第三十七课时鉴定类实验.doc

丹阳五中11—12年度高三生物一轮复习教案（实验）
第三十三课时——鉴定、提取、分离实验
一、教学目标
1. 生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 2. 模拟尿糖的检测
3. 叶绿体中色素的提取和分离
二、教学重点
1. 叶绿体中色素的提取和分离 2. 模拟尿糖的检测
三、教学难点
1. 叶绿体中色素的提取和分离 2. 模拟尿糖的检测
四、教学过程
考点一 生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定（B）
一、实验原理
可溶性还原糖与 试剂发生作用，生成 色沉淀；脂肪可以被 染成 色；蛋白质与 试剂发生作用，产生 色反应。
二．实验材料
1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖 ，颜色为 的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）
2．做脂肪的鉴定实验。应选富含 的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。
3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。
三、方法步骤
（一）可溶性糖的鉴定
操 作 方 法
注 意 问 题
解 释
1. 制备组织样液。
（去皮、切块、研磨、过滤）
苹果或梨组织液必须临时制备。
因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。
2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。

3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。
应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液 量混匀成斐林试剂；
切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。
斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu(OH)2在70~900C下分解成黑色CuO和水；
甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu(OH)2生成。
4. 试管放在盛有 0C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀）
最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯 ，试管口不朝向 。

防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；

（二）脂肪的鉴定
操 作 方 法
注 意 问 题
解 释
花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。
干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。
因为浸泡时间短，不易 ，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。
在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ染色3分钟或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。
染色时间不宜过长。

用吸水纸吸去薄片周围染液，用
酒精洗去浮色，吸去酒精。

酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。
用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。

滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。
低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成
色或 色圆形小颗粒。
装片不宜久放。
时间一长，油滴会溶解在乙醇中。
（三）蛋白质的鉴定
操 作 方 法
注 意 问 题
解 释
制备组织样液。
（浸泡、去皮研磨、过滤。）

黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。
鉴定。加样液约2ml于试管中，加入 ，摇匀；再加入 3~4滴，摇匀，溶液变紫色。
A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加 液后加
液。

CuSO4溶液不能多加。
先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀，而失效。
否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。
可用蛋清代替豆浆。
蛋清要先 。
如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。
附：淀粉的检测和观察
用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。
碘液不要滴太多
以免影响颜色观察
考点二 模拟尿糖的检测（B）
一、实验目的
学会尿糖的检测方法、检查“尿样”中是否含有葡萄糖。
二、实验原理
方法一、斐林试剂+葡萄糖 水浴 沉淀
葡萄糖
葡萄糖酸+H2O2
葡萄糖氧化酶

H2O2
H2O+O
过氧化氢酶

有色化合物
无色化合物+O
方法二、葡萄糖试纸是一种酶试纸，由葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶和某种无色的化合物固定于滤纸上制成。当尿液滴加到酶试纸上时，尿液中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在酶的催化作用下形成水和原子氧，原子氧可以将试纸上无色的化合物氧化成有色化合物，使试纸呈现特定的颜色，再与标准比色卡比对，即可知道尿样中葡萄糖的含量。
三、实验步骤
方法一
（1）取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
（2）检测方法： 试剂（水浴加热）或尿糖试纸
（3）结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是 的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。
（4）分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。
方法二
（1）将5个分别装有水、葡萄糖溶液、三份模拟“尿样”的滴瓶和5条葡萄糖试纸分别对应做好标记，并在记录本上设计好记录表格；
样品
水
葡萄糖溶液
模拟“尿样”1
模拟“尿样”2
模拟“尿样”3
颜色变化

（2） ；
（3） ；
（4） ；

2．分别用滴管从5个滴瓶中吸取溶液，在对应的葡萄糖试纸上各滴加2滴。
3．观察试纸的颜色变化并与标准比色卡对比，判断出“尿糖”的含量。
4．将实验结果记在记录表中。
典型例题
一、选择题：
1．在新榨取的梨汁中加入斐林试剂，加热后出现砖红色沉淀；将成熟花生种子的子叶做成临时切片，用苏丹Ⅳ染液染色后在显微镜下观察，可以看到红色颗粒；向新鲜豆浆中加入双缩脲试剂，豆浆呈紫色。上述实验现象证明，梨汁、花生种子的子叶和豆浆中主要含有的有机物依次是（ ）
A．还原糖、蛋白质、脂肪 B．淀粉、脂肪、蛋白质
C．还原糖、脂肪、蛋白质 D．糖类、蛋白质、淀粉
2．对生物组织中还原糖、蛋白质的鉴定实验中，下列有关实验材料选择的叙述中错误的是（ ）
A．甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多的糖且近于无色，因此可以用于进行还原糖的鉴定
B．花生种子含脂肪多且子叶肥厚，是用于脂肪鉴定的理想材料
C．大豆种子蛋白质含量高，是进行蛋白质鉴定的理想植物组织材料
D．鸡蛋清含蛋白质多，是进行蛋白质鉴定的动物材料
3．（多选）下面是几位同学的实验操作方法或结果，其中正确的是（ ）
A．番茄汁中含有丰富的葡萄糖和果糖，可用作还原糖鉴定的替代材料
B．纸层析法分离叶绿体中的色素，其颜色从上到下依次是：橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色
C．蛋白质与双缩脲试剂作用产生紫色反应
D．显微镜下观察根尖的有丝分裂，在细胞呈正方形的区域易找到分裂期的细胞
4．（多选）表中实验正确的是（ ）
实验
鉴定物质
试剂
颜色
A
葡萄糖
斐林
橘黄色
B
脂肪
苏丹Ⅲ
砖红色
C
蛋白质
双缩脲
紫色
D
DNA
二苯胺
蓝色
5．（多选）久置的纯蔗糖溶液，加入斐林试剂后，经加热后会出现砖红色沉淀。下列对此问题的解释中，不正确的是（ ）
A．蔗糖溶液暴露在外，会被氧气氧化而具备还原性
B．蔗糖溶液中的微生物将蔗糖水解后，有还原糖产生
C．蔗糖是一种还原糖 D．蔗糖与空气中CO2生成了还原糖
二、非选择题：

①生物组织中还原糖的鉴定 ④叶绿体中色素的提取和分离
②生物组织中脂肪的鉴定 ⑤观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
③生物组织中蛋白质的鉴定 ⑥观察植物细胞的质壁分离和复原
1．根据以下实验内容回答问题：

（1）在上述实验过程中，必须借助显微镜才能完成的是 （序号），实验中需要水浴加热的有 （序号）。
（2）在上述实验中，常用到酒精的实验有②④⑤，其中酒精所起的作用分
别是 、 、 。
（3）由于实验材料用品或试剂所限，有时候需要设法替代。下列各项处理中正确的是 。
A．做⑤实验时，可用蒜叶代替洋葱根尖
B．做⑥实验时，可用鸡血红细胞代替紫色洋葱表皮细胞
C．做④实验时，可用干净的细沙代替二氧化硅
D．做②实验时，可用龙胆紫代替苏丹Ⅲ染液
（1）②⑤⑥ ① (2)②洗去浮色 ④溶解叶绿体色素 ⑤固定植物细胞 (3)C
2．甘薯和马铃薯都富含淀粉，但甘薯吃起来比马铃薯甜。为探究其原因，某兴趣小组以甘薯块根和马铃薯块茎为材料，在不同温度、其他条件相同的情况下处理30min后，测定还原糖含量，结果表明马铃薯不含还原糖，甘薯的还原糖含量见下表：
处理温度（℃）
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
甘薯还原糖含量mg/g
22．1
23．3
25．8
37．6
40．5
47．4
54．7
68．9
45．3
28．6
（1）由表可见，温度为70℃时甘薯还原糖含量最高，这是因为
（2）马铃薯不含还原糖的原因是
（3）为了确认马铃薯不含还原糖的原因，请完成以下实验：
实验原理：① ； ② ；
备选材料与用具：甘薯提取液（去淀粉和还原糖），马铃薯提取液（去淀粉），二苯胺试剂，斐林试剂，双缩脲试剂，质量分数为3%的淀粉溶液和质量分数为3%的蔗糖溶液等。
实验步骤：第一步：取A、B两支试管，在A中加入甘薯提取液，B管加入 马铃薯提取液。
第二步：70℃水浴保温5分钟后，在A、B两支试管中各加入 ；
第三步：70℃水浴保温5分钟后，在A、B两支试管中再各加入 ；
第四步： 。（2分）
实验结果： 。
（4）马铃薯不含还原糖，但吃起来略带甜味，这是由于             的作用，食用马铃薯后消化分解成的葡萄糖，被小肠上皮细胞吸收后发生的代谢变化是             。
(1)还原糖的产生是酶作用的结果，酶具有最适温度。  (2)不含淀粉酶。  (3)实验原理：①淀粉酶水解淀粉产生还原糖；②还原糖与斐林试剂反应，产生砖红色沉淀。 实验步骤：第二步：等量淀粉溶液 第三步：等量斐林试剂 第四步：沸水浴加热煮沸1-2 min 实验结果：A管砖红色，B管蓝色(4)唾液淀粉酶    代谢变化是：氧化分解为CO2、H2O及释放能量；合成糖元(肝糖元、肌糖元)；转变成非糖物质(脂肪、某些非必需氨基酸)。
3．人体内的血糖浓度总是维持在一个适当的水平。当血糖代谢失去平衡时，人体就会患低血糖病或糖尿病。某学校的学生兴趣小组作了以下的模拟尿糖的检测实验和问题讨论，请根据以下材料完成相关的内容：
（1）实验材料：试管，试管架，滴管，清水，葡萄糖溶液，蛋白质溶液，葡萄糖试纸（遇葡萄糖会出现一定的颜色），模拟的尿液样本甲、乙两份。
（2）实验目的 。
（3）实验步骤：
①取 支试管，分别编号，并放在试管架上。
②在上述试管中 。
③将葡萄糖试纸放到干净的纸巾上。
④然后用一支干净的滴管，从1号试管中吸取等量液体滴2滴在葡萄糖试纸上。
⑤ 。
⑥ 。
⑦将5张试纸进行比较分析，得出实验结论。
（4）问题讨论：
①某同学实验所得的5张试纸的现象没有很大区别，最可能的原因是什么？ 。
②仅凭尿液样本还不能断定某人患糖尿病，应该怎样进行进一步确诊？ 。
③除了用葡萄糖试纸检验糖尿病病人的尿液中含有葡萄糖外，还可以用什么方法？ 。
（2） 学会用葡萄糖试纸检测尿液中是否存在葡萄糖的方法
（3）①5 ②1～5号分别是等量的清水、葡萄糖溶液、蛋白质溶液、甲尿液、乙尿液。
⑤观察和记录葡萄糖试纸的颜色变化 ⑥重复步骤④，用葡萄糖试纸测试另外4种溶液，每次记录测试纸的颜色变化
（4）①可能是用同一支滴管取液体样本（其他合理的答案也可以）
②可以检测血液中胰岛素的浓度（其他合理的答案也可以）
③斐林试剂水浴加热出现砖红色沉淀

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