硅磁微球的制备及其在植物核酸分离纯化中的应用.pdf

山东农业大学学报(自然科学版),2023,54(3):378-384VOL.54 NO.3 2023Journal of ShandongAgricultural University(Natural Science Edition)doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2023.03.007硅磁微球的制备及其在植物核酸分离纯化中的应用硅磁微球的制备及其在植物核酸分离纯化中的应用刘 涛1,张 宇2,王丽娜1*1.东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室,黑龙江 哈尔滨 1500402.哈尔滨商业大学法学院,黑龙江 哈尔滨 150028摘摘 要要:本文采用改进的共沉淀方法制备 Fe3O4纳米粒子，并利用表面活性剂柠檬酸对其表面改性；然后利用溶胶凝胶法，催化 TEOS 水解和缩合反应，使 SiO2包裹在 Fe3O4纳米粒子表面，成功制备出了 Fe3O4SiO2复合纳米粒子。结果表明，Fe3O4SiO2复合纳米粒子粒径在 200-400 nm 之间，粒径均匀，具有超顺磁性，磁响应时间在 10-20 s，半沉降时间在 20 min。根据高盐吸附低盐洗脱原理，建立了一种以磁性微球为载体的核酸快速提取和纯化方法。在白桦基因组 DNA 提取中，OD260/OD280均在 1.8 左右，OD260/OD230均在 2.0 以上，提取的质量和浓度比传统方法要好。在白桦 RNA 提取过程中，OD260/OD280和 OD260/OD230均在 2.0 以上，提取的 RNA 浓度要比传统方法更高。磁珠法与传统方法比较时，核酸提取纯化效果上更佳，提取速度快、安全、成本低，具有很高的推广价值。关键词关键词:硅磁微球;植物核酸;分离纯化中图中图法法分类号分类号:Q943.2/TB383文献标识码文献标识码:A文章编号文章编号:1000-2324(2023)03-0378-07Preparation of Silicon Magnetic Microspheres and Its Applicationin Nucleic Acid ExtractionLIU Tao1,ZHANG Yu2,WANG Li-na1*1.State Key Laboratory of Forest Genetics and Breeding,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China2.College of Law/Harbin University of Commerce,Harbin 150028,ChinaAbstract:Fe3O4SiO2composite nanoparticles were successfully prepared by using a modified co-precipitation method toprepare Fe3O4nanoparticles and using the surfactant citric acid to modify their surface;then using the sol-gel method tocatalyze the TEOS hydrolysis and condensation reaction to wrap SiO2on the surface of Fe3O4nanoparticles.The resultsshowed that the Fe3O4SiO2composite nanoparticles were in the range of 200-400 nm with uniform particle size,superparamagnetic,magnetic response time in the range of 10-20 s,and semi-sedimentation time in the range of 20 min.Based on the principle of high salt adsorption and low salt elution,a rapid extraction and purification method of nucleic acidsusing magnetic microspheres as carriers was established.In the extraction of Betula platyphylla genomic DNA,OD260/OD280were all around 1.8 and OD260/OD230were all above 2.0,and the quality and concentration of extraction were better than thetraditional method.In the Betula platyphylla RNA extraction,OD260/OD280and OD260/OD230were both above 2.0,and theextracted RNA concentration was higher than that of the traditional method.When the magnetic bead method was comparedwith the traditional method,the nucleic acid extraction and purification was better,and the extraction was fast,safe and lowcost,which has high promotion value.Keywords:Silicon Magnetic Microspheres;plant nucleic acid;separation and purification磁珠是一种纳米或微米粒径大小的、具有超顺磁性的颗粒1。所谓超顺磁性简单说就是在有外磁场时会呈现出弱磁性，撤去磁场后没有剩磁。Fe3O4纳米颗粒以其独特的化学和磁学稳定性，较小的生物毒性，作为实验室磁珠的首选材料。但 Fe3O4纳米颗粒在现实生物医学条件下，不能应用2。这种磁珠表面积大，在磁偶极相互作用下会磁珠发生团聚效果，易于团聚，并且易于氧化，化学性质不稳定3；并且不易于生物大分子相互结合，这些无机粒子很难与生物大分子结合，生物相容性差；Fe3O4纳米颗粒具有各种局限性，所以，在生物分子实验中 Fe3O4纳米颗粒的使用不广泛。这就需要人们将磁珠进行表面修饰。经过表面修饰的磁珠，生物相容性好，易于和生物大分子进行良好的结合4。复合磁珠通常由基质、磁性物质（四氧化三铁）、有官能团修饰的高分子材料组成5。SiO2是被认为理想的包裹材料6，Fe3O4SiO2可以克服了 Fe3O4易于氧化的问题，并且也能够有效解决收稿日期收稿日期:2022-12-05修回日期修回日期:2023-02-03基金项目基金项目:国家自然基金青年项目:杨树 PtPEPCK1 调控碳氮平衡的分子机理研究(31800565)第第 1 作者简介作者简介:刘 涛(1997-),男,硕士研究生,主要从事林木遗传育种研究.E-mail:*通讯作者通讯作者:Author for correspondence.E-mail:wanglina_第 3 期刘 涛等:硅磁微球的制备及其在植物核酸分离纯化中的应用379Fe3O4的磁偶极的相互作用7，化学性质稳定，不轻易与溶剂发生反应；并且其表面易于被修饰，可以更好地与生物大分子相结合，提高了纳米磁珠的生物相容性。磁珠纯化核酸的原理一般是固相可逆固定技术8，在一定条件下核酸被选择性地固定在磁珠上，而污染物则留在溶液中，在外加磁场后，将吸附核酸分子的磁珠与原溶液相互分离，然后清洗磁珠进一步去除污染物，之后将核酸分子从磁珠上分离出来。对于不同官能团修饰的磁珠，结合与洗脱方式不同9。其中磁珠外表面修饰的是羧基官能团的磁珠，利用含有 PEG、高盐离子等纯化缓冲体系中10，通过形成核酸-盐离子-羧基的离子桥而吸附核酸，这种结合是可逆的，在无 PEG 和盐离子的 TE Buffer 中离子桥被解除11，最终达到纯化核酸的目的12。本文首先自制了 Fe3O4纳米磁珠，利用溶胶-凝胶法使 SiO2包裹在 Fe3O4表面，成功制备出了Fe3O4SiO2，利用 Fe3O4SiO2纳米磁珠的吸附性质对植物组织核酸进行快速提取和纯化，为构建基于 Fe3O4SiO2纳米磁珠提取和纯化的遗传信息高效获取系统打下坚实的基础，主要流程见图 1。图图 1 Fe3O4SiO2磁性微球制备和提取磁性微球制备和提取 DNA 实验流程实验流程Fig.1 Preparation process of Fe3O4SiO2magnetic microspheres and extract nucleic acid1实验方法实验方法1.1试剂与仪器试剂与仪器白桦叶片是由东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室保存。试剂：FeCl36H2O、FeCl24H2O、氨水、柠檬酸、Triton-100、EDTA、无水乙酸钠、TEOS、-巯基乙醇、Tris、无水乙醇、盐酸胍、浓盐酸、SDS 等均为分析纯。仪器：分析天平（北京赛多利斯有限公司）、紫外分光光度计（上海尤尼柯公司）、高速离心机（德国艾本德公司）、JCM 5000 电子显微镜（日本尼康 NIKON 公司）、微型水平电泳槽（北京六一仪器厂）、GBS-7500 PC 凝胶成像系统（美国 UVP 公司）。裂解液：盐酸胍（浓度为 5 mol/L），Tris-HCl（浓度为 10 mmol/L），0.5%-巯基乙醇，0.1%SDS，0.5%Triton-100，EDTA（浓度为 800 mmol/L），柠檬酸（浓度为 200 mmol/L），裂解液 pH=6。洗涤液：75%乙醇。洗脱液：EDTA（浓度为 1 mmol/L），Tris-HCl（浓度 50 mmol/L），洗脱液 pH=8.0。1.2Fe3O4SiO2纳米磁珠的制备和修饰纳米磁珠的制备和修饰利用改进的共沉淀法制备 Fe3O4纳米粒子，将 FeCl24H2O 和 FeCl36H2O 按照一定摩尔比（1:2）溶于水中并将混合加入到三角瓶中；水浴恒温 90，在氮气保护下加入过量氨水，同时剧烈搅拌，转速为 800 rpm，维持 pH 为 11 左右，保持反应 2-3 h，加入 0.5 g 柠檬酸，生成大量的黑色 Fe3O4380山东农业大学学报(自然科学版)第 54 卷纳米粒子。将得到的 Fe3O4纳米粒子用无水乙醇和去离子水交替洗涤，直到洗至中性 pH=7。将 Fe3O4纳米粒子溶于 50 mL 水中，机械搅拌 30 min，得到稳定的、分散的水基磁流体。通过溶胶-凝胶法制备 Fe3O4SiO2纳米磁珠，20 mL Fe3O4磁流体倒入三角瓶中，加入过量氨水，调节 pH 到 11，将 10 mL TEOS 和 10 mL 无水乙醇混合，滴加到三角瓶中，继续反应和搅拌 6 h。将产物分别经离子水和无水乙醇交替洗涤，直到洗至中性，经真空干燥后，得到 Fe3O4SiO2纳米磁珠。将得到的 Fe3O4SiO2纳米磁珠用蔡司场发射扫描电子显微镜进行观察，观察纳米磁珠的表面特征。利用德国布鲁克公司生产的 BRUKER TENSOR 27 傅里叶红外光谱仪对样品进行红外光谱分析。将待测样品真空干燥，取适量样品和 KBr 一起研磨、压片；待测样品中的官能团或化学键在光谱仪下对特定频率红外光的吸收及导致的分子跃迁进行表征，对表面功能化前后的磁性纳米粒子的表面包覆进行定性分析。分析纳米磁珠中是否存在 Fe3O4和 SiO2。1.3提取白桦叶片提取白桦叶片 DNA传统法：CTAB 法提取白桦叶片 DNA13。磁珠法：将白桦叶片放入研钵中，加入过量液氮，保证液氮不被快速挥发，迅速研磨成粉末状；将粉末装到 5 mL 离心管中，依次加入 700 L 裂解液和 30 L 磁珠工作液，吸打均匀后在室温下静置 10 min，使细胞完全裂解；磁分离，弃掉上清液，加入 800 L 洗涤液，静置 5 min，弃掉上清液，重复洗涤步骤一次；往 5 mL 离心管中加入 50-100 L 洗脱液，室温静置 10 min 后，磁分离后吸取上清液，分装到新的离心管中，即得提取白桦基因组 DNA。1.4提取白桦叶片提取白桦叶片 RNA传统法：CTAB 法提取白桦叶片 RNA14。磁珠法：取白桦叶片 2 g 放入研钵中，加入过量液氮，研磨成粉末状。往粉末加入 1 mL 裂解液，充分混匀后静置 10 min，使叶片充分裂解；在 12 000 rpm，4 条件下离心 10 min；小心吸取上清液，不要吸取沉淀，转移到新的 2 mL 离心管中得样本 RNA 液。磁珠吸附：往离心管中加入 25 L的磁珠工作液，在室温条件下静置 5 min，放置在磁力架上 3 min 进行磁分离，直到溶液变清；吸弃上清液，不触动磁珠。洗涤：向离心管加入 1 mL 洗涤液，颠倒 20 次混合均匀，磁力架上约 30 s，吸弃上清液，不触动磁珠；重复洗涤 1 次；开盖，让磁珠空气干燥 2 min；向离心中的磁珠加 80 LRNasefree dd H2O，缓慢吸打悬浮磁珠，放置在磁力架上约 2 min，直到溶液变清；-80 保存备用。利用电泳缓冲液和 1%琼脂糖凝胶，与提取的待测 RNA 液进行电泳，电泳完成后取出琼脂糖凝胶，放置在紫外灯下观察，利用凝胶成像系统观察电泳条带，并拍照保存。2结果结果与分析与分析2.1硅磁微球的制备及其表面修饰硅磁微球的制备及其表面修饰制备好的磁性纳米 Fe3O4粒子通常悬浮于载体溶液中，以磁流体形式存在。Fe3O4纳米粒子之间存在磁偶极相互作用，很容易出现团聚，接触空气后很容易发生氧化反应并且生物相容性差。为了改变纳米颗粒的生物相容性，对其进行表面修饰，实验室加入表面活性剂柠檬酸和 TEOS 进行改性，其修饰原理见图 2。表面活性剂柠檬酸分子会包裹在磁性纳米 Fe3O4粒子表面，会在纳米粒子表面形成一层吸附膜把整个纳米粒包裹起来，使磁性纳米 Fe3O4粒子表面吸附离子而带电荷，使其表面具有负电荷，被修饰的磁性纳米 Fe3O4粒子间因静电排斥作用而非常稳定的分散在溶液中，不易团聚，这起到了稳定分散的作用。以 TEOS 为反应硅源，在磁性纳米 Fe3O4粒子表面形成外壳包覆层。这个过程主要经历两个阶段，在碱性环境的催化下，TEOS 发生水解，OH-可以攻击 TEOS 中的 Si 原子进而完成水解反应；随着水解反应的不断进行，Si 原子的正电荷增加，并且空间效应更为有利，从而促使 TEOS 的水解反应产生更多的 Si-OH 基团，形成数量很多的 Si(OH)4；第二阶段是 SiO2在 Fe3O4纳米颗粒表面包第 3 期刘 涛等:硅磁微球的制备及其在植物核酸分离纯化中的应用381裹和生长，Si(OH)4具有很强的反应活性，Fe3O4纳米颗粒可以迅速 Si(OH)4吸附到表面，降低了原溶液的界面能。随着 TEOS 不断被水解，Si(OH)4数量增多，不断在 Fe3O4纳米颗粒表面聚集生长，Fe3O4SiO2纳米磁珠表面硅壳厚度逐渐增大。改进共沉淀法和溶胶-凝胶法制备的 Fe3O4SiO2纳米磁珠的分析表征结果如下。（1）磁响应实验表明，磁响应时间在 10-20 s，当存在外加磁场时，制备的 Fe3O4SiO2纳米磁珠会移至外加磁场一侧，并且上清液无残留杂质。半沉降系数：半沉降时间 20 min，磁珠只需轻轻摇晃即可快速混匀。（2）Fe3O4SiO2纳米磁珠的 SEM 形貌见图 3A。SiO2包裹在 Fe3O4外面，纳米磁珠大部分呈球形，颗粒大小在 200-400 nm。（3）通过傅里叶红外光谱仪来分析和鉴定样品，来鉴定 SiO2是否成功包裹在 Fe3O4的表面。通过图 3C 可知，在图谱中显示样品在 592.50 cm-1处是 Fe3O4的特征吸收峰，表明样品中存在 Fe3O4；在 3 386.42 cm-1和 1 622.24 cm-1处的出现-OH 特征吸收峰。Fe3O4SiO2纳米磁珠谱图中出了 Si-O-Si的强反对称伸缩振动峰，说明 Fe3O4SiO2纳米磁珠组分构成没有发生改变，复合样品中存在 SiO2。结论：说明利用改进共沉淀法和溶胶-凝胶法制备的 Fe3O4SiO2纳米磁珠水溶液呈棕褐色，粒径均一，具有良好的分散性，在外界磁场作用下具有很强的磁响应性。图图 2 Fe3O4SiO2纳米磁珠制备流程纳米磁珠制备流程Fig.2 Preparation process of Fe3O4SiO2nanomagnetic beads382山东农业大学学报(自然科学版)第 54 卷A：SEM 图；B：显微镜图；C：XRD 图A:SEM image;B:microscope image;C:XRD image图图 3 Fe3O4SiO2纳米磁珠表征纳米磁珠表征Fig.3 Characterization of Fe3O4SiO2nano-magnetic beads2.2提取白桦核酸结果分析提取白桦核酸结果分析2.2.1 硅磁微球调取核酸原理解析 核酸作为生物大分子，由于静电相互作用、范德华力和氢键三种非共价相互作用力，核酸能够在水溶液中稳定、分散和没有沉淀。核酸分子中含有大量的磷酸基团，使其核酸分子表面带有负电荷，使其核酸分子间互相排斥从而避免核酸分子发生团聚。并且核酸分子在溶液中通过范德华力与氢键结合了大量的水分子，使其在核酸分子表面形成一个水化层，这样阻止了核酸分子间的聚集。因此，利用磁珠法提取核酸，需要先削弱这三种非共价相互作用力，屏蔽溶液中的静电力，并且会破坏核酸分子表面的水化层，使微球与核酸分子相互接触，核酸分子接触到微球表面，进而相互吸附，与硅磁微球表面的功能基团相互作用进而形成复合物。利用硅磁微球提取核酸时，通常需要高浓度的盐离子环境。高浓度盐离子环境能够屏蔽溶液中的静电斥力。同时，高浓度的盐离子环境还能竞争性地与硅磁微球表面以及核酸分子相结合，破坏二者表面原有的水化层，通过范德华力和氢键，可以促进硅磁微球表面与核酸分子间的吸附，形成特殊的复合物。在外加磁场的作用下，可以将这些复合物从原溶液中分离出来，经洗涤后去除多余的杂质，再在一定条件下将核酸从硅磁微球表面洗脱分离下来，从而实现对核酸的快速提取。图图 4 硅磁微球提取核酸原理图硅磁微球提取核酸原理图Fig.4 Schematic diagram of nucleic acid extraction by silicon magnetic microspheres2.2.2 不同方法提取白桦 DNA 结果 取 5 L 白桦 DNA 进行凝胶电泳检测，从图 5A 中所示，1、2是磁珠法，3、4 是传统方法提取的白桦 DNA 电泳结果图。通过凝胶电泳结果显示，磁珠法和传统方法提取的白桦 DNA 电泳条带清晰，无拖尾现象，亮度基本相似。说明提取的白桦 DNA 电泳条带清晰，几乎没有蛋白质、多糖等杂质存在，质量符合生物分子实验下游实验操作。第 3 期刘 涛等:硅磁微球的制备及其在植物核酸分离纯化中的应用383根据表1显示，磁珠法提取的DNA浓度都在0.5 g/L以上，OD260/OD280在1.80以上，OD260/OD230在 2.00 以上，表明磁珠法提取的 DNA 纯度很高，质量很好，基因组 DNA 的产率很高，杂质较少，没有 RNA 污染。传统方法提取的 DNA 浓度在 0.401 g/L，提取的 DNA OD260/OD280在 2.01，OD260/OD230在 1.99，提取 DNA 的纯度不是很高。总结磁珠法提取的植物 DNA 浓度、质量，所需时间长短要比传统方法要好，更加符合要求生物分子实验要求。A：白桦叶片基因组 DNA 的电泳结果图（1、2 是磁珠法，3、4 是传统方法）；B：白桦叶片基因组 RNA 的电泳结果图（1、2 是磁珠法，3、4 是传统方法）；M：DL 2000 MarkerA:Electrophoresis results of Betula platyphylla leaf genomic DNA(1,2 are magnetic bead method,3,4 are traditional methods);B:Electrophoresis results of Betula platyphylla leaf genomic RNA(1,2 are magnetic bead method,3,4 are traditional method);M：DL 2000 Marker图图 5 Fe3O4SiO2纳米磁珠核酸提取结果图纳米磁珠核酸提取结果图Fig.5 Fe3O4SiO2nano-magnetic beads nucleic acid extraction results表表 1 磁珠法和传统方法提取白桦基因组磁珠法和传统方法提取白桦基因组 DNA 效果比较效果比较Table1ComparisonofextractioneffectofBetulaplatyphyllagenomicDNAbymagneticbeadmethodandtraditionalmethod方法Method平均 DNA 浓度Average DNAconcentrationOD260/OD280OD260/OD230时间Time磁珠法0.634 g/L1.852.091 h0.712 g/L1.902.051 h0.695 g/L1.882.001 h传统方法0.401 g/L2.011.9912 h0.395 g/L2.061.9612 h0.386 g/L1.981.9112 h2.2.3 不同方法提取白桦 RNA 结果 取 5 L 白桦 RNA 进行凝胶电泳检测，从图 5B 中所示，1、2 是磁珠法，3、4 是传统方法提取的白桦 RNA 电泳结果图。通过凝胶电泳结果显示，磁珠法和传统方法提取的白桦 RNA 电泳条带清晰，亮度基本相似，提取的白桦 RNA 条带清晰透亮，无明显的拖尾现象，说明 RNA 的完整性很好。根据表 2 所示，所提取的 RNA 紫外线吸光值所得，磁珠法提取的平均 RNA 浓度 0.598 g/L，OD260/OD280以及 OD260/OD230均在 2.0 之上，符合相关的数值指标要求，说明磁珠法提取的 RNA 在保证质量的同时，没有多糖、蛋白质、酚类物质的污染，且效率更快。传统方法提取的 RNA 平均浓度 0.562 g/L，OD260/OD280以及 OD260/OD230均在 2.0 之下。表表 2 磁珠法和传统方法提取白桦基因组磁珠法和传统方法提取白桦基因组 RNA 效果比较效果比较Table2ComparisonofextractioneffectofBetulaplatyphyllagenomeRNAbymagneticbeadmethodandtraditionalmethod方法Method平均 RNA 浓度Average RNAconcentrationOD260/OD280OD260/OD230时间长短Time磁珠法0.598 g/L2.102.191 h传统方法0.572 g/L1.821.9012 h3讨讨 论论通过研究发现，磁珠法提取植物核酸的质量、效率、浓度等指标都比传统方法要好，提取的核酸，对于用于生物分子下游实验的样品来使用，磁珠法获得的核酸质量要比传统方法要好。在高浓384山东农业大学学报(自然科学版)第 54 卷度盐离子溶液和低 pH 值的溶液的条件下，核酸的磷酸基团就会吸附到 Fe3O4SiO2纳米磁珠的表面，然后又在低浓度盐离子溶液和高 pH 溶液的的条件下，核酸分子被从 Fe3O4SiO2纳米磁珠洗脱下来。这个步骤简单和高效，所需时间很短，并且由于不涉及有毒试剂以及不需要复杂的实验条件，可以大规模提取和利用。这不仅保护实验人员，更符合环境标准，降低了时间和成本。传统的核酸分离及纯化方法为柱层析、酚氯仿抽提法等方法，这些方法均采用有毒试剂，增加了实验的危险性。利用磁珠提取植物核酸的方法有效提高效率、缩短实验时间，为后续的分子生物学实验提供了样本和理论，降低手工操作带来的污染及误差并且成本低。磁珠法提取植物核酸的质量、效率、浓度等指标都比传统方法要好，提取的核酸，对于用于生物分子下游实验的样品来使用，磁珠法获得的核酸质量要比传统方法要好。4结结 论论（1）采用改进的共沉淀法制备了 Fe3O4纳米粒子，利用表面活性剂柠檬酸进行修饰，并采用溶胶-凝胶法使 TEOS 在氨水条件下分解，使 SiO2成功包裹在 Fe3O4纳米粒子表面，制备 Fe3O4SiO2纳米磁珠，纳米磁珠呈球形，分散性较好，粒径在 200-400 nm 之间，可以作为一种新型磁性多功能吸附材料，在核酸提取和蛋白质等生物分子领域有着广阔的前景；（2）用自制的 Fe3O4SiO2纳米磁珠提取植物的 DNA 和 RNA，实验室针对提取核酸的不同，均采用相应不同的盐离子浓度试剂，不同温度、pH 等条件对磁珠进行收集、释放、转移、洗脱，进而完成整个核酸的提取过程。研究发现使用磁珠法提取的植物 DNA 和 RNA 纯度高、浓度高，多糖、蛋白质和酚类物质等含量少。相对于传统方法，磁珠法不涉及酚、氯仿等有毒试剂，安全无毒无害，操作简单，而且提取的 DNA、RNA 质量比较好；（3）随着“后基因组时代”的来临，磁珠法已广泛应用于核酸提取。以前一些传统的核酸提取方法，例如：碱裂解法、CTAB 法等，因操作繁琐、不易于实现自动化实验仪器操作、提取效率低且质量差、费时费力或大量使用有毒的化学试剂造成实验人员危险等原因，已不适应现在生物分子技术的发展要求。随着生物分子实验技术的进步，磁珠法提取核酸简便、安全、高效、成本低且适用于自动化仪器操作，从而更快地推动分子生物学的发展。参考文献参考文献1朱海燕.Fe3O4/SiO2复合材料的制备及其对染料吸附性能研究J.化学研究与应用,2022,34(7):1649-16542Li G,Shen B,He N,et al.Synthesis and characterization of Fe3O4SiO2core-shell magnetic microspheres for extraction ofgenomicDNAfromhumanwholebloodJ.JournalofNanoscience&Nanotechnology,2011,11(12):10295-103013许龙飞,张志力,李德才,等.磁性 Fe3O4SiO2复合纳米颗粒的制备与表征J.中国粉体技术,2017,23(2):84-874刘珊珊,邹雪艳,郭静玉,等.巯基功能化磁性微球的构建及其对蛋白质的亲和分离J.化学研究,2015,26(5):534-5395李 楠,代红艳.Fe3O4SiO2核壳磁性纳米材料的制备及其对 Cu()的吸附研究J.功能材料,2021,52(8):8151-81556郑浩然,刘 刚,吴惠霞,等.核壳结构 Fe3O4SiO2复合纳米粒子的制备J.化学研究与应用,2010,22(5):587-5917黄庚锐,梁志玲,罗宜苑,等.Fe3O4SiO2磁性纳米粒子制备方法的综述J.化学工程与装备,2020(2):206-2078邢慧芳,杨良嵘,于杰淼,等.磁性 Fe3O4SiO2颗粒结构对其吸附 DNA 的影响J.过程工程学报,2018,18(6):1119-11259李海洋,王 飞,雷红涛,等.硅羟基磁珠的制备及全基因组 DNA 提取优化J.生物技术通报,2017,33(6):223-22910 Yildirim E,Arikan B,Yucel O,et al.Synthesis and characterization of amino functional poly(acrylamide)coated 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