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第 42 卷 第 4 期2023 年 8 月 黑龙江水产Northern Chinese FisheriesVol.42 No.4 August 2023文章编号:1674-2419(2023)04-0279-03作者简介:杜洪义(1970.9-),男,汉族,山东东明人。山东省东明县水产服务中心高级工程师。主要从事淡水养殖、渔业病害防治、水生动物营养与饲料加工、水产品质量安全检测员等技术工作。枯草芽孢杆菌对鲫鱼机体免疫力的影响杜洪义(山东省东明县水产服务中心,山东东明 274500)摘 要:试验旨在研究在鲫(Carassius auratus)的饵料中添加不同水平的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),探究枯草芽孢杆菌对其机体免疫功能的影响。试验选择体质健康、规格均匀、体重约为 5g 的鲫 320 尾,随机分成 4 个处理组,每组4 个重复,每个重复20 尾鲫鱼。对照组鲫投喂基础饵料,试验组鲫分别投喂添加0.1%、0.2%和0.4%的枯草芽孢杆菌的基础饵料。试验鲫驯养 2 周后进行 8 周的正式试验。试验结束后,每组挑选 20 尾鲫采集血液,检测血清免疫指标。结果表明,与对照组相比 0.2%组和 0.4%组的枯草芽孢杆菌可以使鲫的血清中溶菌酶活性显著提高 8.77%和 8.50%(P0.05),碱性磷酸酶活性显著提高了 20.04%和 23.05%(P0.05),超氧化物歧化酶活性显著提高了 9.93%和 13.15%(P0.05),丙二醛水平显著降低了 27.36%和 33.79%(P0.05),过氧化氢酶活性显著提高了 23.74%和 30.55%(P0.05)。综上所述,在鲫养殖中饵料中添加 0.2%和 0.4%的枯草芽孢杆菌可以提高鲫机体的非特异性免疫功能,且综合数据结果,在鲫的养殖中使用 0.2%的枯草芽孢杆菌即可。关 键 词:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);鲫(Carassius auratus);免疫功能中图分类号:S965.117文献标志码:A 随着中国鲫养殖规模逐渐壮大,养殖密度提高,导致鲫的机体免疫力低下,生长性能受阻,机体健康严重受到影响1。2020 年 7 月开始禁止在动物饲料端添加具有促生长、预防疾病的抗生素后,寻找具有抗生素功能,安全、高效、绿色、无残留、无耐药的饲料添加剂已成为养殖行业的研究重点。其中,微生态制剂是一种可以调节动物肠道菌群结构、改善肠道健康的活菌制剂,在替代抗生素方面具有显著的效果2。而枯草芽孢杆菌属于芽孢杆菌属的一种,在腐败的有机物、土壤、动物肠道中分布较为广泛3。目前,枯草芽孢杆菌在畜禽及水产生物养殖中均有较为广泛的应用研究成果,如于道德等4研究表明,在凡纳滨对虾养殖生产中使用适量的枯草芽孢杆菌可以提高对虾机体的免疫力及抗病力,进而改善生长性能。赵峰等5研究发现,在罗非鱼生产中添加 0.2%的枯草芽孢杆菌可以改善肠道健康,调节血脂平衡,提高机体免疫力,进而促进生长。但目前枯草芽孢杆菌在鲫鱼养殖生产中的应用研究结果比较少见,因此,该试验探讨不同剂量的枯草芽孢杆菌对鲫鱼机体免疫力的影响,为枯草芽孢杆菌在水产动物养殖中的应用及提高水产动物机体健康提供参考依据。1 材料与方法1.1 枯草芽孢杆菌和鲫该研究使用的枯草芽孢杆菌由中国水产科学院淡水渔业研究中心提供,其有效活菌数为 1.0108CFU/g。鲫由山东省泰源水产养殖有限公司提供。1.2 试验设计试验选择体质健康、规格均匀、体重约为 5g 的鲫 320 尾,随机分成 4 个处理组,每组 4 个重复,每个重复 20 尾鲫。对照组鲫投喂基础饵料,试验组鲫分别投喂含有0.1%、0.2%和0.4%的枯草芽孢杆菌的基础饵料。试验鲫驯养 2 周后进行,正式试验为972第 42 卷 第 4 期2023 年 8 月 黑龙江水产Northern Chinese Fisheries研究报告The research report期 8 周。试验结束后,每组挑选 20 尾鲫采集血液,检测血清免疫指标。试验设计如表 1 所示。试验鲫基础饵料配方见表 2。表 1 试验设计组别处理对照组基础饵料0.1%组基础饵料+0.1%枯草芽孢杆菌0.2%组基础饵料+0.2%枯草芽孢杆菌0.4%组基础饵料+0.4%枯草芽孢杆菌表 2 试验鲫的基础饵料配方原料含量(%)营养成分含量(%)豆粕14粗蛋白33.84鱼粉32粗脂肪9.27菜粕14粗灰分9.83面粉28鱼油2.5豆油2.5微晶纤维5预混料2合计100注:营养成分含量是检测值。1.3 鲫的养殖管理正式试验开始前,鲫驯养 2 周适应养殖环境,之后从中挑选 320 尾体质健壮、规格均匀、体重约为5g 的鲫进行正式试验。试验选用 16 个规格为(长0.8m宽 0.5m高 0.8m)玻璃缸,每缸放鱼 20 尾。每日各组鲫分别在8:00、12:30 和18:30 投喂3次,投喂量约为鲫体重的 3.5%。养殖水中连续充气,水温约为 22.5,pH 值约为 8.0,溶解氧浓度大于 6mg/L,氨氮浓度小于 0.1mg/L,亚硝酸盐浓度小于 0.03mg/L。1.4 免疫指标的测定试验结束后,从每组中挑选 20 尾鲫鱼尾静脉采血,使用离心机 4000r/min 离心 5mins,收集血清用于检测血清中的溶菌酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及丙二醛等免疫指标。检测步骤及方法参考试剂盒说明书,试剂盒由南京建成生物工程研究所生产。1.5 数据分析免疫指标数据使用 SPSS22 软件进行 t 检验分析,组间数据两两比较使用 LSD 方法,结果以平均值呈现,P0.05 表示数据具有显著性差异。2 结果枯草芽孢杆菌对鲫血清免疫指标的影响见表 3,在鲫的饵料中添加 0.2%和 0.4%的枯草芽孢杆菌可以有效增强机体的免疫力。与对照组相比,溶菌酶活性分别显著提高了 8.77%和 8.50%(P0.05),碱性磷酸酶活性分别显著提高了 20.04%和 23.05%(P0.05),超氧化物歧化酶活性分别显著提高了 9.93%和 13.15%(P0.05),丙二醛水平分别显著降低了27.36%和 33.79%(P0.05),过氧化氢酶活性分别显著提高了 23.74%和 30.55%(P0.05)。表 3 枯草芽孢杆菌对鲫鱼血清免疫指标的影响组别溶菌酶(U/mL)碱性磷酸酶(U/L)超氧化物歧化酶(U/mL)丙二醛(mmol/mL)过氧化氢酶(U/mL)对照组60.2126.2064.057.314.550.1%组62.3728.3167.496.055.040.2%组65.4931.4570.415.315.630.4%组65.3332.2472.474.845.94总标准误2.010.843.101.050.31P 值0.0360.0290.0310.0210.029注:数据标注“”表示与对照组相比,具有显著性差异(P0.05)。3 讨论鲫机体的免疫力关系到机体健康及养殖生产的经济效益。邵林等6在鲫鱼养殖中,在水中添加100mL 的枯草芽孢杆菌,可以有效提高血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶及碱性磷酸酶活性,降低了丙二醛含量。谢少林等7在鲫鱼养殖中,在饵料中添加适量的枯草芽孢杆菌可以有效提高鲫鱼血清中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性。以上研究结果与该研究结果类似。该研究中,使用 0.2%和 0.4%的枯草芽孢杆菌可以使鲫的血清中溶菌酶活性显著提高了 8.77%、8.50%;碱性磷酸酶 活 性 显 著 提 高 了 20.04%、23.05%;超氧化物歧化酶活性显著提高了 9.93%、13.15%;丙二醛水平显著降低了 27.36%、33.79%;过氧化氢酶活性显著提高了 23.74%、30.55%。表082第 42 卷 第 4 期2023 年 8 月 黑龙江水产Northern Chinese Fisheries研究报告The research report明枯草芽孢杆菌有效改善了鲫机体的非特异性免疫力。枯草芽孢杆菌提高鲫鱼机体免疫力主要是由于枯草芽孢杆菌可以抑制养殖中对机体有害的微生物(如弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等);枯草芽孢杆菌可以能分泌几丁质酶,可以将水中的有毒有害物质、残饵、粪便等分解,净化水质;枯草芽孢杆菌具有较强的消化酶活性(蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶),可以使水产动物采食饵料后,对饵料中营养物质充分消化吸收,供机体利用。4 结论该试验中,在鲫的饵料中添加适量的枯草芽孢杆菌可以显著提高血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、过氧化氢酶活性,有效降低了脂质氧化物丙二醛的水平,改善了机体的非特异性免疫力,且枯草芽孢杆菌的最适添加水平为 0.2%。参考文献:1刘晓东.鲫鱼高效养殖技术要点J.特种经济动植物,2021,24(08):38-39.2孙远远,管剑峰,黄晓慧,等.微生态制剂在水产养殖水质调控中的应用J.水产养殖,2022,43(11):15-17+31.3吴孔阳,娄亚芳,杨同香,等.枯草芽孢杆菌功能及相关机制研究进展J.黑龙江畜牧兽医,2020(23):55-58.4于道德,陈胜林,郭少菁,等.饲料中添加枯草芽孢杆菌HSP05 对凡纳滨对虾生长性能、抗病力和非特异性免疫力的影响J.动物营养学报,2022,34(10):6634-6642.5赵峰,陆娟娟,夏中生,等.果寡糖、枯草芽孢杆菌和金霉素对奥尼罗非鱼生长性能、血清生化指标和肠道菌群的影响J.饲料研究,2019,42(04):123-128.6邵林,李璟,乐露,等.枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌对鲫鱼免疫机能的影响及其代谢产物的抑菌活性研究J.黑龙江畜牧兽医,2018(20):176-178.7谢少林,王超,李正光,等.饲料中添加枯草芽孢杆菌对彭泽鲫生长、免疫的影响J.水产科技情报,2015,42(05):268-271.Effect of Bacillus subtilis on the immunity of Carassius auratus organismDU Hongyi(Dongming County Fisheries Service Centre,Dongming 274500,Shandong China)Abstract:The experiment aimed to investigate the effect of Bacillus subtilis on the immune function of Carassius au-ratus by adding different levels of Bacillus subtilis to their baits.The test was conducted on 320 healthy,uniformly sized Carassius auratus weighing about 5g,randomly divided into 4 treatment groups with 4 replicates of 20 carp each.The control Carassius auratus were fed with basal bait and the test Carassius auratus were fed with basal bait supplemented with 0.1%,0.2%and 0.4%of Bacillus subtilis respectively.The test Carassius auratus were domes-ticated for 2 weeks and then subjected to a formal trial for 8 weeks.At the end of the trial,blood was collected from 20 Carassius auratus in each group and serum immunological parameters were tested.The results showed that Bacil-lus subtilis in the 0.2%and 0.4%groups significantly increased the serum lysozyme activity of the Carassius aura-tus by 8.77%and 8.50%(P0.05);alkaline phosphatase activity by 20.04%and 23.05%(P0.05);super-oxide dismutase activity by 9.93%and 13.15%(P0.05);malondialdehyde level significantly decreased by 27.36%and 33.79%(P0.05);catalase activity significantly increased by 23.74%and 30.55%(P0.05).In conclusion,the addition of 0.2%and 0.4%Bacillus subtilis to the bait in Carassius auratus culture could improve the non-specific immune function of the Carassius auratus organism.According to the comprehensive data results,0.2%Bacillus subtilis can be used in Carassius auratus culture.Keywords:Bacillus subtilis;Carassius auratus;immune function182