生物药剂学与药代动力学实验讲义.doc

广西中医药大学《药代动力学实验讲义》
实验一 对乙酰氨基酚片生物利用度和药物动力学参数的测定（尿药速度法）
【实验目的】
掌握用尿药浓度法测定药物制剂生物利用度（BA）、、等动力学参数的原理与方法，并加深对这些参数的理解。同时了解尿药浓度法的特点、数据处理方法及实验设计。
【实验原理】
单室模型口服尿药浓度速度法基本公式为
·····················（1）
尿药总排出量可以从下式求得
··························（2）
应用尿药浓度法直接测定生物利用度基本公式为
相对生物利用度＝···················（3）
【实验材料】
1．仪器 万分之一电子天平，紫外分光光度计，离心机。10ml具塞刻度试管（160支），1ml刻度吸管（24支），5ml刻度吸管（12支），100ml容量瓶（7个），250ml容量瓶（3个），洗耳球（24个）。250ml量杯（4个），1000ml量杯（8个）。
2．试剂及配制
0.4％氢氧化钠溶液（需250ml）
4N盐酸溶液 (需1000ml)：取33.2ml浓盐酸，加蒸馏水溶解，稀释至100ml。
显色剂(需1500ml)：取0.2 N NaOH溶液80ml，加1％酚溶液10ml。振摇混匀后，加入碳酸钠－溴溶液100ml，混匀即得。
0.2N NaOH溶液：取NaOH 8g，加蒸馏水溶解，并稀释到1000ml。
1％酚溶液：吸取1ml液化酚（含量在99％以上），溶解于蒸馏水中，稀释至100ml。当天鲜配。
3N 碳酸钠－溴溶液：取10.6g无水碳酸钠，溶解于蒸馏水中，加15ml饱和溴水溶液混合均匀，并稀释至100ml。当天鲜配。
饱和溴水溶液：取适量液态溴，加入蒸馏水中，振摇溶解，放置至少24h后再使用。
3．药品 对乙酰氨基酚片（0.5g/片，100片/瓶，1瓶）
【实验内容与方法】
1. 对乙酰氨基酚片含量测定
取本品10片，精密称定，研细，精密称取本品适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg），置250ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml与水50ml，振摇15分钟，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照紫外－可见分光光度法（附录Ⅳ A，2005年药典二部），在257nm波长处测定吸光度，按C8H9NO2的吸收系数（E1cm1%）为715计算，即得。（计算公式A=ELC）
★数据记录：（测定波长257nm）
；样＝ ； ；样（g/g）＝
2.尿药标准曲线的绘制
（1）对乙酰氨基酚贮备液的配制
取本品10片，研细，105℃干燥30min，精密称取本品细粉适量（相当于含对乙酰氨基酚1g），用蒸馏水溶解于250ml容量瓶中，冷却至室温后，稀释至刻度，置冰箱保存备用。
★数据记录：样＝ ；＝ ；（μg/ml）＝
（2）标准溶液的配制
分别精密吸取上述浓贮备液2.5ml、5.0ml、7.5ml、10.0ml、15.0ml、20.0ml，加蒸馏水至100ml。制得标准溶液浓度分别为：
★数据记录：
μg/ml， μg/ml， μg/ml， μg/ml， μg/ml， μg/ml
（3）标准曲线的绘制
表1 标准曲线的绘制
操 作
0
2.5ml
5.0ml
7.5ml
10.0ml
15.0ml
20.0ml
标准溶液浓度（μg/ml）
0

标准液（ml）
1
1
（其它浓度操作与加入量2.5ml相同）
无药尿液（ml）
1
1
4N盐酸（ml）
4
4
水溶液煮沸时间（h）
1
1
加蒸馏水至（ml）
10
10
吸取上述液（ml）
1
1
加显色剂至（ml）
10
10
放置时间（min）
40
40
平均吸光度A
（620nm）

3.尿药浓度测定
（1）受试者：8名自愿者，男女不限，身体健康。
（2）服药、集尿：服药前48h内不应服用含有对氨基苯酚的药物。服药者需禁食早餐。早7:30喝水150ml，7:55采集尿样作空白尿及作标准曲线之用。并尽可能将尿排空。早8:00用150ml 37℃左右的温开水吞服药片1片（0.5g/片）或者溶液剂（片剂溶解于50ml温开水，再喝100ml温开水），按表2时间收集尿液。收集时间不得改变，应收集完全，不得损失，并精确计算体积。保持尿样不被污染，每次计量后，记下毫升数。留尿样约10ml置冰箱中供测定用（试管应先编号，避免搞错！）。收尿容器必须用水冲洗，沥干备用。
表2 尿液取样时间表
编 号
采样时间
尿液体积（ml）
0
空白对照7:55（0h）

1
9:00（1h）

2
10:00（2h）

3
12:00（4h）

4
14:00（6h）

5
16:00（8h）

6
18:00（10h）

7
20:00（12h）

8
第二天早上8:00（24h）

★注：每次取样后，根据需要喝水（日期： 受试者： 剂型： ）
（3）尿药浓度测定

表3 尿液样品操作表
操 作
采样时间（h）
0
1
2
4
6
8
10
12
24
含药尿液（ml）
0
1
（其它浓度操作与1h相同）
蒸馏水（ml）
1
1
空白尿液（ml）
1
0
4N盐酸（ml）
4
4
水溶液煮沸时间（h）
1
1
加蒸馏水至（ml）
10
10
吸取上述液（ml）
1
1
加显色剂至（ml）
10
10
放置时间（min）
40
40
测定吸收度A
（620nm）
1

2

3

★样品编号：
【结果处理】
1、标准曲线绘制
表4 标准曲线的绘制
标准溶液浓度（μg/ml）

平均吸光度A

回归方程

2、根据回归方程计算出各样品的尿药浓度，与有关数据填入表5。
3、以对作图，对曲线的直线部分进行回归，求出消除速度常数，生物半衰期及排药总量与尿药排出率（回收率），列入表6。并绘制累积尿药量与时间的关系曲线。
表5 尿药浓度数据
编号
累积采尿时间（h）
中点时间tc＝

（h）
尿量
（ml）
尿药浓度
（mg/ml）

（mg）

累积排药量（mg）
0
0

1
1

2
2

3
4

4
6

5
8

6
10

7
12

8
24

（受试者： 剂型： ）
4、将大组内各小组的数据进行统计列。按3同样方法求出平均，，及排泄率（％），同时求出相对生物利用度。
表6 尿药法求参数
剂 型

（h－1）
（mg）

片剂

溶液剂

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