GC—MS测定松花粉油成分以及含量.docx

GC—MS测定松花粉油成分以及含量分析
实验原理：

气质联用测定挥发性物质的成分及其含量是利用气相色谱的分离原理将混合物质分离成单一物质，物质依次进入质谱进行电离进行质谱分析。

1.气相色谱

气相色谱以气体为流动相，按其固定相可以分为气液分配色谱和气固吸附色谱两类。
气相色谱一般分为气路系统、进样系统、分离系统、温控系统、检测和记录系统。

气相色谱结构示意图

1.2气相色谱常用参数

1.2.1色谱流出曲线
1．2.1.1 基线：操作条件稳定后，没有试样通过时检测器所反映的信号-时间曲线称为基线（它反映检测系统噪声随时间变化的情况，稳定的基线应是一条水平直线）
1.2. 1.2死时间 t0（dead time）：指不被固定相吸附或溶解的组分（如空气、甲烷等）从进样开始到色谱峰顶所对应的时间。
1.2.1.3. 死体积 V0（dead volume ）： 由进样器至检测器的流路中，未被固定相占有的空隙体积称为死体积。                          
1.2.2保留值：定性参数，是在色谱分离过程中，试样中各组分在色谱柱内滞留行为的一个指标。
1.2.2.1保留时间 tR （retention time）：从进样到柱后出现待测组分浓度最大值时（色谱峰顶点）所需要的时间，称为该组分的保留时间。如图中tR(1)、 tR(2) 所示，（是待测组分流经色谱柱时，在两相中滞留的时间和）保留时间与固定相和流动相的性质、固定相的量、柱温、流速和柱体积有关，可用时间单位（min）表示。
（2）调整保留时间 tR’（adjusted retention time）：扣除死时间后的组分保留时间，如图中的tR(1)’、 tR(2)’所示。tR’ 表示某组分因溶解或吸附于固定相后，比非滞留组分在柱中多停留的时间：
 tR’= tR – t0                                 
（3）保留体积 VR （retention volume）：从进样到柱后出现待测组分浓度最大值时所通过的载气体积。当色谱柱载气流速为F0(ml/min)时，它与保留时间的关系为：
VR = tR F0                                    
（4）调整保留体积 VR’（adjusted retention volume）：是指扣除死体积后的保留体积，在一定的实验条件下VR、VR’与载气流速无关（tR·F0 及 tR’·F0为一常数）
（5）相对保留值 r21（relative retention value）：指组分 2 和组分 1 的调整保留值之比。相对保留值的特点是只与温度和固定相的性质有关，与色谱柱及其它色谱操作条件无关。反映了色谱柱对待测两组分1和 2 的选择性，是气相色谱法中最常使用的定性参数。
3．峰高（h）：色谱峰顶与基线之间的垂直距离
4. 色谱的区域宽度（peak width）通常用三种方法来表示：
（1）标准偏差s （standar deviation）： 为正态分布曲线上拐点间距离之半。对于正常峰，s为0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。（s 的大小表示组分被带出色谱柱的分散程度，s 越大，组分流出越分散；反之亦反。s 的大小与柱效有关，s 小，柱效高）
（2）半(高)峰宽 Wh/2（peak width at half-height）：峰高一半处的色谱峰宽度。半峰宽与标准偏差的关系为：

（3）峰宽或称Wb：通过色谱峰两侧的拐点作切线，切线与基线交点间的距离为峰宽，即图中GH。峰宽与标准偏差的关系为：  Wb = 4s = 1.699 Wh/2
色谱参数示意图
下图为色谱流出曲线

实验材料：
西昌松花粉超临界萃取的固体油
实验操作
用乙醚将固体油溶解，0.45um的滤膜过滤，进样。
质谱联用仪步骤：
打开载气 打开质谱仪 打开气相色谱 开电脑进入程序（GC—MS操作系统） 设置参数 运行序列

实验结果分析
1.均一性分析：

第一次
第二次
第三次
分析出物质/个
26
24
26
共同物质
第一次
26
17
20
第二次
17
24
16
第三次
20
16
26
从上图中可以看出三次有些分析出的物质不尽相同，说明三次溶液并不均匀。
2.成分分析（主要物质成分含量）
2.1第一次
名称
结构式
含量
邻苯二甲酸异丙醇酯

1.312%
邻苯二甲酸丁酯

5.051%
十六酸乙酯

2.457%
9,18烯酸乙酯

2.244%
正二十烷

2.191%
1-Phenanthrenecarboxylic acid, 1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahydro-1,4a-dimethyl-7-(1-methylethyl)-, (1S,4aR)-

1.349%

15-Hydroxydehydroabietic acid，methyl ester

4.881%
Ethanol，2—（tetradecyloxy）—

5.795%

Tetracosanal

1.709%
Methoxyacetic acid

10.946%
Heptadecanoic acid，15—methyl—，ethyl ester

第二次
名称
结构式
含量
邻苯二甲酸异丙醇酯

1.609%
邻苯二甲酸丁酯

5.026%
十六酸乙酯

1.986%
9,12，正18双烯酸乙酯

2.889%
正二十烷

1. 2%
1-Phenanthrenecarboxylic acid, 1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahydro-1,4a-dimethyl-7-(1-methylethyl)-, (1S,4aR)-

7.226%

15-Hydroxydehydroabietic acid，methyl ester

4.881%
Benzaldehyde，4—（diphenlamino）—

13.27%
Tetracosanal

6.502%
Ethanol，2—（tetradecyloxy）—

8.426%
Oxirane ，hexadecyl—

4.800%
第三次
名称
结构式
含量
邻苯二甲酸异丙醇酯

1.0261%
邻苯二甲酸丁酯

3.376%
十六酸乙酯

0.848%
10, 18烯酸甲酯

1.803%
正二十烷

1.546%
1-Phenanthrenecarboxylic acid, 1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahydro-1,4a-dimethyl-7-(1-methylethyl)-, (1S,4aR)-

2.165%

Androstan—17—one，3—（tetrahydropyran——2——yl）oxy-

2.244%
1,19—Eicosadiene

3.799%

Tetracosanal

1.709%

上表中未能模拟出主要物质的结构式（含量大于5%），同时模拟比对的化合物少于测出的化合物。但是相似性不高，有的相似度SI<50，即可信性不高。但是仍然对于化合物分析起到一定的导向作用。
上表表现出松花粉油的存在饱和脂肪烷烃主要为正二十烷，就分析出的质谱来说，酯类化合物占绝大部分。但是分子量都比较大，挥发性较弱，所以松花粉油呈现出固体，而并不是液体。

RP-HPLC测定枇杷花中熊果酸和齐墩果酸含量
实验原理
HPLC是高压液相色谱，利用不同物质在色谱柱中迁移率的不同使混合物分开，通过标品定位，检测器检测计算出所测定物质的含量。
HPLC的的按分离原理有液固吸附色谱，液液分配色谱、离子交换色谱和离子对色谱法和分子阻排色谱。
基本概念和理论与于气相色谱相似。
HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录以及处理装置组成，其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部位。
实验材料
枇杷花
实验仪器
高效液相色谱仪（安捷伦）
实验操作
供试品溶液制备
样品经干燥粉碎，过40目筛后保存。称取0.5g，置于10ml容量瓶中，加入9ml乙醇于超声波清洗仪中30C，300W、40KHz超声30min。定容至10ml，摇匀，微孔过滤，滤液备用。
色谱条件
色谱柱：Alltech Apollo C18
流动相：甲醇—醋酸水溶液（pH3.4）
流速：0.5mL.min
检测波长：210nm
柱温：20℃
进样量：10uL

标准品配置
分别配置浓度为120ug/mL的熊果酸和齐墩果酸标准液。
HPLC仪器操作
进样标准熊果酸和齐墩果酸溶液，定位供试品中的熊果酸和齐墩果酸位置。
进样供试品，对比标准曲线峰面积在相应位置计算出熊果酸和齐墩果酸含量。
实验结果（见附表）
实验结果分析
1. 熊果酸的保留时间7.49min，齐墩果酸的保留时间为11.037min，保留时间较长。
2. 熊果酸出现较多的杂峰，说明熊果酸的标品有一定的问题。
3. 熊果酸含量：依照线性关系Y=0.1717X-0.0816
将熊果酸的相对峰面积带入线性关系的w=2.59692
4. 齐墩果酸含量：依照线性关系Y=0.1588X+0.0055
同理w=1.02579
5. 由于熊果酸和齐墩果酸标品是分别配置，在选择流动相时应该配置混合溶液。