滤液可直接进样。食品卫生监测技术第44页第三章 第一节 三(五)操作方法、色谱分析条件、色谱分析条件(1)色谱柱)色谱柱 分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷色谱柱固定相为:载体:6080目Chromosorb WAW DMCS。固定液:25g/L SE30/30g/L QF1混合固定液或15g/L OV17/20g/L QF1混合固定液或20g/L OV101/20g/L QF1混合固定液。分离测定甲拌磷、虫螨磷、稻瘟净、倍硫磷和杀螟硫磷色谱柱固定相为:载体:608
34、0目Chromosorb WAW DMCS。固定液:30g/L PEGA/50g/L QF1混合固定液或20g/L NPGA/30g/L QF1混合固定液。玻璃柱,内径玻璃柱,内径3mm,长,长2.0m食品卫生监测技术第45页第三章 第一节 三(五)操作方法、色谱分析条件、色谱分析条件()气流速度()气流速度载气(N2)80ml/min、空气50ml/min、氢气180ml/min。(N2、空气、H2之比应按各GC仪型号不一样选择各自最正确百分比条件)()温度()温度进样口220;检测器240;柱温180(敌敌畏为:130)。食品卫生监测技术第46页第三章 第一节 三(五)操作方法、测定、测定
35、将各浓度两组标准混合液25L分别注入气相色谱仪中,在各组色谱分析条件下可测得不一样浓度各有机磷农药标准溶液峰高,以峰高为纵坐标,农药浓度为横坐标,分别绘制各标准有机磷农药标准曲线。同时取样品溶液25L,注入气相色谱仪中,测得峰高,并从对应标准曲线上查出对应含量。食品卫生监测技术第47页(六)定性定量第三章 第一节 有毒有害物质测定三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)定性分析:定性分析:经过比较样品中各组分与标准有机磷农药保留时间进行定性分析。定量计算:定量计算:样品中各有机磷农药含量可按下式计算 式中:X样品中各有机磷农药含量,mg/kg;m1进样体积中各有机磷农药含量(g,由对应标准
36、曲线上查得);V样液浓缩后总体积,ml;V1样液进样体积,L;m样品质量,g;食品卫生监测技术第48页第三章 第一节 有毒有害物质测定三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(七)注意事项1、国际上多用乙腈作为有机磷农药提取试剂及分配净化试剂,如AOAC,FDA等采取与有机氯农药提取净化大致相同方法来提取,净化有机磷农药,即用乙腈或石油醚提取,用乙腈/水分配或乙腈/石油醚分配等方法净化。但乙腈毒性大,价格贵,且不易购置,故本法采取二氯甲烷提取,并在提取时依据样品性状加适量无水Na2SO4、中性氧化铝、活性炭以脱水、脱油、脱色,基础上一次完成提取、净化目标。另有用各种吸附柱(如弗罗里矽土柱、
37、活性炭等)或用扫集共蒸馏方法净化。食品卫生监测技术第49页2、分析测定有机磷农药时,因为农药性质不一样,故应注意担体与固定液选择,普通标准是:被分离农药是极性化合物,则选择极性固定液;若被分离农药是非极性化合物,则选择非极性固定液,若选择前者,各农药出峰次序普通为极性小农药先出峰,极性大农药后出峰;若选择后者,则按沸点高低出峰,低沸点化合物先出峰。3、有些热稳定性差有机磷农药如敌敌畏在用气相色谱仪测定时比较困难,主要原因是易被担体所吸附,同时因对热不稳定而引发分解。故可采取缩短色谱柱到11.3m,或减小固定液涂渍厚度和降低操作温度(如本法)等办法来克服上述困难。第三章 第一节 有毒有害物质测定
38、三、食品中有机磷农药残留量测定(气相色谱法)(七)注意事项食品卫生监测技术第50页第三章食品卫生检测技术第二节食品添加剂测定一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)二、食品中硝酸盐测定(镉柱法)三、食品中亚硫酸盐测定(盐酸副玫瑰苯胺法)四、小麦粉中过氧化苯甲酰测定(气相色谱法)五、食品中苯甲酸(钠)测定(碱滴定法)六、食品中糖精钠测定(高效液相色谱法)食品卫生监测技术第51页第三章食品卫生检测技术一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)(一)原理(二)试剂(三)仪器和用具(四)操作方法(五)结果计算(六)注意事项第二节食品添加剂测定食品卫生监测技术第52页第三章 第二节 食品添加剂测定(一)原
39、理一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)样品经沉淀蛋白质除去脂肪后,在弱酸条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化,生成重氮化合物,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色颜料,在538nm波长下测定其吸光度与标准比较定量。本法最低检出限为0.0001g/kg。其反应式以下:食品卫生监测技术第53页第三章 第二节 食品添加剂测定一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)(二)试剂1、亚铁氰化钾溶液:称取106g亚铁氰化钾K4Fe(CN)63H2O,溶于水后稀释至1000ml。2、乙酸锌溶液:称取220g乙酸锌Zn(CH3COO)22H2O,加30ml冰乙酸溶于水,稀释至1000ml。3、饱和硼砂溶液:称取5
40、g硼酸钠Na2B4O710H2O,溶于100ml热水中,冷却后备用。4、4g/L对氨基苯磺酸溶液:称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100ml 20%盐酸中,避光保留。食品卫生监测技术第54页第三章 第二节 食品添加剂测定一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)(二)试剂5、2g/L盐酸萘乙二胺溶液:称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100ml水中,避光保留。6、亚硝酸钠标准溶液:精密称取0.1000g在硅胶干燥器中干燥24h亚硝酸钠,用蒸馏水溶解移入500ml容量瓶中,并稀释至刻度。此溶液亚硝酸钠含量为200g/ml。7、亚硝酸钠标准使用液:临用前,吸收亚硝酸钠标准溶液5.00ml置于200ml容量
41、瓶中,加水稀释至刻度,此溶液亚硝酸钠含量为5g/ml。食品卫生监测技术第55页第三章 第二节 食品添加剂测定一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)(三)仪器和用具 小型绞肉机小型绞肉机分光光度计分光光度计食品卫生监测技术第56页第三章 第二节 食品添加剂测定一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)(四)操作方法称取5.0g经绞碎混匀样品,将其置于50ml烧杯中,加入12.5ml硼砂饱和溶液,搅拌均匀,用70左右水约300ml,将样品全部转移入500ml容量瓶中,置沸水浴中加热15min后,取出冷却至室温,然后边转动边加入5ml亚铁氰化钾溶液,摇匀后再加入5ml乙酸锌溶液以沉淀蛋白质,加水至刻
42、度,混匀,放置0.5h,除去上层脂肪后将清液用滤纸过滤,弃去初滤液约30ml,搜集滤液备用。1、样品处理食品卫生监测技术第57页第三章 第二节 食品添加剂测定一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)(四)操作方法、测定吸收40ml上述滤液于50ml比色管中,另吸收0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50ml亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5g亚硝酸钠),分别置于50ml比色管中。在样品管和标准系列中分别加入2ml4g/L对氨基苯磺酸溶液,混匀后静置35min,再分别加入1ml2g/L盐酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混
43、匀后静置15min,然后以2cm比色杯,用零管调整零点,于538nm波长下测定吸光度,并绘制标准曲线比较定量。食品卫生监测技术第58页第三章 第二节 食品添加剂测定一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)(五)结果计算X式中:X样品中亚硝酸盐含量,g/kg;m样品质量,g;A测定用样液中亚硝酸钠含量,g;V1样品处理液总体积,ml;V2比色时吸收样品处理液体积,ml。食品卫生监测技术第59页第三章 第二节 食品添加剂测定一、食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)(六)注意事项1、显色时PH值以1.93.0为宜,显色后稳定性与室温相关,普通认为显色温度为1530,在2030min内比色为好。2、当
44、样品中亚硝酸盐含量高时,过量亚硝酸盐能够将生成偶氮化合物氧化,使红色消失,对结果产生影响,能够采取先放入试剂,然后再滴加试液方法,预防氧化。食品卫生监测技术第60页第三章食品卫生检测技术二、食品中硝酸盐测定(镉柱法)(一)原理(二)试剂(三)仪器和用具(四)测定方法(五)结果计算(六)注意事项第二节食品添加剂测定食品卫生监测技术第61页第三章 第二节 食品添加剂测定二、食品中硝酸盐测定(镉柱法)(一)原理样品经过沉淀蛋白质,除去脂肪后,将样品液经过镉柱,使其中硝酸根离子还原成亚硝酸根离子,在弱酸性条件下,亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,测得出亚硝酸盐含量,然后
45、再依据还原前后亚硝酸盐含量比较即得硝酸盐含量。食品卫生监测技术第62页第三章 第二节 食品添加剂测定二、食品中硝酸盐测定(镉柱法)(二)试剂1、氨缓冲溶液(PH9.69.7):量取20ml盐酸,加50ml水,混匀后加50ml氨水,并加水稀释至1000ml,混匀。2、稀氨缓冲液:量取50ml氨缓冲溶液,加水稀释至500ml,混匀。3、0.1mol/L盐酸溶液:量取5ml盐酸,加水稀释至600ml。4、硝酸钠标准溶液:精密吸收0.1232g于110120干燥恒重硝酸钠,用水溶解转移至500ml容量瓶中,并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于亚硝酸钠200g。5、硝酸钠标准使用液:临用时吸收硝酸钠标准溶液
46、2.5ml置于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于亚硝酸钠5g。食品卫生监测技术第63页第三章 第二节 食品添加剂测定二、食品中硝酸盐测定(镉柱法)(三)仪器和用具镉镉柱柱 食品卫生监测技术第64页第三章 第二节 食品添加剂测定二、食品中硝酸盐测定(镉柱法)(四)测定方法1、样品处理同亚硝酸盐测定、标准曲线绘制同亚硝酸盐测定、样品测定(1)样品中亚硝酸盐总量测定:吸收20ml样品处理液置于50ml烧杯中,加入5ml氨缓冲液,混匀,放入贮液漏斗中,使流经镉柱还原,以下按“镉柱还原效率测定操作”进行,搜集还原后样液于100ml容量瓶中,定容。吸收1020ml还原后样液于50ml比
47、色管中,以下按“镉柱还原效率测定操作”进行,测定其吸光度,在标准曲线上查出该样液亚硝酸盐总含量。(2)亚硝酸盐测定:吸收40ml样品处理液于50ml比色管中,以下按“镉柱还原效率测定操作”进行,测定其吸光度,在标准曲线上查得亚硝酸盐含量。食品卫生监测技术第65页第三章 第二节 食品添加剂测定二、食品中硝酸盐测定(镉柱法)(五)结果计算X1.232 式中式中:X样品中硝酸盐含量,g/kg;m样品质量,g;m1样品经镉柱还原后测得亚硝酸钠含量,g;m2直接测得亚硝酸钠含量,g;V测定时用经镉柱还原后样液体积,ml;1.232亚硝酸钠换算成硝酸钠系数。食品卫生监测技术第66页第三章 第二节 食品添加
48、剂测定二、食品中硝酸盐测定(镉柱法)(六)注意事项1、镉为自然界有害元素之一,在制作海绵镉或处理镉柱,不要弄到手和皮肤上,一旦接触应马上用水冲洗。另外在操作过程中废液含大量镉,故应经处理后再排放,以免造成环境污染。2、镉柱还原效能应经常检验,如维护得当,使用一年效能无显著改变。当样品连续检测时,可无须每次都洗涤镉柱,假如数小时内不用,则必须用上述方法洗涤镉柱。食品卫生监测技术第67页第三章食品卫生检测技术三、食品中亚硫酸盐测定(盐酸副玫瑰苯胺法)(一)原理(二)试剂(三)仪器和用具(四)操作方法(五)计算(六)注意事项第二节食品添加剂测定食品卫生监测技术第68页第三章 第二节 食品添加剂测定三
49、、食品中亚硫酸盐测定(盐酸副玫瑰苯胺法)(一)原理亚硫酸盐与四氯汞钠反应吸收后,生成稳定化合物,再与甲醛和盐酸副玫瑰苯胺作用,经分子重排后生成紫红色络合物,颜色深浅与二氧化硫浓度成正比,在550nm波长测定其吸光度,与标准系列比较定量。其反应以下:(HgCl4)2SO2H2O(HgCl2SO3)22Cl2H(HgCl2SO3)2HCHO2HHgCl2CH3OSO3H食品卫生监测技术第69页第三章 第二节 食品添加剂测定三、食品中亚硫酸盐测定(盐酸副玫瑰苯胺法)(二)试剂1、四氯汞钠吸收液:称取27.2g氯化高汞及11.9g氯化钠,溶于水中并稀释至1000ml,放置过夜,过滤后备用。2、12g/
50、L氨基磺酸铵溶液。3、2g/L甲醛溶液:吸收0.55ml无聚合沉淀36%甲醛,加水稀释至100ml混匀。4、淀粉指示液:称取1g可溶性淀粉,用少许水调成糊状,缓缓倾入100ml沸水中,边加边搅拌,煮沸,放冷备用,此溶液临用时现配。5、亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾K4Fe(CN)63H2O,加水溶解并稀释至100ml。6、乙酸锌溶液:称取22g乙酸锌Zn(CH3COO)22H2O溶于少许水中,加入3ml冰乙酸后加水稀释至100ml。食品卫生监测技术第70页三、食品中亚硫酸盐测定(盐酸副玫瑰苯胺法)(二)试剂第三章 第二节 食品添加剂测定7、盐酸副玫瑰苯胺溶液:称取0.1g盐酸副玫瑰苯