甲磺酸加贝酯衍生物的合成及其对蛋白酶活性的抑制.pdf

第4期甲磺酸加贝酯是一种小分子非肽类蛋白抑制剂，可以抑制蛋白酶、激肽释放酶、凝血酶等蛋白酶的活性，已在弥散性血管内凝血、胰腺损伤和急性胰腺炎的治疗中有所应用1-7。其化学结构如图1所示。研究发现，带胍基或脒基的类丝氨酸蛋白酶抑制剂能够有效的抑制胰蛋白酶、血纤维蛋白溶酶、凝血酶等酶的活性，一些蛋白酶抑制剂临床上已在急性胰腺炎的治疗上有所应用。甲磺酸加贝酯的药代动力学8-9是其进入人体后分解为 6-胍基己酸和对羟基苯甲酸乙酯。本文中对其可能的作用基团进行修饰，测试并比较了这些基因对蛋白酶抑制作用的活性的不同。收稿日期：2022-10-18基金项目：湖北省功能化学品工程技术研究中心开放课题（GCZX-2022-01）作者简介：孙正扬，硕士研究生。E-mail：*通讯作者：王凯，博士，教授。E-mail：引文格式：孙正扬，闫旭冉，姜军，等.甲磺酸加贝酯衍生物的合成及其对蛋白酶活性的抑制 J.武汉工程大学学报，2023，45（3）：395-400，455甲磺酸加贝酯衍生物的合成及其对蛋白酶活性的抑制孙正扬，闫旭冉，姜军，王凯*湖北大学健康科学与工程学院，湖北 武汉 430062摘要：通过生物电子等排原理，以 6-胍基己酸盐酸盐为起始原料，与含有酚羟基的不同取代苯甲酸乙酯，经过缩合和酸化反应，设计和合成了甲磺酸加贝酯及其衍生物。同时，考察了这些衍生物与胰蛋白酶相互作用，对胰蛋白酶抑制剂活性进行了初步评价，其 TIA 值为 0.931.23 mg/g 之间。结果表明：结构中的胍基和酯基对于抑制蛋白酶的活性至关重要，为后续的甲磺酸加贝酯类药物研究提供改造思路，奠定初步工作基础。关键词：甲磺酸加贝酯衍生物；生物电子等排体；蛋白酶活性抑制剂；合成中图分类号：O626.13文献标识码：ADOI：10.19843/ki.CN42-1779/TQ.202210017Synthesis of Gabeyl Mesylate Derivatives for Protease InhibitionSUN Zhengyang，YAN Xuran，JIANG Jun，WANG Kai*College of Health Science and Engineering，Hubei University，Wuhan 430062，ChinaAbstract：Applying bioisosterism principles and using 6-guanidinohexanoic acid hydrochloride as a startingmaterial，gabexate mesylate and its derivatives were designed and synthesized through condensation andacidification reactions with different substituted ethyl benzoates including phenolic hydroxyl group.At thesame time，the interaction between these derivatives and trypsin was investigated，and the activity of trypsininhibitor was preliminarily evaluated，with their trypsin inhibiting activity values of 0.93-1.23 mg/g.Theresults showed that the guanidine and ester groups in their structure should be crucial for inhibiting the trypsinactivity，which provides a modification approach for subsequent research on gabexate mesylate drugs and laysa preliminary work foundation.Keywords：gabeyl mesylate derivative；bioisosterism；protease activity inhibitor；synthesis图1磺酸加贝酯的化学结构式Fig.1Chemical structure of gabexate sulfonate第45卷第4期2023年8月文章编号：1674-2869（2023）04-0395-06武汉工程大学学报Journal of Wuhan Institute of TechnologyVol.45 No.4Aug.2023武汉工程大学学报第45卷在对甲磺酸加贝酯修饰过程中，采用生物电子等排原理10-13的设计原理。它们之间虽然有着部分类似的性质，但是在结构修饰后，它们的分子性质例如脂溶性或极性可能会发生彻底的变化，引起药物在人体代谢过程的改变14-15。因此，在药物设计之后需要大量的实验研究才能证实药物的安全有效性。1实验部分1.1仪器与试剂4-羟基-3-甲基苯甲酸、4-羟基-3，5-二甲基苯甲酸、香草酸、丁香酸、3，4-二羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、乙酸酐、胰蛋白酶（Adamas 公司）、Tris、L-BAPA（sigma 公司）；浓盐酸、氢氧化钠、冰乙酸、氯化钙（以上试剂均为市售分析纯）。LC-MS TOF 型液质联用仪（美国安捷伦公司）；HGY05 型 400 MHz核磁共振谱仪（Bruker公司）；TU-1901型分光光度计（北京普析公司）；SB-4200DT型超声波清洗剂（宁波新芝生物科技股份有限公司）。1.2甲磺酸加贝酯类似物的合成1.2.1化合物 A的合成将 15.2 g（0.1 mol）4-羟基-3-甲基苯甲酸溶于100 mL乙醇中，向溶液中加入 5 mL 浓硫酸，回流反应 18 h，薄层色谱监控反应，反应结束后，旋除乙醇，向溶液中加入饱和NaHCO3溶液直至无气泡产生。用 20 mL 乙酸乙酯萃取 3 次，再用水洗涤乙酸乙酯层，用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，旋干，得到中间物（1）4-羟基-3-甲基苯甲酸乙酯16.4 g，产率91.2%。在圆底烧瓶中加入 17.3 g（0.1 mol）6-胍基己酸盐酸盐、21.6 g（0.12 mol）4-羟基-3-甲基苯甲酸乙酯（1）和 50 mL N，N-二甲基甲酰胺。搅拌溶解后，加入 26.1 g（0.15 mol）三氟甲磺酸和 20 mL 吡啶，室温反应 8 h。反应结束后，过滤，滤液减压除去N，N-二甲基甲酰胺和未反应完的吡啶。残余物加入50 mL水和50 mL三氯甲烷，充分搅拌之后分去水层，用 15 mL水洗涤三氯甲烷层 3次，将三氯甲烷蒸干，将残余物加入 50 mL 水，搅拌下滴加100 mL 饱和 NaHCO3溶液，析出白色固体，过滤，真空干燥，得到中间产物（2）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）：1.711.79（t，3H，J=7.1Hz），1.791.91（m，2H），1.962.05（m，2H），2.062.19（m，2H），2.98（s，3H），3.133.15（t，2H，J=7.0Hz），3.473.57（m，2H），4.674.81（q，2H，J=7.1Hz），7.66（s，1H），7.68（s，2H），7.757.80（t，1H，J=1.5Hz）。将干燥后的（2）加入 50 mL丙酮，加热至回流温度后滴加 11.5 g（0.12 mol）甲磺酸，固体溶解后继续搅拌 30 min，趁热过滤，将滤液放置冰箱冷却析晶，过滤，将滤饼真空干燥，得到白色晶体化合物A 36.1.g，产率83.6%（见图2）。图2化合物A的合成路线Fig.2Synthetic route of compound A1.2.2化合物 B 的合成将 16.6 g（0.1 mol）4-羟基-3，5-二甲基苯甲酸溶于100 mL乙醇中，向溶液中加入5 mL浓硫酸，回流反应18 h，薄层色谱监控反应，反应结束后，旋除乙醇，向溶液中加入饱和NaHCO3溶液直至无气泡产生。用 20 mL 乙酸乙酯萃取 3 次，再用水洗涤乙酸乙酯层，用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，旋干，得到中间物（3）4-羟基-3，5-二甲基苯甲酸乙酯17.5 g，产率90.5%。在圆底烧瓶中加入 17.3 g（0.1 mol）6-胍基己酸盐酸盐，23.2 g（0.12 mol）4-羟基-3，5-二甲基苯甲酸乙酯（3）和 50 mL四氢呋喃。搅拌溶解后，加入 26.1 g（0.15 mol）三氟甲磺酸和 20 mL 吡啶，室温反应 8 h。反应结束后，过滤，滤液减压除去 N，N-二甲基甲酰胺和未反应完的吡啶。残余物加入50 mL水和50 mL三氯甲烷，充分搅拌之后分去水层，用 15 mL水洗涤三氯甲烷层 3次，将三氯甲烷396第4期蒸干，残余物加入50 mL水，搅拌下滴加100 mL饱和 NaHCO3溶液，析出白色固体，过滤，真空干燥，得到中间产物（4）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）：1.331.40（t，3H，J=6.5Hz），1.421.52（m，2H），1.601.67（m，2H），1.741.79（m，2H），2.092.20（s，6H），2.582.68（m，2H），4.234.35（q，2H，J=7.5Hz），7.70（s，1H），7.76（s，2H）。将干燥后的（4）加入 50 mL丙酮，加热至回流温度后滴加 11.5 g（0.12 mol）甲磺酸，固体溶解后继续搅拌 30 min，趁热过滤，将滤液放置冰箱冷却析晶，过滤，将滤饼真空干燥，得到白色晶体化合物B 37.6 g，产率84.1%（见图3）。1.2.3化合物 C 的合成将 16.8 g（0.1 mol）香草酸溶于 100 mL 乙醇中，向溶液中加入 5 mL 浓硫酸，回流反应 18 h，薄层色谱监控反应，反应结束后，旋除乙醇，向溶液中加入饱和 NaHCO3溶液直至无气泡产生。用20 mL乙酸乙酯萃取3次，再用水洗涤乙酸乙酯层，用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，旋干，得到中间物（5）香草酸乙酯 17.4 g，产率88.7%。在圆底烧瓶中加入 17.3 g（0.1 mol）6-胍基己酸盐酸盐，23.5 g（0.12 mol）香草酸乙酯（5）和50 mLN，N-二甲基甲酰胺。搅拌溶解后，加入 26.1 g（0.15 mol）三氟甲磺酸和 20 mL 吡啶，室温反应8 h。反应结束后，过滤，滤液减压除去 N，N-二甲基甲酰胺和未反应完的吡啶。残余物加入 50 mL水和 50 mL三氯甲烷，充分搅拌之后分去水层，用15 mL 水洗涤三氯甲烷层 3 次，将三氯甲烷蒸干，残余物加入 50 mL 水，搅拌下滴加 100 mL 饱和NaHCO3溶液，析出白色固体，过滤，真空干燥，得到中间产物（6）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）：1.731.79（t，3H，J=7.1Hz），1.801.91（m，2H），1.962.05（m，2H），2.072.18（m，2H），2.953.01（m，3H），3.133.15（m，2H），3.483.57（m，2H），4.664.81（q，2H，J=6.9Hz），7.66（s，1H），7.68（s，1H），7.828.00（m，1H）。将干燥后的（6）加入 50 mL丙酮，加热至回流温度后滴加 11.5 g（0.12 mol）甲磺酸，固体溶解后继续搅拌 30 min，趁热过滤，将滤液放置冰箱冷却析晶，过滤，将滤饼真空干燥，得到白色晶体化合物C 36.8 g，产率82.4%（见图4）。1.2.4化合物 D 的合成将 19.8 g（0.1 mol）丁香酸溶于 100 mL 乙醇中，向溶液中加入 5 mL 浓硫酸，回流反应 18 h，薄层色谱监控反应，反应结束后，旋除乙醇，向溶液中加入饱和 NaHCO3溶液直至无气泡产生。用20 mL乙酸乙酯萃取3次，再用图3化合物B的合成路线Fig.3Synthetic route of compound B图4化合物C的合成路线Fig.4Synthetic route of compound C孙正扬，等：甲磺酸加贝酯衍生物的合成及其对蛋白酶活性的抑制397武汉工程大学学报第45卷水洗涤乙酸乙酯层，用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，旋干，得到中间物（7）丁香酸乙酯 16.7g，产率84.2%。在圆底烧瓶中加入 17.3 g（0.1 mol）6-胍基己酸盐酸盐，23.5 g（0.12 mol）丁香酸乙酯（7）和50 mL N，N-二甲基甲酰胺。搅拌溶解后，加入26.1 g（0.15 mol）三氟甲磺酸和 20 mL 吡啶，室温反应 8 h。反应结束后，过滤，滤液减压除去 N，N-二甲基甲酰胺和未反应完的吡啶。残余物加入50 mL水和50 mL三氯甲烷，充分搅拌之后分去水层，用 15 mL水洗涤三氯甲烷层 3次，将三氯甲烷蒸干，残余物加入50 mL水，搅拌下滴加100 mL饱和 NaHCO3溶液，析出白色固体，过滤，真空干燥，得到中间产物（8）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）：1.741.82（t，3H，J=7.2 Hz），1.831.92（m，2H），1.982.08（m，2H），2.112.20（m，2H），3.133.20（m，2H），3.503.60（m，2H），4.25（s，6H），4.704.82（q，2H，J=7.0Hz），7.70（s，2H），7.73（s，1H）。将干燥后的（8）加入 50 mL丙酮，加热至回流温度后滴加 11.5 g（0.12 mol）甲磺酸，固体溶解后继续搅拌 30 min，趁热过滤，将滤液放置冰箱冷却析晶，过滤，将滤饼真空干燥，得到白色晶体化合物D 40.7 g，产率84.9%（见图5）。1.2.5化合物 E 的合成将 19.8 g（0.1 mol）3，4-二羟基苯甲酸溶于 100 mL乙醇中，向溶液中加入5 mL浓硫酸，回流反应 18 h，薄层色谱监控反应，反 应 结 束 后，旋 除 乙 醇，向 溶 液 中 加 入 饱 和NaHCO3溶液直至无气泡产生。用 20 mL 乙酸乙酯萃取 3 次，再用水洗涤乙酸乙酯层，用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，旋干，得到中间物（9）3，4-二羟基苯甲酸乙酯15.2 g，产率90.5%。在圆底烧瓶中加入 17.3 g（0.1 mol）6-胍基己酸盐酸盐，23.5 g（0.12 mol）3，4-二羟基苯甲酸乙酯（9）和50 mL N，N-二甲基甲酰胺。搅拌溶解后，加入 26.1 g（0.15 mol）三氟甲磺酸和 20 mL 吡啶，室温反应 8 h。反应结束后，过滤，滤液减压除去N，N-二甲基甲酰胺和未反应完的吡啶。残余物加入50 mL水和50 mL三氯甲烷，充分搅拌之后分去水层，用 15 mL水洗涤三氯甲烷层 3次，将三氯甲烷蒸干，残余物加入50 mL水，搅拌下滴加100 mL饱和 NaHCO3溶液，析出白色固体，过滤，真空干燥，得 到 中 间 产 物（10）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）：1.331.39（t，3H，J=6.9 Hz），1.411.49（m，2H），1.561.65（m，2H），1.671.76（m，2H），图5化合物D的合成路线Fig.5Synthetic route of compound D图6化合物E的合成路线Fig.6Synthetic route of compound E398第4期2.542.59（t，2H），3.093.18（q，2H，J=6.5 Hz），4.294.38（q，2H，J=7.1 Hz），7.057.08（d，1H，J=6.7 Hz），7.567.68（m，3H）。将干燥后的（10）加入 50 mL 丙酮，加热至回流温度后滴加 11.5 g（0.12 mol）甲磺酸，固体溶解后继续搅拌 30 min，趁热过滤，将滤液放置冰箱冷却析晶，过滤，将滤饼真空干燥，得到白色晶体化合物E（35.6 g，产率82.1%）（见图6）。1.2.6化合物 F 的合成将 13.1 g（0.1 mol）6-氨基己酸和 18 g（0.3 mol）尿素悬浮在 50 mL DMSO中，在 120 下反应 2 h，之后每隔 30 min 加入3 mL浓盐酸，待反应溶液澄清后再反应 2 h，向溶液中加入 30 mL 浓盐酸，室温过夜，析出大量固体，过滤，用乙醇重结晶，得到白色固体，真空干燥，得到白色固体6-脲基己酸（11）。把 17.4 g（0.1 mol）6-脲 基 己 酸（11）、19.9 g（0.12 mol）对羟基苯甲酸乙酯和 50 mL N，N-二甲基甲酰胺搅拌溶解后，加入 26.1 g（0.15 mol）三氟甲磺酸和20 mL吡啶，室温反应8 h。反应结束后，过滤，滤液减压除去 N，N-二甲基甲酰胺和未反应完的吡啶。残余物加入 50 mL水和 50 mL三氯甲烷，充分搅拌之后分去水层，用 15 mL水洗涤三氯甲烷层 3 次，将三氯甲烷蒸干，残余物加入 50mL 水，搅拌下滴加 100 mL 饱和 NaHCO3溶液，析出 白 色 固 体，过 滤，真 空 干 燥，得 到 化 合 物 F24.7 g，产率 72.6%。1H NMR（400 MHz，CDCl3）：1.331.40（t，3H，J=6.9 Hz），1.411.51（m，2H），1.581.67（m，2H），1.701.78（m，2H），2.532.63（m，2H），3.043.18（q，2H，J=7.4 Hz），4.324.41（q，2H，J=7.1 Hz），7.057.15（d，2H，J=0.4 Hz），7.587.60（m，1H），8.018.08（d，2H，J=2.2 Hz）（见图7）。图7化合物F的合成路线Fig.7Synthetic route of compound F1.3活性测试1.3.1溶液配制（1）6 mol/L盐酸溶液：取50 mL12 mol/L浓盐酸加到 50 mL水中，冷却至室温，定容到 100 mL。（2）1 mol/L 盐酸溶液：取 83 mL12 mol/L浓盐酸加到500 mL水中，冷却至室温，定容到 1 000 mL。（3）0.1 mol/L盐酸溶液：取 8.3 mL12 mol/L浓盐酸加到500 mL水中，冷却至室温，定容 到 1 000 mL。（4）0.001 mol/L 盐 酸 溶 液：取1 mL 1 mol/L盐酸（2）加到500 mL水中，冷却至室温，定容到 1 000 mL。（5）5.3 mol/L 乙酸溶液：取30 mL 冰乙酸加到 50 mL 水中，定容至 100 mL。（6）0.01 mol/L NaOH溶液：称取4.0 g NaOH，溶于500 mL 水中，定容至 1 000 mL。（7）CaCl2盐酸溶液：称取 0.735 g CaCl2溶于 1 L 0.001 mol/L盐酸溶液（4）中，调节 pH=3.0 0.1。（8）胰蛋白酶溶液：称取 27.0 mg 胰蛋白酶，用 CaCl2盐酸溶液溶解（7），定容至100 mL。（9）胰蛋白酶使用液：取5 mL胰蛋白酶溶液（8），用 CaCl2盐酸溶液（7）稀释至100 mL。（10）Tris-CaCl2缓冲溶液：称取 6.05 Tris和 0.735 CaCl2溶于水中，用 6 mol/L 盐酸溶液（1）调节 pH=（8.20.1），加水稀释定容至 1 000 mL。（11）L-BAPA 试剂：称取 60 mg L-BAPA，用 1 mL二甲亚砜溶解，用 Tris-CaCl2缓冲溶液（10）稀释定容至100 mL。1.3.2样品制备（1）称取 1.0 g 甲磺酸加贝酯（或其类似物），加入 50 mL 0.01 mol/L NaOH溶液（6），将试液充分搅拌，用 1 mol/L 盐酸溶液调节pH=9.5 0.1，放在冰箱中冷却 1524 h。（2）将试液转移至 100 mL 容量瓶中，定容至 100 mL，放入冰箱中冷却保存。（3）在标准管和空白管中各加入1 mL胰蛋白酶使用液，用超声机将溶液混匀，将试管置于水浴中，保温10 min，在标准管中加入1 mL乙酸溶液，将其混匀。（4）将标准管和空白管用离心机离心10 min。（5）用分光光度计测定上清液的吸光度，在410 nm吸收处，以水调零。1.3.3活性测定按照表 1吸取一定量的溶液加入离心管中。用超声机混匀各溶液，然后置于 37 水浴下控温10 min。在上述溶液中各加入 1 mL 胰蛋白酶使用液孙正扬，等：甲磺酸加贝酯衍生物的合成及其对蛋白酶活性的抑制399武汉工程大学学报第45卷（9），用超声机混匀后置于37 水浴下控温10 min后将离心管离心 10 min。用分光光度计测定上清液的吸光度，在410 nm吸收处用10 nm比色皿，用水调节零点，测定上清液的吸光度。1.3.4计算结果（1）胰蛋白酶抑制百分比计算将 4个样品测得的吸光度带入下列公式得到样品抑制百分比。i=(Ar-Abr)-(As-Abs)(Ar-Abr)100%其中，i 为抑制百分比，Ar为标准溶液吸光度，Abr为空白标准溶液吸光度，As为样品溶液吸光度，Abs为空白样品溶液吸光度。（2）胰蛋白酶抑制剂活性计算将计算所得的抑制百分比 i带入下列计算式得到胰蛋白酶抑制剂活性。TIA=i100%m1f1f2m0其中，TIA为胰蛋白酶抑制剂活性（mg/g），m0为样品质量（g），m1为胰蛋白酶质量（mg），f1为样品的稀释度 100 mL100 mL/F，F 为理论稀释度，每100 g的体积（mL），f2为换算系数，2.810-4。2结果与讨论2.1测定结果将甲磺酸加贝酯及其类似物按照以上方法进行测试，获得数据如表2所示。表2不同样品对TIA值的影响Tab.2Effects of different samples on TIA values加入样品ABCDEF吸光度空白样品0.415 30.470 80.373 50.397 10.287 20.363 3样品0.247 40.315 70.218 20.234 70.112 60.153 6抑制百分比/%55.3758.7758.7256.8353.5944.26TIA1.161.231.231.191.130.932.2重复性测定在相同实验室，由同一实验人员，在相同天气条件下，用相同实验方法对相同样品所做出的相同独立实验，测出 TIA 值。总实验次数为 5次，将所得结果证明其重复性，结果如表3所示。表3重复性实验Tab.3Repetitive experiment样品ABCDEFTIA值11.161.231.231.191.130.9321.161.231.231.211.130.9331.161.231.231.201.110.9341.171.211.231.191.130.9251.161.221.231.181.130.93标准差0.0040.0090.0000.0110.0090.004由表3数据可以看出，甲磺酸加贝酯和甲磺酸加贝酯类似物对蛋白酶都有一定的抑制作用，抑制效果区别不明显，其中将胍基替换为脲基的化合物 F的 TIA 值最低，由此猜测，该抑制蛋白酶的活性基团为胍基和酯基，虽然脲基与胍基有相似的生物活性，但脲基的作用效果不如胍基。因此，有望对该类型化合物进行进一步研究，合成更多结构类似的化合物，以寻找对胰蛋白酶抑制效果更优异的产品，能对治疗急性胰腺炎研发出更有效的药品。3结论急性胰腺炎的药物治疗一直是国际关注的热点，合成活性更高，更安全，效果更好的药物一直是研究热点。甲磺酸加贝酯的合成与应用已经趋于成熟，但对其类似物的研究仍处于空白。本文通过生物电子等排原理设计一系列化合物，寻找效果更优秀的化合物，为攻克急性胰腺炎寻找一条可行路径。对甲磺酸加贝酯和加贝酯类似物进行蛋白酶抑制活性研究，结果显示其均有一定的蛋白酶抑制活性，并且该实验有较高的重复性。猜测其对胰蛋白酶抑制作用基团为胍基和酯基，与胍基有类似生物活性的基团也有一定的效果，因此，对该基团进行进一步研究分析可能对胰蛋白酶的作用机理和急性胰腺炎的致病因素有更深入的理解，在该研究的基础之上能获得更广泛的研究。参考文献1 SIMONET G，ClAEYS I，BROECK J V.Structuraland functional properties of a novel serine protease表1溶剂加入量Tab.1Amount of solvent added试剂类型L-BAPA试剂水5.3 mol/L乙酸溶液试样加入量/mL空白标准5310标准5300空白样品5211样品5201（下转第455页）400第4期7 SHAN T J，KAILATH T.Adaptive beamforming forcoherentsignalsandinterference J.IEEETransactions on Acoustics，Speech，and Signal Process-ing，1985，33（3）：527-536.8 SHAN T J，WAXM，KAILATH T.On spatialsmoothingfordirection-of-arrivalestimationofcoherent signals J.IEEE Transactions on Acoustics，Speech，and Signal Processing，1985，33（4）：806-811.9 WILLIAMS R T，PRASAD S，MAHALANABIS A K，et al.An improved spatial smoothing technique forbearing estimation in a multipath environmentJ.IEEE Transactions on Acoustics，Speech，and SignalProcessing，1988，36（4）：425-432.10张辰锐，王剑书，雷涛.一种准平稳相干信号的DOA 估计算法J.计算机应用与软件，2018，35（7）：76-80.11 蔡晶晶，宗汝，蔡辉.基于空域平滑稀疏重构的DOA 估计算法 J.电子与信息学报，2016，38（1）：168-173.12 石要武，陈淼，单泽涛，等.基于特征空间 MUSIC 算法的相干信号波达方向空间平滑估计 J.吉林大学学报（工学版），2017，47（1）：268-273.13DU W X，KIRLIN R L.Improved spatial smoothingtechniques for DOA estimation of coherent signalsJ.IEEE Transactions on Signal Processing，1991，39（5）：1208-1210.14 董玫，张守宏，吴向东，等.一种改进的空间平滑算法 J.电子与信息学报，2008，30（4）：859-862.15 陈文锋，吴桂清.基于空间平滑 MUSIC算法的相干信号 DOA 估计 J.计算机应用与软件，2017，34（11）：232-235，283.16 孙志国，柏乔森，白永珍，等.基于虚拟阵列扩展的改进加权空间平滑算法 J.系统工程与电子技术，2023，45（1）：250-256.17 胡爽，黄鹏，蒋凯，等.基于TLS-ESPRIT的改进空间平滑相干信号 DOA 估计算法 J.智能计算机与应用，2023，13（1）：208-212.18 PAN J J，SUN M，WANG Y D，et al.An enhancedspatial smoothing technique with ESPRIT algorithmfordirectionofarrivalestimationincoherentscenariosJ.IEEE Transactions on Signal Process-ing，2020，68：3635-3643.本文编辑：游雯inhibitingpeptidefamilyinarthropods J.Comparative Biochemistry and Physiology Part B：Biochemistry and Molecular Biology，2002，132（1）：247-255.2 PEYERSEN O H.Ca2+-induced pancreatic cell death：rolesoftheendoplasmicreticulum，zymogengranules，lysosomes and endosomesJ.Gastroen-terology and Hepatology，2008，23（suppl.1）：31-36.3SENDLER M，WEISS F U，GOLCHERT J，et al.Cathepsin B-mediated activeation of trypsinogen inedcocytosingmacrophagesincreaseseverityofpancreatitis in miceJ.Gastroenterology，2018，154（3）：704-718.4GERASIMENKO J V，LUR G，SHERWOOD M W，etal.Pancreaticproteaseactivationbyalcoholmetabolite depends on Ca2+release via acid store IP3receptors J.Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America，2009，106（26）：10758-10763.5 曾文俊，吕彩梦，丁健宝，等.体外抗氧化活性评价方法的反应机理研究进展 J.化学与生物工程，2022，39（12）：13-19.6HASAN A，MOSCOSO D I，KASTRINOS F.Therole of genetics in pancreatitisJ.GastrointestinalEndoscopy Clincs of North America，2018，28（4）：587-603.7 王凯，邓艳丽，葛燕丽，等.2-氨基-4-甲氧基嘧啶的合成改进 J.武汉工程大学学报，2009，31（7）：16-17.8 关云艳，吴海荣，欧希龙.甲磺酸加贝酯药理作用的分子机制及应用概况 J.中国药房，2010，21（9）：851-853.9 国家药典委员会.中国药典 M.北京：中国医药科技出版社，2020：268.10 仇缀百.药物设计学 M.北京：高等教育出版社，1999：91-104.11 刘长令.生物电子等排及其在新农药创制中的应用J.农药，1998，37（2）：1-7.12 赵国锋，杨华铮.药物设计中的生物等排取代与先导化合物的展开 J.化学通报，1995（6）：34-38.13 崔永梅，南发俊.生物电子等排原理在药物先导化合物优化中的应用J.生命科学，2006，18（2）：161-167.14 何书典，杨远征，庄桂凤，等.连续性血液净化联合甲磺酸加贝酯对重症急性胰腺炎的治疗效果及作用机制 J.山东医药，2017，57（48）：84-86.15 王维国.连续性血液净化联合甲磺酸加贝酯对重症急性胰腺炎的治疗效果与安全性影响 J.当代医学，2021，27（4）：42-44.本文编辑：张瑞（上接第400页）秦毅，等：基于空间平滑算法的改进多重信号分类算法455