米槁根部内生促生真菌筛选及其促生特性研究.pdf

第5 1卷 第9期2 0 2 3年9月西北农林科技大学学报(自然科学版)J o u r n a l o f N o r t h w e s t A&F U n i v e r s i t y(N a t.S c i.E d.)V o l.5 1 N o.9S e p.2 0 2 3网络出版时间:2 0 2 3-0 3-0 8 0 9:4 2 D O I:1 0.1 3 2 0 7/j.c n k i.j n w a f u.2 0 2 3.0 9.0 0 9网络出版地址:h t t p s:/k n s.c n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/6 1.1 3 9 0.S.2 0 2 3 0 3 0 6.1 8 0 0.0 0 9.h t m l米槁根部内生促生真菌筛选及其促生特性研究 收稿日期 2 0 2 2-0 5-2 7 基金项目 贵州省科技计划项目(黔科合支撑2 0 1 92 7 7 4);贵州省基础研究计划项目(黔科合基础-Z K2 0 2 2 基础)作者简介 彭 靓(1 9 9 8-),女,四川南充人,在读硕士,主要从事生态学研究。E-m a i l:F a e r i e 1 0 1 81 6 3.c o m 通信作者 廖小锋(1 9 8 7-),男,重庆人,高级工程师,硕士,主要从事生态学研究。E-m a i l:l x f n s d 1 6 3.c o m彭 靓1,陈 梦2,廖小锋3,刘济明1,陈敬忠1,童炳丽4(1 贵州大学 林学院,贵州 贵阳 5 5 0 0 2 5;2 贵州省第二测绘院,贵州 贵阳 5 5 0 0 2 5;3 贵州科学院 贵州省山地资源研究所,贵州 贵阳 5 5 0 0 2 5;4 贵州师范大学 生命科学学院,贵州 贵阳 5 5 0 0 2 5)摘 要 【目的】筛选米槁(C i n n a m o m u m m i g a o)根部内生促生真菌菌株,探究其对米槁幼苗生长生理的影响。【方法】从贵州省黔南布依族苗族自治州的祥乐村、坝碰村和平艾村采集米槁鲜根,分离纯化得到内生真菌,利用透明圈法对所得菌株进行促生作用研究,将所得菌株接种至蒙金娜无机磷固体培养基、解钾固体培养基及K i n g液体培养基进行促生能力测定,筛选促生能力强的菌株;再将筛选所得菌株分别回接至米槁幼苗,以接种等量空白培养基为对照,培养1 8 0 d后测定幼苗的生长生理指标。【结果】从米槁根部分离纯化得到4 1属1 7 7株内生真菌,利用透明圈法筛选得到1 6株具透明圈的真菌;促生能力测定结果表明,球毛壳菌(C h a e t o m i u m g l o b o s u m)、哈茨木霉(T r i-c h o d e r m a h a r z i a n u m)、深绿木霉(T r i c h o d e r m a a t r o v i r i d e)及深色有隔内生真菌(A c r o c a l y mm a v a g u m)4株菌株具有较高促生潜力。接种试验结果表明,球毛壳菌能显著促进米槁幼苗对钾的吸收,哈茨木霉能显著促进过氧化氢酶(C A T)活性及幼苗对磷的吸收,深绿木霉能显著促进米槁幼苗苗高及地下部分的生长,深色有隔内生真菌能显著促进幼苗S O D活性。4种促生菌对米槁幼苗的促生作用不同,其中促生菌的产I AA能力与米槁幼苗的生长显著相关,溶磷、解钾能力与P P O活性呈显著负相关(P0.0 5)。【结论】球毛壳菌、哈茨木霉、深绿木霉及深色有隔内生真菌对米槁幼苗生长均有促进作用,但不同菌种对米槁幼苗生长发育的作用机理不同。关键词 米槁;内生真菌;促生特性 中图分类号 S 5 6 7.1+9;S 1 5 4.3 文献标志码 A 文章编号 1 6 7 1-9 3 8 7(2 0 2 3)0 9-0 0 8 4-0 8S c r e e n i n g a n d c h a r a c t e r i s t i c s o f e n d o p h y t i c g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g i i n r o o t s o f C i n n a m o m u m m i g a oP E N G L i a n g1,CHE N M e n g2,L I AO X i a o f e n g3,L I U J i m i n g1,CHE N J i n g z h o n g1,TON G B i n g l i4(1 C o l l e g e o f F o r e s t r y,G u i z h o u U n i v e r s i t y,G u i y a n g,G u i z h o u 5 5 0 0 2 5,C h i n a;2 G u i z h o u S e c o n d I n s t i t u t e s o f S u r v e y i n g a n d M a p p i n g,G u i y a n g,G u i z h o u 5 5 0 0 2 5,C h i n a;3 I n s t i t u t e o f M o u n t a i n R e s o u r c e s,G u i z h o u A c a d e m y o f S c i e n c e s,G u i y a n g,G u i z h o u 5 5 0 0 2 5,C h i n a;4 C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e s,G u i z h o u N o r m a l U n i v e r s i t y,G u i y a n g,G u i z h o u 5 5 0 0 2 5,C h i n a)A b s t r a c t:【O b j e c t i v e】E n d o p h y t i c g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g u s s t r a i n s i n r o o t s o f C i n n a m o m u m m i g a o w e r e s c r e e n e d a n d t h e i r e f f e c t s o n s e e d l i n g g r o w t h w e r e i n v e s t i g a t e d.【M e t h o d】F r e s h r o o t s o f C.m a g a o w e r e c o l l e c t e d f r o m X i a n g l e v i l l a g e,B a p e n g v i l l a g e a n d P i n ga i v i l l a g e i n Q i a n n a n B u y i a n d M i a o A u t o n o-m o u s P r e f e c t u r e o f G u i z h o u P r o v i n c e,a n d e n d o p h y t i c f u n g i w e r e i s o l a t e d a n d p u r i f i e d.T h e g r o w t h p r o m o-t i n g e f f e c t o f s e l e c t e d s t r a i n s w a s s t u d i e d b y t r a n s p a r e n t c i r c l e m e t h o d.T h e o b t a i n e d s t r a i n s w e r e i n o c u l a-t e d i n t o t h e s o l i d m e d i u m o f i n o r g a n i c p h o s p h o r u s,s o l i d m e d i u m o f p o t a s s i u m h y d r o l y s i s a n d K i n g l i q u i d m e d i u m f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f g r o w t h p r o m o t i o n a b i l i t y.T h e s t r a i n s w i t h s t r o n g g r o w t h p r o m o t i o n a b i-l i t y w e r e s c r e e n e d a n d g r a f t e d b a c k t o C.m i g a o s e e d l i n g s,u s i n g i n o c u l a t i o n o f b l a n k m e d i u m a s t h e c o n-t r o l.A f t e r c u l t u r i n g f o r 1 8 0 d a y s,t h e g r o w t h p h y s i o l o g i c a l i n d e x e s o f C.m i g a o s e e d l i n g s w e r e m e a s u r e d.【R e s u l t】A t o t a l o f 1 7 7 e n d o p h y t i c f u n g i b e l o n g i n g t o 4 1 g e n e r a w e r e i s o l a t e d a n d p u r i f i e d f r o m C.m i g a o r o o t s,a n d 1 6 f u n g i w i t h t r a n s p a r e n t r i n g s w e r e s c r e e n e d t o s t u d y t h e g r o w t h p r o m o t i n g p o t e n t i a l s.C h a e t o-m i u m g l o b o s u m,T r i c h o d e r m a h a r z i a n u m,T r i c h o d e r m a a t r o v i r i d e a n d A c r o c a l y mm a v a g u m w e r e f o u n d w i t h s t r o n g g r o w t h p r o m o t i n g a b i l i t y.C.g l o b o s u m p r o m o t e d p o t a s s i u m a b s o r p t i o n s e e d l i n g s a n d T.h a r-z i a n u m s i g n i f i c a n t l y p r o m o t e d t h e a c t i v i t y o f C AT e n z y m e a n d p h o s p h o r u s a b s o r p t i o n o f s e e d l i n g s.T.a t-r o v i r i d e p r o m o t e d t h e g r o w t h o f s e e d l i n g h e i g h t s a n d u n d e r g r o u n d p a r t s a n d t h e d a r k s e p t u m e n d o p h y t i c f u n g u s A.v a g u m p r o m o t e d a c t i v i t i e s o f S O D e n z y m e i n s e e d l i n g s.T h e f o u r g r o w t h-p r o m o t i n g s t r a i n s h a d d i f f e r e n t e f f e c t s o n s e e d l i n g s.T h e I AA p r o d u c t i o n c a p a c i t y o f t h e g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g i w a s s i g n i f i c a n t-l y c o r r e l a t e d w i t h s e e d l i n g g r o w t h a n d t h e p h o s p h o-s o l u b i l i z i n g a n d p o t a s s i u m r e l e a s i n g c a p a c i t y w a s s i g-n i f i c a n t l y n e g a t i v e c o r r e l a t e d w i t h P P O e n z y m e a c t i v i t y o f s e e d l i n g s(P0.0 5).【C o n c l u s i o n】T h e o b-t a i n e d f o u r g r o w t h p r o m o t i n g s t r a i n s o f C.g l o b o s u m,T.a t r o v i r i d e,T.h a r z i a n u m a n d A.v a g u m a l l p r o m o t e d t h e g r o w t h o f C.m i g a o s e e d l i n g s w i t h d i f f e r e n t i m p a c t l e v e l s.K e y w o r d s:C i n n a m o m u m m i g a o;e n d o p h y t i c f u n g i;g r o w t h-p r o m o t i n g p r o p e r t i e s 内生真菌作为一类在宿主体内无害甚至能促进植物生长的类群,近年来得到广泛研究1-2。几乎所有植物都有内生真菌,其中部分菌株具有促进植物生长、抵抗逆境等作用3。在植物生长发育过程中,不同内生真菌对植物的促生作用不尽相同。研究发现,部分具有溶磷、解钾作用的内生真菌,对幼苗生长有着促进作用4,部分内生真菌能够产生吲哚-3-乙酸(I AA)等生长激素,促进种子萌发、幼苗伸长、分蘖、生物量积累、根生长等,从而对宿主植物产生有益作用或者通过影响植物代谢、生物酶活性以及植株对氮磷钾等营养物质的吸收影响植株的生长发育5-7。因此对内生促生真菌的探究成为目前持续研究的重点。作为贵州省道地性药材,米槁(C i n n a m o m u m m i g a o)已被 中国生物多样性红色名录高等植物卷 列为近 危 种(NT)8,陈 敬 忠 等9-1 0和 童 炳 丽等1 1研究发现,根际真菌影响米槁果实的化学成分,而根部内生促生真菌对米槁幼苗的影响尚未可知。为此,本研究对米槁根部的内生真菌进行分离纯化,再对筛选所得菌株进行溶磷、解钾及产I AA能力研究,并将所得促生菌回接米槁幼苗以研究其促生特性,以期为米槁内生真菌资源的开发利用及菌剂的研究提供理论基础。1 材料与方法1.1 材料来源1.1.1 菌株来源 样品采集于贵州省黔南布依族苗族自治州望谟县祥乐村、坝碰村及罗甸县罗悃镇平艾村,每个地点随机选取5株健康且胸径大于2 5 c m的野生米槁植株,沿树基部东南西北4个方向挖取02 0 c m剖面,采集健康须根,采用透明圈法1 2对分离纯化得到的内生真菌进行溶磷、解钾活性测定,将已扩繁的米槁内生真菌分别接种于蒙金娜无机磷固体培养基和解钾固体培养基5上,2 8 暗培养1周后,观察真菌菌落周围是否出现透明圈,若能观察到透明圈则表明此种真菌有溶解无机磷或解离K+活性。保留具有透明圈的菌株进行后续试验。1.1.2 种子与幼苗 米槁试验所需的培育幼苗种子均采集自同一株植物。参考王灯1 3的方法对种子进行消毒,在无菌环境下生长3个月后挑选长势一致的健康植株进行盆栽试验。1.2 溶磷、解钾能力检测将1.1.1节中初步筛选出的溶磷、解钾内生真菌分别接入解钾液体培养基和蒙金娜无机磷液体培养基,放入恒温振荡培养箱,2 8、1 2 0 r/m i n黑暗培养71 0 d,抽滤后舍去菌丝体,收集滤液于1 0 m L灭菌离心管中,1 0 0 0 0 r/m i n离心1 0 m i n,取上清液,参照罗阳兰1 4的方法对其分别进行有效磷和有效钾定量检测。1.3 产I AA活性测定将扩繁得到的菌株使用直径为5 mm的打孔器沿菌落边缘打取35块菌饼,接种于K i n g培养基4中(以不接菌作为空白对照),置于恒温振荡培养箱中于2 8、1 2 0 r/m i n黑暗培养35 d,抽滤后58第9期彭 靓,等:米槁根部内生促生真菌筛选及其促生特性研究舍去菌丝体,收集滤液于5 m L灭菌离心管中,4、1 0 0 0 0 r/m i n离心1 5 m i n即得发酵液。将发酵液与S a l k o w s k i比色液按12的体积比混合,避光静置3 0 m i n后观察混合液颜色4。混合液为粉色或紫红色表明具有产I AA活性,混合液为透明无色则不具有产I AA活性。利用紫外分光光度计测定5 3 0 n m波长处吸光值,以5 0 m g/L标准I AA溶液作为比对液进行定量测定4,每个样品设置3个重复。1.4 菌株促生作用测定试验设置接菌处理组与对照组(C K),接菌处理组接种溶磷、解钾及产I AA能力强的内生真菌菌液,对照组加入等量灭菌P D A培养基,每个菌种接种长势一致的健康幼苗1 5盆作为重复,每盆1株植株。盆栽所用基质为林下土/营养土/珍珠岩按体积比421混合而成,适量浇水拌匀后装入上口径2 1 c m,高1 8.6 c m,底径1 5 c m 花盆,每盆2 k g 基质,试验所用盆及基质均做灭菌处理。菌液回接幼苗时采用罗阳兰1 4的方法,将筛选出的菌种在P D A上扩繁后,打菌饼接于P D B培养基振荡培养7 d,将菌丝转入豆浆机搅碎即得菌液,距幼苗1 c m周围轻挖3个等距离洞穴,将菌液倒入洞穴中覆上基质即可。接菌量采用管睿婷1 5的液体菌剂接种方法,得到最适接种量为4 5 m L,整个试验过程分3次接种,即每种菌每次接种1 5 m L,每隔2 0 d接种一次,对照组每次浇灌等量空白P D A培养基。接种菌液前测定每盆苗的苗高,第1次接种1 8 0 d后,参考王天1 6的方法,测定植物的苗高、地径、地上生物量、地下生物量、根长、根表面积、根体积、根尖数,全磷、全钾、可溶性糖、可溶蛋白含量及超氧化物歧化酶(S O D)、过氧化氢酶(C AT)、过氧化物酶(P O D)和多酚氧化酶(P P O)活性等。利用品红溶液对菌丝与孢子进行染色,观察是否侵染成功。1.5 数据处理与分析采用E x c e l处理试验数据,用I BM S P S S S t a t i s-t i c s 2 2对数据进行单因素方差分析及D u n c a ns多重比较,再使用O r i g i n 2 0 1 8 6 4 b i t软件绘图。登录微 科 盟 生 科 云(h t t p s:/www.b i o i n c l o u d.t e c h/#/)进行相关性分析,绘制相关性H e a t m a p图及R D A冗余分析图。2 结果与分析2.1 米槁根部内生促 生真菌的溶 磷、解钾及产I AA能力从米槁根部共分离得到4 1属1 7 7株内生真菌,采用透明圈法对其进行溶磷、解钾活性检测,初步筛选到1 6株具有透明圈的真菌(表1)。表1 米槁根部内生促生真菌的溶磷、解钾及产I AA能力T a b l e 1 P h o s p h o r u s s o l u b i l i z a t i o n,p o t a s s i u m r e l e a s i n g a n d I AA p r o d u c t i o n c a p a c i t y o f e n d o p h y t i c f u n g i i n C i n n a m o m u m m i g a o r o o t s菌株编号F u n g a l s t r a i n菌种名称S t r a i n n a m e s溶磷活性P h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n解钾活性P o t a s s i u m r e l e a s i n g产I AA能力 I AA p r o d u c t i o nAV深色有隔内生真菌A c r o c a l y mm a v a g u m+C G球毛壳菌C h a e t o m i u m g l o b o s u m+G FG l i o c l a d i o p s i s f o r s b e r g i i+-I LI l y o n e c t r i a l i r i o d e n d r i-+-P CP e n i c i l l i u m c h r y s o g e n u m+-P DP e n i c i l l i f e r d i p a r i e t i s p o r u s-+P S 1P h o m o p s i s s p.+P S 2P h o m o p s i s s p.+P S 3P h o m o p s i ss p.+P S 4P h o m o p s i s s p.+-T A深绿木霉T r i c h o d e r m a a t r o v i r i d e+TH哈茨木霉T r i c h o d e r m a h a r z i a n u m+T KT r i c h o d e r m a k o n i n g i o p s i s-+-T LT r i c h o d e r m a l o n g i b r a c h i a t u m-+T ST r i c h o d e r m a s p i r a l e-T V绿色木霉T r i c h o d e r m a v i r e n s+注:“-”表示菌株不具溶磷、解钾及产I AA能力。“+”表示菌株具有溶磷、解钾及产I AA能力,“+”数量越多表示能力越强。N o t e:“-”i n d i c a t e s t h a t t h e s t r a i n h a s n o a c t i v i t y o f p h o s p h o r u s s o l u b i l i z a t i o n,p o t a s s i u m r e l e a s i n g a n d I AA p r o d u c t i o n.“+”i n d i c a t e s t h a t t h e s t r a i n h a s t h e a c t i v i t y o f p h o s p h o r u s s o l u b i l i z a t i o n,p o t a s s i u m r e l e a s i n g a n d I AA p r o d u c t i o n.N u m b e r o f“+”i n d i c a t e s t h e s t r e n g t h o f a c t i v i t i e s.68西北农林科技大学学报(自然科学版)第5 1卷 进一步对其溶磷、解钾及产I AA能力进行检测,结果(表1)表明,AV、C G、P S 1、P S 2、P S 3、T A、TH和T V菌株具有溶磷、解钾及产I AA能力,其中AV(深色有隔内生真菌)、C G(球毛壳菌)、T A(深绿木霉)和TH(哈茨木霉)菌株的溶磷、解钾及产I AA能力最强。2.2 4株内生促生真菌对米槁幼苗生长的促生作用用4株具有强溶磷、解钾和产I AA能力的内生真菌(C G、TH、T A、AV)接种米槁幼苗,1 8 0 d后(图1)发现,4组接种内生真菌的米槁幼苗地上生物量均显著高于C K,且接种了T A和AV的米槁幼苗地上生物量显著高于接种C G和TH处理;接种T A的米槁幼苗地下生物量显著高于C K,且地下生物量最高。内生促生菌对米槁幼苗根系生长的影响见图2。图柱上不同小写字母表示处理间差异显著(P0.0 5)。下同D i f f e r e n t l o w e r c a s e l e t t e r s i n d i c a t e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s b e t w e e n t r e a t m e n t s(P0.0 5).T h e s a m e b e l o w图1 4株内生促生菌对米槁幼苗生物量的影响F i g.1 E f f e c t s o f f o u r g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g i o n b i o m a s s o f C.m i g a o s e e d l i n g s 图2 4株内生促生菌对米槁幼苗及其根系生长的影响F i g.2 E f f e c t s o f f o u r g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g i o n s e e d l i n g s r o o t s o f C.m i g a o 从图2可以看出,接种C G、T A和AV的米槁幼苗苗高均显著高于接种TH处理;接种T A的米槁幼苗地径显著高于C K处理,其余3组接种促生菌的幼苗地径与C K差异不显著。对植物根系进行扫描,结果(图2)发现,接种促生菌的4组米槁幼苗根长势均较C K好,且接种T A的米槁幼苗根长、根表面积、根体积及根尖数均显著高于其他处理(C G处理根体积除外)。78第9期彭 靓,等:米槁根部内生促生真菌筛选及其促生特性研究2.3 4株内生促生菌对米槁幼苗生理指标的影响由图3可知,接种C G的米槁幼苗全钾含量显著高于接种T A、AV及TH的幼苗,其中接种TH的幼苗全钾含量最低,且显著低于C K处理,但其全磷含量显著高于其余4组幼苗。4种促生菌对米槁幼苗的可溶性糖含量无显著影响,但接种促生菌C G、TH及T A幼苗的可溶性蛋白含量均显著低于C K和AV处理。对米槁幼苗酶活性的研究(图4)发现,接种TH的米槁幼苗P O D活性最低,接种促生菌AV的米槁幼苗P O D活性显著提高;接种AV幼苗的S O D活性显著高于其余4组;接种TH的米槁幼苗的C AT活性显著高于接种T A与AV幼苗;而接种促生菌的4组幼苗的P P O活性均显著低于C K,其中接种TH与AV幼苗的P P O活性较低,且显著低于接种C G和T A幼苗。图3 4株内生促生菌对米槁幼苗生理指标的影响F i g.3 E f f e c t s o f f o u r g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g i o n p h y s i o l o g y i n d e x o f C.m i g a o s e e d l i n g s 图4 4株内生促生菌对米槁幼苗酶活性的影响F i g.4 E f f e c t o f f o u r g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g i o n e n z y m e a c t i v i t y o f C.m i g a o s e e d l i n g s88西北农林科技大学学报(自然科学版)第5 1卷2.4 内生促生菌溶磷、解钾及产I AA能力与米槁幼苗生长生理的相关性对促生菌的促生能力与米槁幼苗生长做相关性分析,并绘制了R D A相关性图与相关性热图(图5)。图B中显示的米槁幼苗生长生理指标表明其与促生真菌溶磷、解钾或产I AA能力显著相关,未显示的表明相关性不显著;*表示1 0%显著水平,*表示5%显著水平;*表示1%显著水平B s h o w s t h a t g r o w t h p h y s i o l o g i c a l i n d e x e s o f C.m i g a o s e e d l i n g s h a d s i g n i f i c a n t c o r r e l a t i o n w i t h p h o s p h o r u s s o l u b i l i z a t i o n,p o t a s s i u m r e l e a s i n g a n d I AA p r o d u c t i o n c a p a c i t y o f g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g i.*r e p r e s e n t s 1 0%s i g n i f i c a n c e l e v e l,*r e p r e s e n t s 5%s i g n i f i c a n c e l e v e l,a n d*r e p r e s e n t s 1%s i g n i f i c a n t l e v e l图5 内生促生菌溶磷、解钾及产I AA能力与米槁幼苗生长生理的相关性分析F i g.5 C o r r e l a t i o n b e t w e e n p h o s p h o r u s s o l u b i l i z a t i o n,p o t a s s i u m r e l e a s i n g a n d I AA p r o d u c t i o n c a p a c i t y o f g r o w t h-p r o m o t i n g f u n g i a n d s e e d l i n g g r o w t h p h y s i o l o g y R D A分析(图5-A)发现,R D A解释率分别为6 7.2 4%和2 7.0 2%,总解释率为9 4.2 6%,解释率较高。可见促生菌的产I AA能力对米槁幼苗生长与生理影响最大,其中地上生物量和根体积与产I AA能力关系最大。由图5-B可知,促生菌的产I AA能力与米槁幼苗地上生物量、地下生物量、根长、根体积和根表面积极显著相关,与米槁幼苗苗高显著相关。促生菌的溶磷、解钾能力与P P O活性极显著负相关,促生菌的解钾能力与植物幼苗的根长显著相关。3 讨 论植物内生促生真菌能够产生激素或信号分子、溶解土壤难溶性磷、增强植物对病原菌的抗性和忍耐力1 7,本试验筛选了米槁根部内生真菌中具有溶磷、解钾及产I AA特性的菌株,发现有8株菌具有溶磷、解钾及产I AA的促生特性,其中球毛壳菌、哈茨木霉、深绿木霉、深色有隔真菌的溶磷、解钾及产I AA能力最强。研究发现,球毛壳菌不仅可以促进黄瓜的生长,还可提高黄瓜的内源激素含量及多种酶活性1 8;哈茨木霉对番茄幼苗的生长影响显著,能够明显提高其对氮钾的吸收1 9;伍晓丽等2 0研究发现,深绿木霉对青蒿有促生作用,可以作为青蒿的苗肥;深色有隔内生真菌能够促进黄芪的生长,提高其抗旱能力,且深色有隔内生真菌与绿色木霉共同接种的 促 生 效 果 更 佳2 1,还 能 促 进 板 蓝 根 的 生长2 2。本研究发现,深绿木霉能够显著提升米槁幼苗的苗高、地径、根长、根体积、根表面积、根尖数及生物量,深色有隔真菌能够显著提升米槁幼苗的S O D活性,哈茨木霉能够显著提高米槁幼苗的C AT活性和全磷含量,球毛壳菌能够显著提高米槁幼苗的苗高和全钾含量,表明不同菌种对米槁幼苗生长发育的作用有所不同,这与G r a h a m等2 3的研究结论相似,这可能是因为所接种菌株与寄主亲和性不同及接种后成功侵染时间不同所造成的。通过对促生98第9期彭 靓,等:米槁根部内生促生真菌筛选及其促生特性研究菌促生能力与幼苗接种后生长生理关系的分析发现,真菌的产I AA能力与幼苗生长生理关系最为密切,且对幼苗的影响多为正向促进,这与多个研究结果2 4-2 5类似,这是因为I AA能够促进细胞分裂,改变植物内源激素的结构,还能增加木质素、纤维素等的积累,从而促进植物的生长发育2 6。而溶磷、解钾能力与P P O活性呈显著负相关,接种4种促生菌的米槁幼苗的P P O活性均显著低于C K幼苗,不仅如此,接种球毛壳菌和哈茨木霉的米槁幼苗的P O D活性也不如C K高,这与多数研究结果2 7-2 8相反,可能是接种促生菌后,米槁本身产生了一种或多种抑制P P O及P O D活性的物质,使其活性降低。C AT能够清除体内H2O2,避免植物受H2O2的毒害,接种了哈茨木霉的米槁幼苗的C AT活性显著高于C K,这可 能 是 哈 茨 木 霉 能 够 诱 导 米 槁 幼 苗 合 成C AT或者促生菌本身能合成C AT2 9,以更好地消除幼苗生长过程中H2O2的毒害。本研究表明,4种促生菌对米槁幼苗生长的影响不同,因此若要对米槁幼苗的生长发育进行多方面的促进,还需要进行促生菌间的对抗试验,以筛选到能相互共存、对幼苗具有多方面促生效应的混合菌种,这将是后期研究的重点。4 结 论从米槁根部筛选得到4株具有较强溶磷、解钾能力及产I AA特性的内生真菌,分别为球毛壳菌、哈茨木霉、深绿木霉及深色有隔真菌。其中球毛壳菌能够显著提高幼苗的苗高和全钾含量,哈茨木霉能够显著提高米槁幼苗的C AT活性并促进幼苗对磷的吸收,深绿木霉能够显著促进米槁苗高及地下部分的生长,深色有隔真菌能够显著提升米槁幼苗的S O D活性,表明4株内生真菌对米槁皆有促进作用,但对米槁幼苗生长发育的作用机理不同。参考文献1 王颜波,张伟溪,丁昌俊,等.不同生态环境下银中杨内生菌群落结构及生态位变异 J.林业科学,2 0 2 0,5 6(2):4 8-6 0.W a n g Y B,Z h a n g W X,D i n g C J,e t a l.C o mm u n i t y s t r u c t u r e a n d n i c h e d i f f e r e n t i a t i o n o f e n d o p h y t i c m i c r o b i o m e i n P o p u l u s a l b aP.b e r o l i n e n s i s u n d e r d i f f e r e n t e c o l o g i c a l e n v i r o n m e n t J.S c i e n t i a S i l v i a S i n i c a e,2 0 2 0,5 6(2):4 8-6 0.2 隋 丽,万婷玉,路 杨,等.内生真菌对植物促生、抗逆作用研究进展 J.中国生物防治学报,2 0 2 1,3 7(6):1 3 2 5-1 3 3 1.S u i L,W a n T Y,L u Y,e t a l.R e v i e w o f f u n g a l e n d o