高效液相色谱法测定铁皮石斛中的5种核苷类物质含量.pdf

药物检验与分析高效液相色谱法测定铁皮石斛中的 种核苷类物质含量林佳惠(福建省立医院福建福州)摘要:目的 建立高效液相色谱法检测铁皮石斛中 种核苷类物质的分析方法方法 采用月旭 ()色谱柱流动相为 乙酸铵水溶液()甲醇()梯度洗脱流速:检测波长:柱温:进样体积:结果 种核苷类物质在各自线性范围内线性良好加样回收率为 之间 小于 结论 该方法操作简便、稳定可靠可用于铁皮石斛中核苷类物质的测定关键词:铁皮石斛高效液相色谱法核苷类物质中图分类号:文献标识码:文章编号:()作者简介:林佳惠女()毕业于福建医科大学 职称:主管药师 ():()()()():铁皮石斛是药用石斛中的上品具有抗肿瘤、抗氧化、降血脂、降血糖、增强机体免疫力等诸多功效 现代研究表明这些功效不仅有赖于铁皮石斛中丰富的多糖、生物碱、黄酮等成分还与其含有的氨基酸及核苷类物质息息相关 目前关于铁皮石斛中核苷类物质的含量测定研究报道较少核苷类物质广泛参与生命调节具有调节免疫力、抗病毒、抗肿瘤、舒张心血管等多种药理作用 本实验利用高效液相色谱法同时测定铁皮石斛中胞嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷等五种核苷类物质以期为铁皮石斛中核苷类成分的研究和质量评价提供参考和依据 材料与方法 药品、试剂与仪器胞嘧啶(批号:)次黄 嘌 呤(批 号:)尿 苷(批 号:)肌苷(批号:)鸟苷(批号:)标准品均购于上海麦克林生化科技有限公司甲醇(色谱级)、乙酸铵、氢氧化钠、娃哈哈纯净水均购于国药集团有限公司 霍山铁皮石斛药材()购于霍山县别山斛中药材农民专业合作社福建医科大学张永红教授鉴定兰科植物铁皮石斛的粉末 高效液相色谱仪(日本岛津公司)超声清洗器(上海弘心超声电子仪器有限公司)月旭 柱(上海月旭科技有限公司)研究方法 色谱条件:月旭 柱()流动相:乙酸铵水溶液()甲醇()二元高压梯度洗脱:流速:检测波长:柱温:进样体积:溶液配制:分别精密称取胞嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷五种标准品于 容量瓶中其中次黄嘌呤和胞嘧啶标准品溶解时先分别加入适量 氢氧化钠溶液溶解最后分别用双蒸水定容至刻度配制成 标准品溶液作为母液于冰箱中储存备用 精密移取五种标准品母液适量配制成混合标准品溶液按照/、/、/、/、/稀释所得到的系列标准溶液过膜纯化后存于冰箱中备用 供试品溶液的制备:取研细后的铁皮石斛粉末精密 称取 于 离心管中 离心管中加入水至 超声提取()后取出放凉至室温于离心机 下离心 转移上清液至 容量瓶中重复以上步骤 次用水定容至 摇匀滤膜过滤取续滤液备用 混合标准品溶液()和铁皮石斛样品溶液()的 色谱图见图 图 混合标准品溶液()和样品溶液()的 色谱图 胞嘧啶 次黄嘌呤 尿苷 肌苷 鸟苷 结果 线性关系考察分别精密移取“”项配制系列标准溶液按照“”项色谱条件进行测定以标准品溶液浓度测得的峰面积()为纵坐标各标准品浓度()为横坐标分别绘制标准曲线图得到回归方程各成分质量浓度在考察范围内与所得的峰面积呈良好的线性关系结果见表 表 种核苷类成分的线性关系物质回归方程线性范围()值胞嘧啶 次黄嘌呤 尿苷 肌苷 鸟苷 精密度实验考察该实验方法的精密度精密吸取“”项下的混合标准品溶液适量按“”项下的色谱条件下连续进样测度 次计算得到胞嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷峰面积的 分别为 、和 结果表明仪器精密度良好 重复性实验精密称取铁皮石斛样品粉末 份按照“”项下的方法制备供试品溶液按“”项下的色谱条件下进样测定并根据线性回归方程计算 种核苷类物质的含量计算得到胞嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷含量的 分 别 为 、和 表明该实验方法重复性良好 稳定性实验 精密称取同一份供试品在“”项下的方法制备分别于、按“”项下的色谱条件下进样测定经计算得到胞嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷峰面积的 分别为 、和 加样回收率实验为了进一步评估该实验方法的准确性精密称取已知核苷类物质含量的铁皮石斛样品粉末 份各 精密加入与铁皮石斛粉末核苷类物质含量相等的混合标准品溶液按“”项下的色谱条件下进样测定测得 种核苷成分的平均回收率为 之间小于 (见表)表 种核苷类成分加样回收率试验结果()成分样品含量()加入量()测得量()平均回收()()胞嘧啶 次黄嘌呤 尿苷 肌苷 鸟苷 样品含量测定精密称取铁皮石斛样品粉末 按照“”项下的方法制备供试品溶液按“”项下的色谱条件下进样测定并根据线性回归方程计算 种核苷类物质的含量结果见表 表 铁皮石斛中 种核苷类成分的含量()成分含量()()胞嘧啶 次黄嘌呤 尿苷 肌苷 鸟苷 讨论 提取条件优化 在供试品制备过程中本实验分别考察了不同类型提取溶剂(纯水、甲醇、乙醇)及不同浓度提取溶剂甲醇和乙醇水溶液的提取效率结果采用纯水溶液为提取溶剂的色谱基线较为平稳杂质峰较少故采用纯水作为提取溶剂 色谱条件的优化 在流动相选择的过程中比较了不同的流动相(水甲醇、乙酸水溶液甲醇、乙酸铵水溶液甲醇)对目标成分的分离效果结果采用 乙酸铵水溶液甲醇时各目标成分的分离度较好 其次在实验过程中发现流动相的 值对核苷类物质的出峰时间及分离度的影响较大因此在配置流动相时要尽可能保持 海峡药学 年 第 卷 第 期值稳定 结论本实验采用高效液相色谱法同时测定铁皮石斛中胞嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷等五种核苷类物质该方法简便可靠可以为铁皮石斛中有效成分的研究提供实验参考依据参考文献王治丹代云飞罗尚娟等 铁皮石斛化学成分及药理作用的研究进展 华西药学杂志():张雪琴赵庭梅刘静等 石斛化学成分及药理作用研究进展 中草药():刘杰陈双雪何柳等 铁皮石斛药用价值研究探索 中国林副特产():赵斌邓仙梅刘敬 我国近 年铁皮石斛多糖研究概况 亚太传统医药():奚航献刘晨刘京晶等 铁皮石斛化学成分、药理作用及其质量标志物()的预测分析 中草药():曾艺芸聂雪婷李振坚等 中药石斛黄酮活性成分研究进展 中国实验方剂学杂志():张桂玲冉靓罗绪强 两种荔波产铁皮石斛多糖、氨基酸及微量元素含量分析 时珍国医国药():刘峻麟俞年军邢丽花等 基于/的石斛中氨基酸和核苷类成分分析与评价 中国中药杂志():丁兴杰熊亮周勤梅等 天然核苷类成分的化学结构和药理活性研究进展 成都中医药大学学报():吕爱娟吴皓 中药中核苷类成分的研究进展 中国中医药信息杂志():永停滴定法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素含量潘丕阑吴军军陈海境(宁德市中医院制剂室福建宁德)摘要:目的 建立复方氯霉素洗剂中氯霉素含量测定方法方法采用永停滴定法设定灵敏度 自动滴定模式用亚硝酸钠滴定液()测定复方氯霉素洗剂中氯霉素的含量结果 建立的永停滴定法在氯霉素含量 ()范围内线性关系良好回归方程 平均回收率 ()滴定结果的重现性、准确度均优于外指示滴定法结论 建立的氯霉素含量测定的永停滴定法结果准确可靠、简便易行适合医院制剂的质量控制关键词:永停滴定法含量测定氯霉素中图分类号:文献标识码:文章编号:()作者简介:潘丕阑女()毕业于中国药科大学 职称:药剂师 从事药剂专业工作通讯作者:吴军军男()毕业于福建中医药大学 学历:本科学士 职称:主管中药师执业中药师执业药师 从事专业:医院制剂生产工艺及质量检验 ():()()():