GH∕T 1291-2020 花椒及花椒加工产品 花椒酰胺总含量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.220.10 B 36 GH 中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准 GH/T 12912020 花椒及花椒加工产品 花椒酰胺总含量的测定 高效液相色谱法 Prickly ash and its processed productsDetermination of total fagaramideHigh performance liquid chromatography 2020 - 06 - 04 发布 2020 - 09 - 01 实施 中华全国供销合作总社 发 布 GH/T 12912020 I 前 言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准的附录A是资料性附录。 本标准由中华全国供销合作总社提出。 本标准由全国辛香料标准化技术委员会（SAC/TC 408）归口。 本标准起草单位： 中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院、 陕西为康食品科技股份有限公司、晨光生物科技集团股份有限公司、驻马店市王守义十三香调味品集团有限公司、山东百佳食品有限公司、中国食品土畜进出口商会调料分会。 本标准主要起草人：刘英杰、刘强、杨清山、张慧、赵伯涛、刘继华、武亚明、程远欣、王银良、王艳改、黄晓德、吴耀军、苏海、李漪。 GH/T 12912020 1 花椒及花椒加工产品 花椒酰胺总含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了花椒及花椒加工产品中花椒酰胺类物质总含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于花椒及花椒加工产品的分析与检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/ T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/ T 12729.2 香辛料和调味品取样方法 GB/ T 12729.3 香辛料和调味品分析用粉末试样的制备 3 术语与定义 3.1 花椒加工产品花椒加工产品 prickly ash products 花椒经粉碎、萃取等工艺生产的产品。主要包括花椒粉、花椒油树脂、花椒油等以花椒为原料加工的产品。 3.2 花椒酰胺花椒酰胺 fagaramide 花椒呈麻味的主要成分，含有羟基-山椒素、羟基-山椒素、羟基-山椒素和羟基-山椒素等多种酰胺类成分。 4 原理 花椒酰胺类物质主要包含羟基- -山椒素、 羟基- -山椒素、 羟基- -山椒素和羟基- -山椒素等酰胺类组分，试样中的花椒酰胺类成分经甲醇提取后，通过C18柱分离，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在270 nm处测定，以羟基- -山椒素作为对照品，通过峰面积外标法对样品中的花椒酰胺总量进行测定。 5 试剂材料与仪器设备 5.1 试剂材料 5.1.1 乙腈：色谱纯。 5.1.2 甲醇：色谱纯。 5.1.3 冰醋酸：分析纯。 GH/T 12912020 2 5.1.4 羟基-山椒素，CAS 号: 83883-10-7，纯度95%。 5.1.5 微孔滤膜，孔径 0.22 m 有机相滤膜。 5.2 仪器设备 5.2.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器。 5.2.2 分析天平，感量 0.000 1 g,0.000 01 g。 5.2.3 水浴锅。 5.2.4 超声清洗器，超声功率 240 W。 5.2.5 高速粉碎机，转速10 000 rpm。 6 样液制备 6.1 标准溶液制备 取羟基-山椒素对照品10 mg（精确至0.1 mg），置于烧杯中，用色谱级甲醇溶解，定容至10 mL；用色谱级甲醇稀释制成浓度为5 g/mL、10 g/mL、20 g/mL、30 g/mL、40 g/mL、50 g/mL的对照品工作溶液，待测。 6.2 样品液制备 6.2.1 干花椒 取混合均匀的花椒粒100 g，用高速粉碎机粉碎后过20目筛，混匀。称取1 g（精确至0.0001 g）粉碎混匀后的样品置于具塞烧瓶中，加甲醇50 mL，超声萃取0.5 h，冷却至室温，转移至100 mL容瓶，甲醇定容，移取上清液10 mL于50 mL容量瓶定容，经0.22 m滤膜过滤，待测。 6.2.2 鲜花椒 取混合均匀的鲜花椒粒200 g。经组织捣碎机捣碎后，称取5 g(精确至0.000 1 g）粉碎混匀后的样品置于具塞烧瓶中，加甲醇50 mL，超声萃取0.5 h，冷却至室温，转移至100 mL容瓶，甲醇定容，移取上清液10 mL于50 mL容量瓶定容，经0.22 m滤膜，待测。 6.2.3 花椒粉 称取1 g(精确至0.000 1 g）粉碎混匀后的样品置于具塞烧瓶中，加甲醇50 mL，超声萃取0.5 h，冷却至室温，转移至100 mL容瓶，甲醇定容，经0.22 m滤膜过滤，待测。 6.2.4 花椒油树脂 取膏状或固体油树脂样品置于50 水浴锅中溶解，摇匀。精密称取0.2 g（精确至0.0001 g）样品置于烧杯中，加甲醇50 mL，超声萃取0.5 h，冷却至室温，转移至100 mL容瓶，甲醇定容，经0.22 m滤膜过滤，待测。 6.2.5 花椒油 花椒油摇匀，精密称取0.2 g（精确至0.0001 g）置于具塞烧瓶中，加甲醇50 mL，超声萃取0.5 h，冷却至室温，转移至100 mL容瓶，甲醇定容，0.22 m滤膜过滤，待测。 7 分析计算 GH/T 12912020 3 7.1 色谱条件 色谱柱： C18反相柱，4.6 150 mm，5.0 m，或性能相当者。 流动相：乙腈1%冰醋酸水溶液（40:60，V/V）。 流速：1.5 mL/min。 柱温：40 。 进样量：20 L。 检测波长：270 nm。 7.2 标准曲线的绘制 按测定条件（7.1）对系列对照品工作溶液（6.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应工作溶液的以浓度为横坐标，绘制标准曲线。 7.3 样品测定 按测定条件（7.1）对样品液（6.2）进行测定，样品液中的花椒酰胺根据保留时间和光谱定性。由样品液的花椒酰胺类物质的特征峰总面积，从标准曲线上查出相应的羟基-山椒素浓度，样品液的响应值应在仪器测定的线性范围之内，超出线性范围的供试样品液需用甲醇稀释后测定。 7.4 结果计算 以 4 种花椒麻酰胺类物质面积总和作为供试品中花椒麻酰胺面积。 供试品中花椒麻酰胺总含量以羟基-山椒素计，按公式（1）计算。 3-10mCVKX . (1) 式中： X供试品中花椒酰胺总含量，单位为毫克每克（mg/g） ； C供试品溶液中花椒麻素的峰面积对应的质量浓度，单位为微克每毫升（g/mL） ； V供试样品工作液定容体积，单位为毫升（mL） ； K供试样品工作液稀释倍数； m供试品的称样量，单位为克（g） ； 取重复性条件下获得的绝对差值不大于算术平均值的 5 %的两次测定值的算术平均值作为测定结果，结果保留小数点后 2 位。 GH/T 12912020 4 A A 附 录 A （资料性附录） 典型高效液相色谱图 A.1 羟基-山椒素典型高效液相色谱图见图A.1。 注：1 羟基- -山椒素 图A.1 羟基-山椒素典型高效液相色谱图 A.2 样品液典型高效液相色谱图见图A.2。 注：1 羟基-山椒素 2 羟基-山椒素 3 羟基-山椒素 4 羟基-山椒素 图A.2 样品液典型高效液相色谱图 _