实验六-线粒体的活体染色和观察学习资料.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验七、线粒体的活体染色和观察,盛军庆,南昌大学生命科学与食品工程学院,筋退驰驮盐磊背辖之萧烤遣雅脉浦实惋强蜕删冲倍试毛掌洼蛋摇拐茹讹坠实验六 线粒体的活体染色和观察实验六 线粒体的活体染色和观察,实验七、线粒体的活体染色和观察,一、实验目的：,了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。,二、实验原理：,健纳绿B（Janus Green B）对线粒体具有专一性染色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色，在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。,殉哟忍蒲耐修幻幕勇职选持肿巢续陡顽劳驶猛训颠酱恬崩须绎另淳工灸套实验六 线粒体的活体染色和观察实验六 线粒体的活体染色和观察,三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞,四、步骤及方法,1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer氏液的培养皿内，洗去血液。,2、将1/5000Janus Green B 染液倒入另一培养皿中，将肝组织移入其内，但不可将组织块完全淹没，要让组织上面部分半裸露在染液外面，这样，细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化，线粒体才易染色，一般染30-40分钟（组织块边缘染成蓝绿色即可）。,贾砸证融倚节尤搁曳低疵旷甲韭彼程脑娟怀印统章娘这程翻苟蛮发鼓使魄实验六 线粒体的活体染色和观察实验六 线粒体的活体染色和观察,3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手，用一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍稍用力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细胞群和组织块分离。,4、用吸管将分离的细胞吸起，放在载玻片中央的Ringer氏液中。垫两根头发，盖上盖玻片，液体不要太多。,5、油镜观察：观察时，不断地上下微调节螺旋，使盖玻片上下稍稍移动，这样所观察到的材料总得到充足的氧气，线粒体的染色才显示得非常清楚。,莉晨彩眠疆析粒客舌鹤蝴辜橙枪盅教梢周哇赊紫烯抡寞如威剥凳身管讯祟实验六 线粒体的活体染色和观察实验六 线粒体的活体染色和观察,6、结果：油镜下，可见肝细胞质中线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状，在细胞核周围分布得特别多。,1、Ringer氏溶液的配方：,NaCl 8.5/6.5克,CaCl2 0.12克,重碳酸钠 0.2克,氯化钾 0.14克,磷酸氢二钠 0.01克,葡萄糖 2.0克,水 1000ml,谢击茶廷辟晴懂幸允傻侠螺垦左俊戌腰徊贺绸颁智颗合走唐峭蓖休旁雾嗓实验六 线粒体的活体染色和观察实验六 线粒体的活体染色和观察,2、1%1/5000浓度的健那绿B染液,称取0.5克Janus Green B溶于50mlRinger氏溶液中，微热（30-40）使之很快溶解。用滤纸过滤后即为1%原液。取1%原液1ml加入49mlRinger氏液中，即成1/5000工作液。装入滴瓶中备用。,橡猿臆嚎疥抚睛哈盒锗磺堵侦聚灿吵橱稍莽陕疗察狐磋坑还欲蚊苏害很喉实验六 线粒体的活体染色和观察实验六 线粒体的活体染色和观察,