生物实验室常用培养基和溶液配制.doc

#1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)#
组份浓度：1MTris-HCl 配制量：1L
配制方法：
1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。
pH 7.4 HCl 70ml; pH 7.6 HCl 60ml; pH 8.0 HCl 42ml
4.加水将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

#10&timeTEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)
组份浓度：100mMTris-HCl,10mMEDTA
配制量：1L 配制方法：
1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。

#1.5MTris-HCl(pH8.8)
组份浓度：1.5MTris-HCl 配制量：1L
配制方法：
1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

#3M醋酸钠(pH5.2)#
组份浓度：3M醋酸钠 配制量：100ml
配制方法：
1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。
#Tris-HCl平衡苯酚#
配制方法：
1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)
配制方法：
1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
#10M醋酸铵#
组份浓度：10M醋酸铵 配制量：100ml
配制方法：
1.称量77.1g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100ml。
3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

#10%(W/V)SDS#
组份浓度：10%(W/V)SDS 配制量：100ml
配制方法：
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2
3.将溶液定容至100ml后，室温保存。

#2NNaOH#
组份浓度：2NNaOH 配制量：100ml
配制方法：
1.量取80ml去离子水置于100～200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。
4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

#2.5NHCl#
组份浓度：2.5NHCl 配制量：100ml
配制方法：
1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N)，均匀混合。
2.室温保存。

#5MNaCl#
组份浓度：5MNaCl 配制量：1L
配制方法：
1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。
3.高温高压灭菌后，4℃保存。
#20%(W/V)Glucose#
组份浓度：20%(W/V)Glucose 配制量：100ml
配制方法：
1.称取20gGlucose置于100～200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100ml。
3.高温高压灭菌后，4℃保存。

#SolutionI(质粒提取用)#
组份浓度：25mMTris-HCl（pH8.0),
10mMEDTA,50mMGlucose
配制量：1L
配制方法：
1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
2.高温高压灭菌后，4℃保存。
3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml)。

#SolutionII(质粒提取用)#
组份浓度：200mMNaOH，1%(W/V)SDS
配制量：500ml
配制方法：
1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中
10%SD50ml
2NNaOH50ml
2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀
3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌

#SolutionIII(质粒提取用)#
组份浓度：3MKOAc,5MCH3COOH
配制量：500ml
配制方法：
1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。
2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至500ml。
4.高温高压灭菌后，4℃保存。
X-α-Gal储存液：N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解X-α-Gal粉末，浓度为20 mg/ml，-
20℃避光保存。
1.1×TE/LiAc: 1.1ml10×TE，1.1ml 1mol/L LiAc，用ddH2O定容到10ml。
1×PEG/LiAc: 8ml 50% PEG3350, 1ml10×TE, 1ml1mol/L LiAc。
#0.5MEDTA(pH8.0)#
组份浓度：0.5MEDTA 配制量：1L
配制方法：
1.称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。
3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH)。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1L。
5.适量分成小份后，高温高压灭菌。
6.室温保存。
#1MDTT#
组份浓度：1MDTT 配制量：20ml
配制方法：
1.称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。
2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。
3.适量分成小份后，-20℃保存。
#10mMATP#
组份浓度：10mMATP
配制量：20ml
配制方法：
1.称取121mgNa2ATmiddot;3H2O，加入到50ml塑料离心管内。
2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。
3.适量分成小份后，-20℃保存。
#10×TEBuffer
组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA
（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L
配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。
@2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
Tryptone16g
Yeastextract10g
NaCl4ml
如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加Agar12g/L,上层琼脂平板添加琼Agar7g/L。

#PBSBuffer
组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4配制量1L
配置方法
1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。
NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO41.42g，KH2PO40.27g
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2
@LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
Tryptone 10g；Yeastextract 5g；NaCl 10g
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加Agar 12g/L,上层琼脂平板添加Agar 7g/L。
@SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
Tryptone 20g
Yeastextract 5g
NaCl0.5g
1mol/LKCl2.5ml
用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/LMgCl2。
@SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/LMgCl2外，再加2ml灭菌的1mol/LGlucose（18gGlucose溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
@TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
Tryptone12g
Yeastextract24g
甘油4ml
各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）
@YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
Tryptone20g
Yeastextract10g
Glucose20g
用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸Trp营养缺陷型每升培养基添加1.6gTrp，因为YPD培养基是色氨酸Trp限制型培养基。注：固体培养基加2% Agar。
@SD/DO培养基：6.7g/L酵母氮源，2%(w/v)葡萄糖，相应缺陷型的10×DO母液
100ml/L ，121℃高压灭菌15min。注：固体培养基加2% Agar。
氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

3．常用核酸蛋白换算数据
（1）重量换算
1μg=10~6g1pg=10~12g
1ng=10~9g1fg=10~15g
（2）分光光度换算：
1A260双链DNA=50μg/ml
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
（3）DNA摩尔换算：
1μg100bpDNA=1.52pmol=3.03pmol末端
1μgpBR322DNA=0.36pmol
1pmol1000bpDNA=0.66μg
1pmolpBR322=2.8μg
1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿
（4）蛋白摩尔换算：
100pmol分子量100，000蛋白质=10μg
100pmol分子量50，000蛋白质=5μg
100pmol分子量10，000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
（5）蛋白质/DNA换算：
1kbDNA=333个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质
10，000MW蛋白质=270bpDNA
30，000MW蛋白质=810bpDNA
50，000MW蛋白质=1.35kb
100，000MW蛋白质=2.7kbDNA