紫外分光光度法阿司匹林的含量测定.doc

紫外分光光度法对阿司匹林的含量测定

紫外分光光度法对阿司匹林的含量测定
紫外--可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。波长长(频率小)的光线能量小，波长短(频率大)的光线能量大。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。
描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而变的函数关系曲线，称为吸收光谱或吸收曲线。紫外-可见吸收光谱通常由一个或几个宽吸收谱带组成。最大吸收波长（λmax）表示物质对辐射的特征吸收或选择吸收，它与分子中外层电子或价电子的结构（或成键、非键和反键电子）有关。朗伯-比尔定律是分光光度法和比色法的基础。即物质在一定浓度 的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。
A= lg1/T = εcl (Lambert-Beer定律)
紫外-可见分光光度计由5个部件组成：①辐射源。必须具有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500纳米），氘灯或氢灯（180～460纳米），或可调谐染料激光光源等。②单色器。它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。③试样容器，又称吸收池。供盛放试液进行吸光度测量之用，分为石英池和玻璃池两种，前者适用于紫外到可见区，后者只适用于可见区。容器的光程一般为0.5～10厘米。④检测器，又称光电转换器。常用的有光电管或光电倍增管，后者较前者更灵敏，特别适用于检测较弱的辐射。近年来还使用光导摄像管或光电二极管矩阵作检测器，具有快速扫描的特点。⑤显示装置。这部分装置发展较快。较高级的光度计，常备有微处理机、荧光屏显示和记录仪等，可将图谱、数据和操作条件都显示出来。
　　仪器类型有：单波长单光束直读式分光光度计，单波长双光束自动记录式分光光度计和双波长双光束分光光度计。
　　应用范围包括：①定量分析，广泛用于各种物料中微量、超微量和常量的无机和有机物质的测定。②定性和结构分析，紫外吸收光谱还可用于推断空间阻碍效应、氢键的强度、互变异构、几何异构现象等。③反应动力学研究，即研究反应物浓度随时间而变化的函数关系，测定反应速度和反应级数，探讨反应机理。④研究溶液平衡，如测定络合物的组成，稳定常数、酸碱离解常数等。
对溶剂的要求：含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm 。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收度。溶剂和吸收池的吸光度，在220～240nm 范围内不得超过0.40，在241～250nm范围内不得超过0.20，在251～300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。
测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。（1）鉴别和检查 分别按各品种项下的方法进行。（2）含量测定①对照品比较法：按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100％±10％，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度∶ CX＝（AX/AR）CR ，式中 CX为供试品溶液的浓度； AX为供试品溶液的吸收度； AR为对照品溶液的浓度； CR为对照品溶液的吸收度。②吸收系数法：按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。③比色法：供试品溶液加入适量显色剂后测定吸光度以测定其含量的方法为比色法。
本实验样品阿司匹林肠溶片属片剂(肠溶)。本品属于非甾体抗炎药。可用于镇痛解热，抗炎，抗风湿，关节炎，抗血栓。阿司匹林为白色针状或板状结晶或粉末。熔点135℃。无气味，微带酸味。在干燥空气中稳定，在潮湿空气中缓缓水解成水杨酸和乙酸。能溶于乙醇，乙醚和氯仿，微溶于水，在氢氧化碱溶液或碳酸碱溶液中能溶解，但同时分解。是应用最早，最广和最普通解热镇痛药抗风湿药。具有解热、镇痛、抗炎、抗风温和抗血小板聚集等多方面的药理作用，发挥药效迅速，药效肯定，超剂量易于诊断和处理，很少发生过敏反应。常用于感冒发热,头痛、神经痛关节痛、肌肉痛、风湿热、急性内湿性关节炎、类风湿性关节炎及牙痛等。

阿司匹林
1 实验仪器与试剂
1.1 仪器
紫外分光光度计（Cintra404,GBC）、电子天平（AB135-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司METTLER TOLEDO）、微孔滤膜（尺寸25mm，孔径0.8μ，上海半岛实业有限公司净入器材厂）
1.2 试剂
阿司匹林肠溶片（25mg/片，临汾宝珠制药有限公司，批号100301）：取20片称重，并研磨成粉，备用，计算得药粉的平均片重为73.93/mg。
阿司匹林贮备液溶液（1.5368mg/ml，实验室提供）
无水乙醇（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 确定检测波长
先量取0.5ml的阿司匹林储备液，用无水乙醇稀释至25ml。用紫外分光光度计扫描阿司匹林的紫外图谱，选取303nm处为紫外吸收检测波长。

图1 阿司匹林贮备液紫外光谱图
2.1.2 标准溶液制备
阿司匹林的浓度线性范围为0.0124 mg/ml-0.0435 mg/ml，储备液的浓度为1.5368 mg/ml。故分别移取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml储备液。用无水乙醇稀释至25ml即得。
2.1.3 样品溶液制备
平行称量样品101.0mg、101.8mg、106.0mg，分别用无水乙醇溶解，定容至25ml容量瓶中即得。
2.1.4 测量
设定好参数后，转换进入计算模式。先进行空白调零，分别对6个不同浓度的标准溶液进行3次平行检测。再将样品溶液过滤后进行紫外检测，同样平行测量3次。
2.2. 方法学研究
2.2.1标准曲线的建立
分别精密量取该阿司匹林储备液（1.5368 mg/ml）0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml储备液。用无水乙醇稀释至25ml摇匀即得系列浓度的对照品溶液，用紫外分光光度法，在上述条件下测定紫外吸光度A，分别测3次，取平均值，以紫外吸光度（A）对浓度（C）回归处理，得标准曲线和回归方程。
表1 标准曲线实验
编号
浓度（mg/ml）
A（平均值）
1
0.0124
0.196
2
0.0184
0.290
3
0.0246
0.397
4
0.0307
0.494
5
0.0369
0.589
6
0.0430
0.688

图2 阿司匹林的标准曲线
在0.0124 mg/ml-0.0435 mg/ml浓度范围内，阿司匹林的浓度与吸光度成线性，标准曲线方程：A=16.095C+0.003，相关系数：r=0.9998。
2.2.2 精密度试验
分别精密量取该阿司匹林储备液（1.5368 mg/ml）0.35、0.50、0.65ml置25ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀即得，照紫外分光光度法，在上述条件下测定吸光度A。平行操作3份。
表2 精密度实验

浓度（mg/ml）
吸光度A
测定浓度（mg/ml）
均值±RSD
0.0215

0.0307

0.0399

2.2.3 回收率实验
分别精密量取阿司匹林储备液（1.5368 mg/ml）0.2、0.25、0.3ml置25ml容量瓶中，再分别加入1.0ml样品溶液，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得高、中、低三种浓度溶液，滤过，弃去初滤液，用续滤液测定吸光度A，平行操作3份，计算回收率。
表3 回收率实验

本底值（mg/ml）
加入后浓度（mg/ml）
测得值
回收率
平均值±RSD
高浓度
0.015
0.033

中浓度
0.015
0.028

低浓度
0.015
0.023

2.3. 样品含量测定
根据样品的标示量，取20片阿司匹林肠溶片置于研钵中研磨，求平均片重，平行称量样品101.0mg、101.8mg、106.0mg，分别用无水乙醇溶解，定容至25ml容量瓶中即得样品溶液，用微孔滤膜过滤，取滤液进行测定。
表4 样品测得荧光强度数据及处理
A平均值
浓度（mg/ml）
计算质量（mg）
标示量%
0.313
0.0196
0.490
1.41
0.296
0.0186
0.465
1.37
0.356
0.0223
0.558
1.52
计算标示量百分含量的RSD%=7.76% ，平均标示量B%=1.43%。药典规定制剂规格范围为95%-105%，所以该药品不合格。
3 讨论
（1）本品不合格可能的原因：①在制备样品时，样品未完全溶解；②样品制备后没有立即测量，可能有样品分解。
（2）一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.2～0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增大为准，由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。当溶液的pH值对测定结果有影响时，应将供试品溶液和对照品溶液的pH值调成一致。
（3）物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系.测定条件(温度,溶剂极性,pH等)不同,吸收光谱的形状,吸收峰的位置,吸收强度等都可能发生变化。在室温条件下，温度对吸收光谱的影响并不大。