抗酸染色法与RT-PCR定量辅助诊断结核分枝杆菌感染的价值对比.pdf

哈尔滨医药 2023 年 6 月第 43 卷第 3 期结核病是由结核分枝杆菌（MTB）感染的一种呼吸道传染性疾病，在我国属于重大传染性疾病，威胁着人类健康1-2。任何年龄段均可发病，免疫力低下者更易感染，结核菌感染可侵犯人体全身各种器官，以肺部最常见，早诊断、早治疗是防控结核病的原则3。本研究将对抗酸染色法和 RT-PCR 定量检测阳性病例进行前瞻性观察，分析两种方法检测MTB 与临床诊断结核病的准确度，探讨抗酸染色法与 RT-PCR 定量辅助诊断 MTB 感染的价值，为临床检验提供数据支持。1资料与方法1.1一般资料：本研究经本院伦理委员会审核并通过，取得患者及其家属知情同意，选取本院 2020 年5 月至 2021 年 11 月疑似结核病患者的病理标本共 126 例，患者均有咳嗽、咳痰、低热、盗汗、乏力等症状，其中胸膜和胸壁组织 12 例、肺组织 79 例、淋巴结 27 例，关节组织 4 例，膀胱组织 3 例，肾脏组织 1 例。所有病理标本均经石蜡包埋法进行组织切片，组织学改变均在镜下形态为肉芽肿性炎伴坏死。1.2方法：所有标本均行抗酸染色法和 RT-PCR定量检测。1.2.1抗酸染色：将石蜡包埋组织切片，厚度为5滋m，进行裱片和烤片，将条码贴置于载玻片的另外一侧进行标记后置入全自动特殊染色机内（仪器：采自达科为（深圳）医疗设备有限公司，型号：DP261），设定抗酸染色的程序进行自动染色，待染色成功后将玻片进行梯度酒精脱水处理，去除残留液体，采用永久封片剂行盖玻片封层固定，在光镜下进行切片观察。1.2.2提取 DNA：核对好患者信息，将病变情况典型病灶石蜡包埋组织切片 35 片，厚度均为 5滋m，活检标本连续切片 10 片，将每份标本置入 EP 试管内，进行 DNA 提取：采用二甲苯常规脱蜡后进行离心处理（14000r/min，3min），去除上清液，管内加入RTL 缓冲液 100mL 及蛋白酶 K 溶液 20uL，应用移液枪进行组织分裂，在 56益条件下进行 15min 消化后再次离心（14000r/min，2min），去除上清液，管内加入 DTL 缓冲液 140uL 及蛋白酶 K 溶液 15uL，再次应用移液枪进行组织分裂，在 56益条件下进行1h 消化，加入 DES 缓冲液 10uL，在 90益条件下进行 2h 孵育，取出管内加入 DTB 缓冲液和无水乙醇各 200uL，混合均匀后将液体转至 DNA 吸附柱，再次离心（14000r/min，1min）后去除离心液换用新收集管，在吸附膜中心滴入 50100uLDTE 缓冲液，静置 5min，再次离心（14000r/min，1min）后进行 DNA采集。（试剂盒采自广州健仑生物科技有限公司，货号：JL56404）。1.2.3RT-PCR 定量检测：按照 MTB PCR 试剂盒（采自上海雅吉生物科技有限公司）说明书来进行配置反应，同时进行阳性和阴性对照实验（为试剂盒自带）。将制备好的 PCR 反应管置入全自动 PCR检测分析仪中（仪器：采自西安天隆科技有限公司，型号：Gentier mini）。PCR 反应条件：淤37益/5min；92益/1min；于94益/5s；72益/30s。进行 3040 次循环后结束反应。1.2.4结果判读：由 2 名资深检验技师同时进行结果判读，在有歧义时邀请另一名资深技师参与结果的判断，共同谈论明确结果。抗酸染色切片在油镜下观察到有呈棕红色且两端圆顿稍弯曲的细丝状杆菌，则为阳性，反之为阴性。RT-PCR 定量检测首先需确定实验是否为有效实验，根据试剂盒说明书，解读循环阈值（Ct 值）。Ct 值为 40 或无数值为阴性，Ct臆37 为阳性。如出现 40Ct37 时需重新进抗酸染色法与 RT-PCR 定量辅助诊断结核分枝杆菌感染的价值对比王瑜（开封市结核病防治所，河南 开封 475000）摘要 目的探讨抗酸染色法与荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）定量辅助诊断结核分枝杆菌感染的价值。方法选取临床疑似结核病患者的送检病理标本 126 例，均行抗酸染色法与 RT-PCR，以患者纤维支气管镜灌洗液、痰液和组织穿刺培养液检测结果为金标准，对比抗酸染色法与 RT-PCR 检测结核分枝杆菌的价值。结果在 126 例患者中有 50 例被确诊为结核病，经抗酸染色法检出 42 例阳性，经 RT-PCR 定量检测检出 44 例阳性，经抗酸染色法联合 RT-PCR 定量检测检出 40 例阳性，与金标准相比，抗酸染色法诊断 MTB 的敏感度为 84.00%，特异度为 80.26%，准确度为 81.75%，Kappa 为 0.818；RT-PCR定量检测诊断 MTB 的敏感度为 88.00%，特异度为 94.74%，准确度为 92.06%，Kappa 值为 0.921%；两种方法联合检测的敏感度为 80.00%，特异度为 97.37%，准确度为 90.48%，Kappa 值为 0.905。结论抗酸染色法与 RT-PCR 均具有诊断 MTB 的价值，两者联合检测可更好的辅助临床诊断结核病。关键词抗酸染色法；荧光定量聚合酶链式反应；结核分枝杆菌中图分类号R521文献标识码B学科分类代码：32011文章编码：1001-8131（2023）03-0113-03DOI：10.3969/j.issn.1001-8131.2023.03.043113哈尔滨医药 2023 年 6 月第 43 卷第 3 期行实验，重复结果40 时为阳性，反之为阴性。1.3观察指标：对抗酸染色法与 RT-PCR 定量检测法检出为阳性者进行临床诊疗追踪，以患者纤维支气管镜灌洗液、痰液和组织穿刺培养液检测结果为金标准。1.4统计学处理：采用 SPSS 22.0 统计学软件处理，计数资料用n（%）表示，组间差异采用 字2检验，当P0.05 表示差异有统计学意义。2结果2.1抗酸染色检出结果与金标准结果比较：在 126例患者中有 50 例被确诊为结核病，经抗酸染色法检出 57 例阳性，检出率为 45.24%（57/126），与金标准诊断结果相比，Kappa 值为 0.818，假阴性为 8例，漏诊率为 6.35%（8/126）；假阳性 15 例，误诊率为11.90%（15/126）。见表 1。表 1抗酸染色检出结果与金标准结果比较2.2RT-PCR 定量检测检出结果与金标准结果比较：在 126 例患者中有 50 例被确诊为结核病，经RT-PCR 定量检测检出 48 例阳性，检出率为 38.10%（48/126），与金标准诊断结果相比，Kappa 值为 0.921，假阴性为 6 例，漏诊率为 4.76%（6/126）；假阳性 4 例，误诊率为 3.17%（4/126）。见表 2。表 2RT-PCR 定量检测检出结果与金标准结果比较2.3抗酸染色法联合 RT-PCR 定量检测检出结果与金标准比较：在 126 例患者中有 50 例被确诊为结核病，经抗酸染色法联合 RT-PCR 定量检测检出40例阳性，检出率为 31.75%（40/126），与金标准诊断结果相比，Kappa 值为 0.905，假阴性为 10 例，漏诊率为 7.94%（10/126）；假阳性 2 例，误诊率为 1.59%（2/126）。见表 3。表 3抗酸染色法联合 RT-PCR 定量检测检出结果与金标准比较2.4抗酸染色法、RT-PCR 定量检测及其联合检测MTB 效能：抗酸染色法诊断 MTB 的敏感度为84.00%，特异度为 80.26%，准确度为 81.75%，Kap原pa 为 0.818，阴性预测值为 88.41%，阳性预测值为73.68%；RT-PCR 定量检测诊断 MTB 的敏感度为88.00%，特异度为 94.74%，准确度为 92.06%，Kap原pa 值为 0.921，阴性预测值为 92.31%，阳性预测值为 91.67%；两种方法联合检测的敏感度为 80.00%，特异度为 97.37%，准确度为 90.48%，Kappa 值为0.905，阴性预测值为 88.10%，阳性预测值为95.24%。见表 3。表 3抗酸染色法、RT-PCR 定量检测及其联合检测 MTB效能比较（n，%）3讨论本研究将本院疑似结核病送检的病理标本进行两种方式的检验，对病例进行追踪，以临床纤维支气管镜灌洗液、痰液和组织穿刺培养液检测结果为金标准，结果显示，在 126 例中共确诊为结核病的有 50 例，经抗酸染色法检出 57 例阳性，检出率为 45.24%，漏诊率为 6.35%，误诊率为 11.90%，准确度为 81.75%，经 RT-PCR 定量检测检出 48 例阳性，检出率为 38.10%，漏诊率为 7.94%，误诊率为1.59%，准确度为 92.06%。抗酸染色法在诊断 MTB时，对样品的要求较高，在样本含量未达标时，诊断可能存在假阴性4，且在最终镜下观察时易受到观察者的主观影响，造成误诊漏诊的情况出现5-6，而RT-PCR 定量检测可针对 MTB 的 DNA 进行检测，特异性较好且重复性较高11。RT-PCR 可在抗酸染色检测阳性的基础上进行进一步区分，同时对一些仅有凝固性坏死和纤维化表现的组织，在抗酸染色检测为阴性时进行进一步确诊8-9。本研究显示，抗酸染色法诊断 MTB 的敏感度为84.00%，特异度为 80.26%，Kappa 值为 0.818，RT-PCR 定量检测 MTB 的敏感度为 88.00%，特异度为94.74%，Kappa 值为 0.921。说明 RT-PCR 定量检测的诊断效能较高于抗酸染色法，与李小燕等10研究结果相似。且在抗酸染色法检测出阴性的病例，在RT-PCR 定量检测中显示为阳性，说明临床如采用抗酸染色法检测出阴性时，不可直接诊断为非 MTB感染，可进一步进行 RT-PCR 定量检测，本研究显示，两者联合检测的特异度为 97.37%，高于两者单独检测，说明临床有条件可进行联合检测，为临床抗酸染色法金标准合计Kappa 值阴性86169合计5076126阳性阴性阳性4215570.818抗酸染色法联合RT-PCR 定量检测金标准合计Kappa 值阴性107484合计5076126阳性阴性阳性402420.905RT-PCR 定量检测金标准合计Kappa 值阴性67278合计5076126阳性阴性阳性444480.921检测方法敏感度 特异度 准确度Kappa值阴性预测值阳性预测值抗酸染色法84.0080.2681.750.81888.4173.68RT-PCR 定量检测 88.0094.7492.060.92192.3191.67联合检测80.0097.3790.480.90588.1095.24114哈尔滨医药 2023 年 6 月第 43 卷第 3 期甲状腺癌是头颈部最常见的肿瘤之一，起源于甲状腺上皮细胞，甲状腺内发现表面不平、质地固定而硬的肿块是甲状腺癌的主要临床表现，易损伤患者肝肾功能和呼吸系统，对患者的生命健康产生影响1-2。目前，甲状腺癌患者主要通过手术治疗，但手术具有一定的创伤性，且复发率较高，易导致患者出现不良情绪，进一步影响疾病的治疗与康复3。此外，甲状腺癌患者术后易出现呼吸困难、进食困难等问题，若未得到及时干预，将影响患者术后的生活质量4。因此给予甲状腺癌患者围术期有效护理对改善预后具有重要意义。多学科协作康复护理是一种新型护理模式，其将各学科的力量集中在一起，使护理工作更加合理、专业和规范5。基于此，本研究旨在探究多学科协作康复护理模式在甲状腺癌患者围术期中的应用效果。具体如下。1资料与方法1.1一般资料：按照随机数字表法将我院 2020 年6 月至 2022 年 6 月收治的 80 例接受手术治疗的甲状腺癌患者分为观察组（40 例）和对照组（40 例）。观察组年龄 2475 岁，平均（48.01依8.23）岁；男 24例，女 16 例；体重 4374kg，平均（58.31依3.69）kg；病程 17 年，平均（3.59依0.27）年。对照组年龄 2576岁，平均（48.12依8.62）岁；男 22 例，女 18 例；体重4575kg，平均（59.31依3.23）kg；病程 17 年，平均多学科协作康复护理模式对甲状腺癌患者心理应激反应及术后康复的影响王立华（濮阳市第五人民医院 外科，河南 濮阳 457000）摘要目的探究多学科协作康复护理模式对甲状腺癌患者心理应激反应及术后康复的影响。方法按照随机数字表法将80例接受手术治疗的甲状腺癌患者分为观察组（40例）和对照组（40例）。对照组给予常规护理干预，观察组给予多学科协作康复护理干预，比较两组疾病相关知识掌握程度、心理状态、术后疼痛情况、恢复情况、生活质量和并发症发生情况。结果与对照组相比，观察组干预后疾病相关知识掌握度较优（P0.05）；与对照组相比，观察组干预后 SDS、SAS、VAS 评分较低（P0.05）；与对照组相比，观察组术后下床和平均住院时间较短（P0.05）；与对照组相比，观察组干预后 SF-36 量表各项评分均较高（P0.05）；观察组并发症发生率低于对照组（P0.05）。结论多学科协作康复护理模式能够有效改善甲状腺癌患者心理状态，缓解术后疼痛程度，缩短住院时间，减少术后并发症，提升生活质量。关键词甲状腺癌；多学科协作康复护理；心理应激反应；并发症；生活质量中图分类号R736.1文献标识码B学科分类代码：32067文章编码：1001-8131（2023）03-0115-03DOI：10.3969/j.issn.1001-8131.2023.03.044诊断提供更有力的证据，更好的辅助临床诊疗。当然，在抗酸染色法检测为阳性，RT-PCR 定量检测为阴性时，也不能完全排除无其他非典型 MTB 感染，临床医师应更加谨慎，再进一步进行检测以明确结果。综上所述，抗酸染色法与 RT-PCR 均具有诊断MTB 的价值，两者联合检测可更好的辅助临床诊断结核病。临床医师可根据患者实际情况选择合适的检测方案，最大程度减少误诊漏诊的情况。参考文献1 武崇文.512 例中老年肺结核患者结核菌株耐药情况调查 J.罕少疾病杂志，2020，27（6）：3-4.2 庞倩雄，邹远华.佛山市禅城区活动性肺结核患者密切接触者筛查结果分析 J.海南医学，2019，30（17）：2240-2243.3 钟涛，詹广兴，范玉铮，等.深圳市南山区高危人群结核菌潜伏感染情况及影响因素 J.中国热带医学，2020，20（08）：702-709，716.4 李松.结核分枝杆菌的病原学检测及耐药性分析 J.罕少疾病杂志，2020，27（6）：10-11，63.5 黄蓉飞，蔡玮，樊元春，等.抗酸染色与荧光定量 PCR检测在淋巴结结核诊断中的应用 J.成都医学院学报，2020，15（5）：630-633.6 牛群，刘志辉，孟繁荣，等.荧光定量 PCR 和抗酸染色检测结核杆菌的相关性 J.国际医药卫生导报，2017，23（15）：2375-2377.7 孙林雍，严嘉琦，陈昶，等.荧光定量 PCR 与抗酸特殊染色对疑似骨关节结核中结核分枝杆菌的检测对比J.临床与实验病理学杂志，2020，36（9）：101-103.8 林晓.抗酸染色与荧光定量 PCR 检测在石蜡组织结核病理诊断中的比较 J.临床与实验病理学杂志，2019，35（3）：356-357.9 袁瑛，明湘虹，郑宏，等.SAT 技术与荧光定量 PCR 在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究 J.临床肺科杂志，2019，24（3）：538-540.10李小燕，吴丹，姚梅宏，等.抗酸染色与即时荧光定量PCR 法检测结核分枝杆菌在辅助诊断结核病中的作用比较 J.中华病理学杂志，2018，47（2）：132-134.收稿日期：2022-09-07115