松针叶绿素-胡萝卜素软膏对实验性胃溃疡的防治作用.pdf

第 3 1 卷第 1 期 2 01 1年 2月 化 学 与 工 业 I n d u s t r y o f F o r e s t P r o d u c t s -l No 1 Fe b 2 0l 1 卫 松 针 叶 绿 素 一胡 萝 卜 素 软 膏 对 实 验 性 胃 溃 疡 的 防 治 作 用 郑光耀，李 骄，薄采颖，李海涛，宋 强(1 中国林业科学研 究院 林产化 学工业研 究所；生物质化 学利用 国家工程 实验室；国家林业局 林产化学工程重点开放性实验室，江苏 南京 2 1 0 0 4 2；2 南京中医药大学 药学院，江苏 南京 2 1 0 0 4 6)摘要：采用幽门结扎致大鼠 胃溃疡模型、乙醇致大鼠 胃溃疡模 型和醋酸致 大鼠 胃溃疡模型进 行 实验，通过测定 胃溃疡 面积计算 3种模型的 胃溃疡抑 制率，考 察 了幽 门结扎 大鼠的 胃液及 胃蛋 白酶活性和 大鼠醋酸型 胃溃疡病理切 片，从 而研究 了松针 叶绿 素一 胡 萝 卜 素软 膏的抗 胃溃疡作用。结 果表 明：松针 叶绿 素一 胡萝 卜素软 膏0 7 5、1 5 0和 2 2 5 g k g 3个剂量组均能 显著抑制 胃液分泌量，升 高 胃酸 p H值，抑 制 胃蛋 白酶活性(P 0 0 1)，对大鼠幽门结扎型、乙醇型和醋酸型胃溃疡均有显著的抑制作用(P 0 0 1)，其 中2 2 5 g k g剂量组的抑制 率分别为 8 4 3 9、6 5 3 3 和 8 0 6 8，显示松针 叶绿素 胡萝 卜紊软 膏对 实验性 胃溃疡具有预防和治疗作用。关键词：松针；叶绿素一 胡萝 卜素软 膏；胃溃疡 中图分类号：T Q 3 5 1 文献标识码：A 文章编号：0 2 5 3 2 4 1 7(2 0 1 1)0 1 0 0 2 6 0 5 E f f e c t s o f Ch l o r o p h y l l c a r o t e n e P a s t e f r o m P i n e Ne e d l e s o n Ex p e r i me n t a l Ga s t r i c Ul c e r Z H E N G G u a n g。y a o ，L I J i a o ，B O C a i y i n g ，L I H a i t a o ，S O N G Q i a n g (1 I n s t i t u t e o f C h e mi c a l I n d u s t o f F o r e s t P r o d u c t s，C AF；Na t i o n a l E n g i n e e r i n g L a b f o r B i o ma s s C h e mi c a l U t i l i z a t i o n；K e y a n d O p e n L a b o n F o r e s t C h e mi c a l E n g i n e e ri n g，S F A，N a n j i n g 2 1 0 0 4 2，C h i n a；2 S c h o o l o f P h a r ma c y，N a-j i n g U n i v e r s i t y o f C h i n e s e Me d i c i n e，Na n i i n g 2 1 0 0 4 6，C h i n a)Ab s t r a c t：G a s t ri t i s mo d e l s i n d u c e d b y p y l o r i c l i g a t i o n，e t h a n o l a n d a c e t i c a c i d i n r a t s we r e u s e d t o i n v e s t i g a t e t h e a n t i g a s t ri c u l c e r a c t i o n o f c h l o r o p h y l 1 c a r o t e n e p a s t e f r o m p i n e n e e d l e s T h e g a s t ri c u l c e r a r e a，g a s t ri c j u i c e q u a n t i t y，p H v a l u e，p e p s i n a c t i v i-t y w e r e me a s u r e d a n d p at h o l o g i c a l s l i c e s we r e e x a mi n e dTh e r e s u l t s s h o we d t h a t c h l o r o p h y l l c a r o t e n e pa s t e f r o m p i ne ne e dl e s g r o u p s w i t h d i f f e r e n t d o s a g e s o f 0 7 5，1 5 0 a n d 2 2 5 g k g i n h i b i t e d g a s t ri c s e c r e t i o n，i n c r e a s e d g a s t ri c j u i e e p H v a l u e a n d d e c r e a s e d p e p s i n a c t i v i t y r e ma r k a b l y(P 0 0 1)，I t a l s o g r e a t l y i n h i b i t e d t h e f o r ma t i o n o f g a s t ri c u l c e r s i n d u c e d b y p y l o ri c l i g a t i o n，e t h a n o l a n d a c e t i c a c i d(P 0 0 1)T h e i n h i b i t o r y r a t e s a t t h e d o s a g e o f 2 2 5 g k g w e r e 8 4 3 9，6 5 3 3 a n d 8 O 6 8 r e s p e c t i v e l yI t wa s s e e n t ha t Ch l o r o p hy l l c a r o t e n e pa s t e f r o m pi n e ne e dl e s ha d p r e v e n t i v e a n d t h e r a p e u t i c e f f e c t s o n e x p erime n t a l g a s t r i c u l c e r Ke y wo r d s：pi n e ne e dl e s；c hl o r o ph y l l c a r o t e n e pa s t e；g a s t i r c u l c e r 松针是松科植物的针形叶，又名针叶、松叶等，包括松属、云杉属、落叶松属、冷杉属和雪松属等种类 的松针，资源十分丰富，分布遍及全国。松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏是松针化学加工生产的主要产品之 一，含有丰富的叶绿素、一 胡萝 卜 素、维生素 E、萜类化合物和植物甾醇等生物活性物质，具有很好的营 养和药用价值 l 。第二次世界大战期间，列宁格勒被德国军队围困 9 0 0 d，居民每天定额分配 1 2 5 g的 收稿 日期：2 0 1 0 0 91 8 基金项 目：科技部农业科技成果转化资金项 目(2 0 0 8 G B 2 4 3 2 0 4 1 2)作者简介：郑光耀(1 9 6 4一)，男，福建莆田人，副研究员，研究方向为林产植物 资源提取分离技术及其生物活性成分开发利用 E ma i l：z h g u y a s i n a c o r n：r 产a V，林 r C 第 1 期 郑光耀，等：松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对实验性 胃溃疡的防治作用 2 7 一种特殊面包，它是由松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏和专用食 品级纤维素强化木屑做成的，对于列宁格勒 城市和几十万市民的生存发挥 了重要的作用。松针叶绿 素一 胡萝 卜 素软膏也用于治疗烧伤、创伤和冻 伤，以及内部感染的治疗和作为维生素来源，挽救 了苏联成千上万人免受疾病、死亡和饥饿 。胃溃疡 是一种常见的消化系统疾病，随着现代生活节奏加快，精神紧张和压力增大，使 胃溃疡的发病率越来越 高，危害人们身心健康。目前临床上通常使用雷尼替丁、奥美拉 唑、果胶铋等西药治疗，近期疗效较好，但存在疗程过长，服药后出现不适感和毒副作用 J。近年来，人们对有生物活性 的天然植物提取物给 予了高度关注，进行 了大量抗 胃溃疡新药的研究开发和筛选评价。根据松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏 具有刺激皮肤与黏膜伤 口愈合的特性，本研究通过考察松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏对大鼠幽 门结扎致 胃溃疡模型、乙醇致大鼠胃溃疡模 型和醋酸致大 鼠胃溃疡模 型的影响，探讨其预防和治疗 胃溃疡的作 用，为开发松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏的抗 胃溃疡防治药物提供实验依据。1 材料 与方法 1 1 材料 与试剂 松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏，选用马尾松(P i n u s m a s s o n i a n a L a m b )嫩枝叶作为原料，经切碎、干燥 和粉碎后，用石油醚浸提 2次，浸提液减压浓缩回收溶剂后，用氢氧化钠溶液皂化，调节 p H值到 8 0，加 入蒸馏水制成干物质质量分数 5 6 7 的暗绿色膏状物，产品得率为 9 3，由中国林业科学研究院林 产化学工业研究所制备。奥美拉唑，湖南康普制药有限公 司生产，批号：2 0 0 9 0 8 2 2。以上药物试验时用 蒸馏水配置。胃蛋 白酶活性试剂盒，由南京建成生物有限公司提供。甲醛、无水乙醇、冰醋酸等试剂均 为分析纯。1 2实验动物 远交群大鼠(S D)大鼠，体质量 1 8 0 2 2 0 g，雌雄各半，由南京中医药大学动物实验 中心提供，合格证 号：2 0 0 7 0 0 0 5 0 4 4 0 5。1 3大 鼠幽 门结扎致 胃 溃疡模 型 取 S D大鼠 5 O只，雌雄各半，随机分成 5组，每组 1 0只，分别为模型对照组(蒸馏水 0 1 m L k g)、奥 美拉唑阳性对照组(1 8 m g k g)和松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏(0 7 5、1 5 0、2 2 5 g k g)组。每 日灌 胃给药 1次，连续 5 d，末次给药 2 h 后，结扎大 鼠幽门，禁食禁水 1 8 h 后，处死大鼠，打开腹腔，结扎贲 门，收集 胃 液，测量胃液总量，在 3 0 0 0 r m i n下离心 1 0 ra i n，取上清液，用 p H测定仪测定 胃酸 p H值，用试剂盒测 定胃蛋白酶活性。向胃内注入 l 0 甲醛溶液 1 0 mL，将 胃取出浸入 1 0 甲醛溶液中，3 0 rai n后沿 胃大 弯剖开，测量溃疡面积，计算溃疡抑制率：抑制率=(对照组溃疡面积 一给药组溃疡面积)对照组溃疡 面积1 0 0。1 4 乙醇致大鼠胃溃疡模型 取 S D大鼠5 0只，分组同 1 3节。每 日灌 胃给药 1次，连续 5 d，末次给药 2 h 后，大 鼠灌 胃给予无水 乙醇 0 6 m L 只，1 h后处死大 鼠，剖腹结扎贲门和幽门，向胃内注入 1 0 甲醛溶液 1 0 m L，将 胃取出浸 入 l 0 甲醛溶液 中，3 0 mi n后沿 胃大弯剖开，测量溃疡面积，计算溃疡抑制率。1 5 醋 酸致 大 鼠胃溃疡 模型 取 S D大鼠 5 0只，分组 同 1 3节。将 0 0 1 mL 1 0 0 冰醋酸溶液注入大 鼠腺 胃部前壁浆膜下。从 手术次 日开始，每 日灌 胃给药 1次，连续 7 d，末次给药 2 h后，处死大 鼠，剖腹结扎贲门和幽门，向胃内 注入 l 0 甲醛溶液 1 0 m L，将 胃取出浸人 1 O 甲醛溶液 中，3 0 ra i n后沿 胃大弯剖开，测量溃疡面积，计 算溃疡抑制率。取 胃壁组织，用 l 0 甲醛固定，石蜡包埋切片，切片厚约 4 5 m，H E染色。光镜下观 察 胃黏膜的组织学变化，根据病变轻重程度，依次半定量为轻度“+”，中度“+”，重度“+”，无病 变组 织标记 为“一”。组 织 学观察 指标：大 鼠 胃壁 四层 结构 是否 清 晰，胃黏 膜表 面是 否 光滑，上 皮是 否完 整，腺体排列是否整齐。1 6统计 学处理 采用 S P S S 1 2 0 f o r w i n d o w s 统计软件分析，实验数据用平均数 标准差(xS)表示，多个实验组均 林产化学与工业 第 3 l卷 数与一个对照组均数 比较用 D u n n e t t t 检验。2 结果与讨论 2 1 对大 鼠幽 门结 扎型胃溃疡 的影 响 2 1 1 抑制率 由表 1可以看出：松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏 0 7 5、1 5 0、2 2 5 g k g 3个剂量组均能 显著减少幽门结扎型大鼠胃溃疡面积，抑制率分别为 4 0 4 l、6 3 5 5 和 8 4 3 9，且呈现 良好的量 效关系，其中 2 2 5 g k g 剂量组疗效优于奥美拉唑阳性对照组，显示松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对幽门 结扎型胃溃疡具有保护作用。表 1 松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏对幽门结扎型 胃溃疡的影响”(S，n=1 0)Ta b l e 1 Effe c t s o f c hl or op hy l l c a r o t e ne p as t e f r o m pi ne ne e dl e s o n g as t r i c ul c e r i nd uc e d by py i o r i c l i g a t i on 2 1 2 胃酸及 胃蛋 白酶活性 由表 2可以看出：松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏 0 7 5、1 5 0、2 2 5 k g 3 个剂量组均能显著抑制幽门结扎型大 鼠胃液分泌量，升高胃液 p H值和抑制 胃蛋白酶活性，且呈现 良好 的量效关系，其中2 2 5 g k g剂量组的胃液 p H值和 胃蛋 白酶活性与奥美拉唑阳性对照组相似，说明松 针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏抗 胃溃疡作用可能与抑制 胃酸的分泌和胃蛋白酶的活性有关。表 2 松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏对 胃酸及 胃蛋白酶活性的影响(S，n=1 0)Ta b l e 2 Effe c t s o f c h l o r o p h y l l-c a r o t e n e p a s t e f r o m p i n e n e e d l e s o n g a s t r i c a c i d a n d p e p s i n a c t i v i t y 2 2 对大鼠乙醇型胃溃疡的影响 由表 3可以看出：松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏 0 7 5、1 5 0、2 2 5 k g 3个剂量组对无水乙醇引起的 大鼠胃溃疡具有显著的抑制作用，抑制率分别为 2 6 5 4、4 4 1 6 和 6 5 3 3，且呈现 良好的量效关 系，其中2 2 5 g k g剂量组和奥美拉唑阳性对照组疗效相 当，显示松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对乙醇型 胃溃疡具有预防作用。表 3 松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏对无水乙醇型胃溃疡的影响(iS，n=1 0)T a b l e 3 E ffe c t s o f c h l o r o p h y l l-c a r o t e n e p a s t e f r o m p i n e n e e d l e s o n g as t r i c u l c e r i n d u c e d b y a b s o l u t e e t h a n o l 2 3 对大 鼠醋 酸型 胃溃疡 的影 响 2 3 1 抑制率 由表 4可以看出：松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏 0 7 5、1 5 0、2 2 5 g k g 3个剂量组对醋 第 1 期 郑光耀，等：松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对实验性胃溃疡的防治作用 2 9 酸引起的大鼠胃溃疡也具有显著的抑制作用，抑制率分别为 5 2 8 9、6 8 1 5 和 8 0 6 8，且呈现 良 好的量效关系，其中 1 5 k g和 2 2 5 g k g 剂量组疗效优于奥美拉唑阳性对照组。说明松针叶绿素一 胡 萝 卜 素软膏具有促进胃溃疡愈合作用。表 4 松针叶绿素一 胡 萝 卜 素软 膏对醋酸型 胃溃疡 的影 响(S，n=1 0)Ta bl e 4 Effe c t s o f c h l or op hyl l-c a r o t e ne pa s t e f r om pi ne ne e dl e s on g a s t r i c ul c e r i n duc e d b y a c e t i c ac i d 2 3 2 病理切片观察在醋酸致大鼠胃溃疡模型 中，观察到模型对照组 胃壁四层结构层次清楚，上皮 不完整(+)，局部腺体结构紊乱，浅层 胃底腺破裂，腺腔内有较多脱落的上皮细胞碎片(+)；固有层深层 以淋 巴细胞为主的炎细胞浸润(+)；部分壁细胞肿大，胞浆染色浅，可见透明 环状空晕(+)；黏膜表层可见多处带状缺损，深部固有层及黏膜下层有较多淋巴细胞(+)，见 图 1。奥美拉唑组 胃上皮缺损范围小，腺体排列较整齐，腺腔内有少量脱落细胞碎片(一+)；固有层深 部可见少量淋 巴细胞(一+)，见图 2。图 1 模型对照组病理切片 Fi g 1 Pa t ho l o g i c s l i c e o f mo de l c ont r ol gr oup 图2奥美拉 唑组病理切片 Fi g 2 Pat h ol og i c s l i c e of o me pr a z o l e g r o up 松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏小剂量组 胃黏膜表面局部可见脱落上皮细胞及碎片(+)，但下方上皮完 整、连续，见图 3(a)。松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏 中剂量组 胃上皮轻度缺损(一+)，腺体排列整齐，腺 腔 内未见坏死脱落细胞，见图 3(b)。松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏大剂量组未见 胃黏膜表面上皮细胞破 碎碎片，腺体排列较整齐，上皮深层结构完整、连续，见图 3(c)。病理切片观察与溃疡抑制率计算 的结 果基本一致，模型对照组 中出现上皮不完整、炎症、淋巴细胞溶 出等状况，在松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏 大剂量组 中没有出现，这说明松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对胃溃疡具有保护作用。a 小剂量 l o w d o s e：b 中剂量 mi d d l e d o s e；e 大剂量 h i g h d o s e 图 3 叶绿素一 胡萝 卜素软膏不同剂量组病 理切 片 F i g 3 P a t h o l o gi c s l i c e o f t h e g r o u p s u s i n g c hlo r o p h y l l-c a r o t e n e p ast e a t d i ff e r e n t d o s e s 3 0 林产化学与工业 第 3 l卷 2 4讨论 实验结果表明：松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对大鼠幽门结扎型、乙醇型和醋酸型 胃溃疡均有显著的 抑制作用，这就显示其对胃溃疡损伤的保护机制是多方面的。幽门结扎型胃溃疡是由于幽门结扎后使 胃液在胃内潴留，使 胃酸、胃蛋 白酶的侵蚀、消化力处于亢进状态所致。松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏 能显著减少胃溃疡面积，以及抑制胃液分泌量、升高胃液 p H值和抑制 胃蛋白酶活性，说明松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏抗 胃溃疡作用与抑制 胃酸的分泌和胃蛋白酶的活性有关。无水乙醇所致胃溃疡是 由于酒 精直接损伤胃黏膜，引起 胃壁血液循环障碍和组织坏死脱落，造成 胃溃疡的形成。松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对乙醇型胃溃疡有显著的对抗作用，说明松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏具有改善胃壁血液循环，促进受损 胃黏膜愈合的作用，对急性胃溃疡具有预防作用。醋酸型 胃溃疡的发生是醋酸直接对 胃组织 的侵蚀，其病理形态和修复与人胃溃疡相似，是一种慢性顽 固性溃疡。松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对 醋酸型胃溃疡疗效显著，说明松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏具有促进 胃溃疡的愈合作用，减少 胃穿孔 的出 现，对慢性胃溃疡具有治疗效果。因此，本研究认为松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏对 3种 胃溃疡模型具有 预防和治疗作用，可能与其含有的叶绿素、一 胡萝 卜 素、维生素 E、萜类化合物和植物甾醇等有关，但其 确切机制有待于进一步的研究。3 结 论 3 1 松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏 0 7 5、1 5 0、2 2 5 g k g 3个剂量组对幽门结扎型大鼠胃溃疡的抑制率 分别为 4 0 4 1 、6 3 5 5 和 8 4 3 9，对 乙醇 引起 的大 鼠 胃溃疡抑 制率 为 2 6 5 4、4 4 1 6 和 6 5 3 3；醋酸引起 的大鼠胃溃疡为 5 2 8 9、6 8 1 5 和 8 0 6 8。显示松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏 对幽门结扎型 胃溃疡、乙醇引起的胃溃疡及醋酸引起 的胃溃疡均具有保护作用。3 2 松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏 0 7 5、1 5 0、2 2 5 g k g 3个剂量组能显著抑制幽门结扎型大鼠胃液分 泌量，升高胃液 p H值和抑制 胃蛋白酶活性，提示松针叶绿素一 胡萝 卜素软膏抗 胃溃疡作用可能与抑制 胃酸的分泌和 胃蛋白酶的活性有关。3 3 在醋酸致大 鼠胃溃疡模型中，病理切片观察与溃疡抑制率计算 的结果基本一致，模型对照组 中出 现上皮不完整、炎症、淋巴细胞溶出状况，在松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏大剂量组中没有出现，提示松针 叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对胃溃疡具有保护作用。3 4 松针叶绿素一 胡萝 卜 素软膏对 3种 胃溃疡模型具有预防和治疗作用，可能与其含有的叶绿素、一胡萝 卜 素、维生素 E、萜类化合物和植物甾醇等有关，但其确切机制有待于进一步的研究。参考文献 1 松针综合利用技木考察团 苏联针 叶化学加工技术考察报告 J 林产化工通讯，1 9 9 1，2 5(6)：2 9 3 1 2 周维纯，王金秋 松针叶绿索一 胡萝 素软膏萃取新工艺研究 J 林产化学与工业，1 9 9 3，1 3(2)：1 5 9-1 6 4 3 周维纯，王金秋 松针叶绿索一 胡萝 素软膏稳定性 的研究 J 林产化学与工业，1 9 9 6，】6(2)：3 9 4 4 4 S O L A G R A N l i m i t e d R e p l a c e m e n t p r o s p e c t u s E B O I 2 0 0 4-0 4 0 5 h tt p：W W W s o l a g r a n c o m e i k k _ fi l e s c a m_ 5 4 0 4 p d f 5 赵玉山，任正伟，李广，等 瓦松水提物在制备治疗肠 胃病药中的应用及药物：中国，Z L 0 3 1 1 2 1 1 8 7 P 2 0 0 7-0 1-1 0 6 郭伦锋，郭庆东，王四旺 胃溃疡治疗药物 的研究进展 J 亚太传统医药，2 0 0 8，4(8)：7 8 8 O 7 胡晓年，张娟，向前，等 谓葆对 胃炎及 胃溃疡作用 的研究 J 中国现代 医药杂志，2 0 0 5，7(6)：2 5 2 7 8 徐叔云，卞如濂，陈修，等 药理实验方法学 M 北京：人民卫生出版社，1 9 8 2：8 9 0 9 陈霞，朱毅芳，徐济 良 胃疡平浸膏抗 胃溃疡作用研究 J 时珍国医国药，2 0 0 8，1 9(3)：6 4 8 649