广陈皮对功能性消化不良大鼠胃肠动力的影响.pdf

广陈皮对功能性消化不良大鼠胃肠动力的影响王光宁史梦娜黄月陆旻彤杨超燕陈艳芬(广东药科大学中药学院广州 )摘 要 目的 探讨广陈皮对功能性消化不良()大鼠胃肠动力的作用及其机制 方法无特定病原体()级大鼠 只随机分为正常对照组(只)和模型组(只)采用郭氏夹尾法、不规则喂养和 、.氯化钠溶液灌胃等多因素应激干预法制造 大鼠模型 大鼠造模成功后根据体质量和行为学得分随机分为模型对照组、多潘立酮组、新皮组、十年皮组和模拟陈化组每组 只各组大鼠灌胃给药 观察记录大鼠的一般状态和体质量采用旷场实验观察大鼠的自主活动能力采用胃肠运动实验观测大鼠的胃残留率和小肠推进率苏木精伊红染色后观察大鼠胃窦组织病理形态采用酶联免疫法测定血清中胃动素和 羟色胺()的含量采用蛋白质印迹法测定十二指肠中 蛋白表达 结果 与模型对照组比较各陈皮给药组一般状态明显改善体质量和行为学得分明显提高胃残留率显著降低小肠推进率显著提高血清中胃动素和 羟色胺含量均明显升高十二指肠 蛋白表达明显上调 结论 广陈皮可促进 大鼠的胃肠动力作用机制可能与上调胃动素和、有关 广陈皮的陈化时间对 大鼠胃肠动力作用的影响不明显关键词 广陈皮消化不良胃肠动力羟色胺受体中图分类号 文献标识码 文章编号()./.开放科学(资源服务)标识码()()().()().().().功能性消化不良()是临床常见的功能性肠胃病由胃和十二指肠功能紊乱引起的非器质性病变症状以上腹部不适、饱胀感、胀气等为主可能与胃肠运动障碍、内脏高敏以及精神心理因收稿日期 修回日期 基金项目广东省中医药局科研项目()作者简介 王光宁()女陕西宝鸡人讲师博士主要从事中药炮制及饮片质量标准研究工作:电话:.素等有关 根据 的症状和临床表现可将其划归中医学“痞满”“胃脘痛”等范畴常用中药有枳壳、柴胡、陈皮等 陈皮为芸香科植物橘及栽培变种的干燥成熟果皮经陈化而得具有理气健脾、燥湿化痰的功效可用于治疗脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多等症广陈皮为橘的栽培变种茶枝柑的果皮因主产于广东新会也称为新会陈皮 年被评为国家地理标志产品 广陈皮含有黄酮、生物碱、挥发油等成分可作用于消化、心血管及呼吸等系统具有调节胃肠动力、助 消化、祛痰、调节血脂及抗氧化等药理作用 广陈皮临床主治脾胃气滞湿阻、脘腹胀痛、不思饮食等症可用于治疗消化不良 陈皮自古强调“陈久者良”陈化有利于药效的发挥现代研究发现陈化对主要成分黄酮和挥发油均产生影响 目前广陈皮采用自然存贮法进行陈化具有耗时长、损耗率高等不足 本项目组采用人工加热法对广陈皮进行模拟陈化可简便快速地制备陈化样品前期已对模拟陈化方法进行初步考察 本实验采用多因素应激干预法制造 大鼠模型探讨不同陈化时间和方法的广陈皮对 模型大鼠胃肠动力的影响并初步探讨促进胃肠动力作用机制为广陈皮的陈化研究和临床应用提供参考 材料与方法.实验动物 无特定病原体级雄性 大鼠 只体质量 鼠龄 购于广东省医学实验动物中心动物合格证号:(粤)饲养环境温度 相对湿度.药物与试剂 广陈皮购于新宝堂陈皮有限公司经广东药科大学中药学院刘基柱副教授鉴定为茶枝柑 的干燥成熟果皮 多潘立酮购于西安杨森制药有限公司(批号:)大鼠 羟色胺()酶联免疫吸附测定()试剂盒和大鼠胃动素 试剂盒均购于江苏酶免实业有限公司(批号分别为、)抗体购于(批 号:)裂 解 液(批 号:)、磷酸化蛋白酶抑制剂(批号:)及二喹啉甲酸()蛋白定量检测试剂盒(批号:)均购自 公司.仪器与设备 多功能酶标仪(美国伯腾仪器有限公司型号:)病理切片机(上海徕卡仪器有限公 司 型 号:)灰 度 分 析 软 件().实验方法.药液的制备 广陈皮溶液:分别取干燥的新皮和十年皮纯化水回流提取 次每次 过滤合并滤液减压浓缩至.模拟陈化样品用新皮提取浓缩液于烘箱 加热 以上样品制备好后 冷藏备用临用前加纯化水稀释至.多潘立酮溶液:取多潘立酮(每片 )研磨至粉状 溶 于.羧 甲 基 纤 维 素 钠()溶 液 中 制 成 浓 度 为.混悬液 碳糊:称取 .溶于纯化水 中依次加入奶粉.白砂糖.淀粉.最后滴入炭素墨水使成黑色半固体糊状物称定质量备用.大鼠的制备 大鼠适应性喂养 后开始造模按照体质量随机分为正常对照组(只)和模型组(只)正常对照组大鼠正常喂养自由饮水模型组根据文献采用郭氏夹尾法、不规则喂养和 、.氯化钠溶液灌胃等多因素应激干预法制造肝郁脾虚 大鼠模型 具体操作如下:每只大鼠灌胃 、.氯化钠溶液 每天 次 用长海绵钳夹住大鼠尾尖/处力度以不破皮并能引发打斗为度 每笼每次刺激 激怒大鼠使整笼动物处于愤怒状态 每天 次中间间隔 如有抓伤可用聚维酮碘溶液涂抹受伤部位 不规则喂养即每只大鼠单日给食 双日禁食每天饮水自由 种方法联合造模共持续 造模过程中观察大鼠的体质量、精神状态、毛发和排便情况等旷场实验评价大鼠的自主活动能力对模型进行评估.分组及给药 造模结束后根据大鼠体质量及旷场实验结果将模型大鼠随机分为模型对照组、多潘立酮组、新皮组、十年皮组和模拟陈化组每组 只 根据陈皮临 床 人 的 最 大 剂 量 换 算 大 鼠 的 等 效 剂 量 为.给药剂量设为等效剂量的 倍即为.多潘立酮给药剂量为.模型对照组用常温.氯化钠溶液灌胃多潘立酮组灌胃多潘立酮溶液新皮组、十年皮组和模拟陈化组分别灌胃新皮水提液、十年皮水提液以及加热模拟陈化药液给药 给药期间各组正常喂饲饮水自由.观测指标一般状态:每天观测大鼠的体质量、精神、毛发及粪便等 行为学评价:采用旷场实验法观察各组动物在造模和给药期间的自主活动能力 在造模的第 天、第 天和给药 分别进行大鼠旷场实验以大鼠三爪及以上跨进箱内其他方格数的总格子数作为水平活动得分以大鼠双前肢抬离地面及攀附敞箱四壁的总次数记为垂直活动得分记录每只大鼠 内的行为活动得分胃残留率和小肠推进率:末次给药后所有大鼠禁食不禁水 每只大鼠灌胃碳糊 后腹腔注射 水合氯醛麻醉分别取出胃和小肠 将胃用滤纸擦净称量并记录质量 沿胃大弯剪开后用、.氯化钠溶液清洗内容物擦干后称质量 胃质量与胃净质量的差值与碳糊质量的百分比即为胃残留率 取出小肠后分别测量幽门与碳糊的距离和幽门到回盲区的距离两者比值的百分数即为小肠推进率胃窦组织病理观察:取大鼠胃窦组织用 多聚医药导报 年 月第 卷第 期甲醛固定然后脱水、浸蜡、包埋和切片苏木精伊红()染色后观察胃窦组织病理学变化胃肠激素含量测定:各组大鼠经腹主动脉采血收集血液后在室温下静置 于 离心 (.)分离血清保存在 冰箱中 取各组大鼠血清按照 试剂盒的操作方法分别测定胃动素和 的含量蛋白表达:取各组大鼠十二指肠于 保存备用 采用 法测定各组大鼠十二指肠中 的蛋白表达按照操作顺序进行蛋白提取制胶电泳转膜封闭一抗孵育二抗孵育化学发光图像分析.统计学方法采用 .版软件统计处理各组数据均进行正态分布检验和 方差齐检验结果均符合正态分布且方差齐因此实验数据可采用均数标准差()表示 两组之间均数比较采用 检验多组间均数比较采用单因素方差分析 法以.为差异有统计学意义 结果.一般状态在造模期间正常对照组大鼠毛发有光泽行动灵敏精神状态良好粪便形态正常 与正常对照组比较模型组动物从造模第 天开始出现毛发散乱形体渐瘦有暴躁、易怒、焦躁不安的倾向粪便质地稀软有腥臭味 造模结束后模型组大鼠毛发干枯形体明显消瘦精神状态较差易被激怒粪便水分含量大腥臭味明显 与模型对照组比较各给药组大鼠毛发有光泽形体恢复明显精神状态明显好转活动量增加粪便形态正常 中医认为过激情绪会伤及肝脾从而导致脾胃不和现代医学也认为精神心理因素是消化不良的诱因之一因此本实验在实验过程中观察各组大鼠的精神情绪变化结果表明多因素应激干预法造模可致大鼠情绪暴躁易怒给药治疗后精神状态明显改善.体质量变化 在造模期间正常对照组大鼠的平均体质量稳定增长增速较快 与正常对照组比较模型组大鼠体质量增长缓慢 第 天时模型组与正常对照组的平均体质量相差较大见图 表明该造模方法可明显抑制大鼠体质量增加给药 周后多潘立酮组、新皮组、十年皮组和模拟陈化组的大鼠体质量增长较快具体见图 表明给药干预后有助于 大鼠体质量的恢复.行为学得分 与正常对照组比较造模期间模型组大鼠的水平和垂直得分明显减少说明多因素应激干预法造模能显著降低大鼠的自主活动水平 见表 图 大鼠造模期间平均体质量变化趋势.图 大鼠给药期间平均体质量变化趋势.表 大鼠造模期间水平和垂直运动得分.分组别大鼠/只第 天水平运动垂直运动第 天水平运动垂直运动正常对照组.模型组.与正常对照组比较 .、.、.、.综合造模期间一般情况、体质量变化以及行为学评分说明采用郭氏夹尾、不规则喂养和 、.氯化钠溶液灌胃等方法可较好地制造 大鼠模型 由给药后各组大鼠行为学得分结果可知与正常对照组比较模型组的水平得分和垂直得分均降低 连续给药 后新皮组、十年皮组以及模拟陈化组大鼠的水平和垂直运动得分均高于模型对照组().().或.说明广陈皮能提高 大鼠的自主活动水平 具体见表 表 大鼠给药后水平和垂直运动得分.组别水平得分垂直得分正常对照组.模型对照组.多潘立酮组.新皮组.十年皮组.模拟陈化组.与正常对照组比较.、.与模型对照组比较.胃残留率和小肠推进率 结果见表 与正常对照组比较模型对照组大鼠的胃残留率明显上升小肠推进率明显下降(.)与模型对照组比较各广陈皮给药组大鼠的胃残留率下降、小肠推进率升高().().或.其中新皮组和十年皮组大鼠的小肠推进率升高明显.胃窦组织的病理观察各组大鼠胃窦组织 染色病理结果见图 可知正常对照组和模型对照组及各给药组均未发现器质性改变胃窦组织无溃疡及炎性浸润等明显病理特征表 组大鼠的胃残留率和小肠推进率比较.组别胃残留率小肠推进率正常对照组.模型对照组.多潘立酮组.新皮组.十年皮组.模拟陈化组.与正常对照组比较.、.与模型对照组比较.与模型对照组比较.胃动素和 含量 各组大鼠血清中胃动素和 含量测定结果见表 与正常对照组比较模型对照组大鼠血清中胃动素和 的含量均明显下降(.)与模型对照组比较各广陈皮给药组大鼠血清中胃动素和 的含量明显升高().正常对照组.模型对照组.多潘立酮组.新皮组.十年皮组.模拟陈化组图 大鼠胃窦组织病理形态学表现().()医药导报 年 月第 卷第 期表 组大鼠血清中胃动素和 的含量.组别胃动素/()/()正常对照组.模型对照组.多潘立酮组.新皮组.十年皮组.模拟陈化组.与正常对照组比较.、.与模型对照组比较.与模型对照组比较.、.().或.其中新皮组和模拟陈化组大鼠血清中的胃动素含量显著升高新皮组和十年皮组大鼠血清中的 含量显著升高.蛋白表达 见图 与正常对照组比较模型对照组大鼠十二指肠中的 蛋白表达量下降各给药组大鼠十二指肠中的 蛋白表达量显著升高与模型对照组比较各陈皮给药组和多潘立酮组的 蛋白表达量显著升高().或.表明本实验采用多因素应激干预法造模可下调 大鼠十二指肠中 蛋白表达广陈皮不同给药组大鼠十二指肠的 蛋白表达量显著升高与正常对照组比较也明显升高说明广陈皮不仅能回调 模型大鼠十二指肠的 蛋白表达也可上调正常大鼠的 蛋白表达 讨论中医认为怒伤肝思伤脾肝木乘脾土肝气郁结致使胃失和降、脾失健运而出现消化不良因此本实验采用夹尾刺激可激怒大鼠并引发打斗结合不规则饮食和 、.氯化钠溶液灌胃模拟功能性消化不良症状 造模期间模型对照组大鼠的体质量增长缓慢暴躁易怒自主活动明显减少胃窦组织无明显器质性病变说明该方法可较好地模拟 的症状 给药治疗后各给药组的体质量增长明显高于模型对照组精神状态明显好转自主活动也明显增加胃残留率和小肠推进率也明显改善说明广陈皮可改善 模型大鼠的消化不良症状促进胃肠动力 与模型对照组比较新皮、十年皮组和模拟陈化组均可促进胃排空和小肠 .正常对照组.模型对照组.新皮组.十年皮组.模拟陈化组.多潘立酮组 与正常对照组比较 .与正常对照组比较.与模型对照组比较.图 组大鼠十二指肠 蛋白表达.推进新皮和十年皮的促进小肠推进作用更明显 表明不同陈化时间广陈皮对 大鼠胃肠动力的促进作用差异不明显胃肠激素是一类具有调节自身胃肠道运动的特殊小分子肽活性物质主要由消化系统中的内分泌细胞所分泌 胃动素是消化道常见的激素之一具有促进胃肠运动作用和分泌作用 各广陈皮给药组均能促进 大鼠胃动素的分泌其中新皮促进胃动素分泌作用强于十年皮组与模拟陈化样品相近 表明广陈皮可通过促进胃动素分泌增强胃肠动力与文献报道结果一致 是一种广泛存在于中枢神经系统和胃肠道的神经递质参与调节胃肠道运动和分泌功能 人体内的 存在于消化道黏膜外周神经系统的 几乎全部由位于胃肠腺腔底部的肠嗜铬细胞产生贮存和再摄取 研究表明 通过对胃肠动力、分泌和内脏敏感性等影响从而在 发病机制中发挥作用 本实验结果表明广陈皮能够促进 大鼠血清中 分泌其中新皮组和十年皮组 含量高于模拟陈化组说明不同陈化方法对 的影响存在差异 通过作用于不同受体来调节胃肠道的运动其中与胃肠道关系较为密切的兴奋性受体有 等 受体属于 蛋白偶联受体在脑和外周组织均有分布在外周主要分布于胃肠道、膀胱和心脏参与胃肠道平滑肌收缩激活神经元细胞释放乙酰胆碱从而促进胃肠运动 本实验的蛋白免疫印迹法结果表明广陈皮可上调 大鼠十二指肠 蛋白表达推测广陈皮可能是通过 与十二指肠中的 受体结合来增强肠动力广陈皮中主要含有黄酮类和挥发油类成分其中黄酮类成分具有促消化、抗炎及抗氧化等药理作用挥发油具有平喘、止咳、抗变应性炎症、抗氧化和抗菌的作用是其主要的活性成分 本项目组前期研究和文献报道均表明随着陈化时间的延长主要黄酮类成分橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的含量均有增加挥发油类成分的种类和相对含量均发生变化酯、酸、醇类成分增加 黄酮类和挥发油类成分在陈化过程中量变和质变与药效的相关性仍需进一步研究综上所述本研究结果表明广陈皮可促进 模型大鼠的胃肠动力其作用机制可能与促进胃动素和 的分泌及十二指肠中 蛋白表达上调有关 新陈皮、年陈皮和模拟陈化样品均可促进胃肠动力陈化时间对 大鼠的促胃肠动力作用影响不明显初步确定模拟陈化方法可行 笔者在下一步实验中将优化广陈皮模拟陈化条件并全面比较模拟陈化与自然陈化样品的药效作用差异为广陈皮人工模拟陈化提供更多科学依据参考文献 马永力陈红梅方新华等.衢枳壳与其他三大主产区枳壳对功能性消化不良大鼠理气作用的比较研究.中国中医药科技():.龙飘雎世聪邹旭等.小柴胡汤对肝郁脾虚型功能性消化不良大鼠、蛋白的影响.山东中医药大学学报():.李景新邱国海唐荣德等.年新会陈皮治疗功能性消化不良的临床研究.新中医():.():.杨放晴何丽英杨丹等.不同陈化时间广陈皮中黄酮类成分的 分析.中国实验方剂学杂志():.:.():.李皓翔梅全喜赵志等.陈皮广陈皮及新会陈皮的化学成分药理作用和综合利用研究概况.时珍国医国药():.梅全喜林慧宋叶等.广陈皮的药理作用与临床研究进展.中国医院用药评价与分析():.傅曼琴肖更生吴继军等.广陈皮促消化功能物质基础的研究.中国食品学报():.何杰滢桂蓓李梦秋等.胃寒型功能性消化不良大鼠模型的构建.中药药理与临床():.郭建生陈君聂子文等.陈皮不同提取物对寒凝气滞胃实寒模型大鼠的影响.中成药():.巧燕张军.羟色胺与功能性消化不良相关性研究进展.西部医学():.庞婷婷余芝徐斌.信号系统在胃肠中的作用及针灸通过其对 的调节.世界华人消化杂志():.段庆唐小丹郑希等.新会陈皮提取物中 种黄酮成分含量测定及其抗炎活性研究.现代食品():.任雪石凯欣张震等.广陈皮中多甲氧基黄酮提取物对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用.华中农业大学学报():.蔡周权代勇袁浩宇.陈皮挥发油的药效学实验研究.中国药业():.童红梅.用 检测不同成药时间陈皮中类黄酮含量及其抗氧化活性.西部中医药():.王坚陈鸿平刘友平等.不同贮藏年限新会陈皮挥发油成分动态变化规律研究.时珍国医国药():.医药导报 年 月第 卷第 期