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视网膜定向铺片方法马 科,徐 亮(北京市眼科研究所,北京100005)摘 要:目的:介绍一种大鼠视网膜定向铺片方法。方法:对不固定、固定112小时及固定24小时以上SD大鼠眼球采用碳素标记视网膜定向铺片,剪成上、下、鼻、颞四个区域。结果:不固定组视网膜容易撕裂,固定24小时以上组视网膜周边上卷,固定112小时组视网膜分离容易,铺片后视网膜平整并很好辨别各方向。结论:该方法简单实用,能很好地确定铺片后视网膜的方向,对于视网膜节细胞的定量分析等研究有重要意义。关键词:视网膜,铺片;动物,实验 中图分类号:R774 文献标识码:A 文章编号:100424469(2002)0420238202Method for direction finding flattening of rat retina on the slide/MA KeOphthalmol CHN.22002,11(4).2238239(BeijingInstitute of Ophthalmology,Beijing100005)Abstract:Objective:To introduce a method of direction finding flattening of rat retina on the slide.Method:Eyes of 12 rats,afterlabeled with ink on the upper conjunctiva,were devided into 3 groups,and the enucleated eyeballs in groupwere not fixed with anyfixation fluid,while in group,the eyeballs were fixed in 4%polymer formalin 0.1M PBS 112 hrs.,and in group,the fixationtime wasover 24 hrs.According to the conjunctival ink mark,the rat retinae were cut with scissors into u pper,lower,nasal and tempo2ral pieces,and flattened on the slide.Results:Of 8 eyes in group,6 eyes were torn easily,while those fixed for over 24 hrs.,theedges of retinae rolled up.The retinae fixed for 112 hrs,separated from choroid easily,and after flattened on the slide,they were flatand direction can be identified.Conclusion:This method is sim ple and useful,by which the direction of rat retina can be identified,andcan be used in quantitative analysis of retina ganglion cells.Key words:retina,flattening;animals,laboratory收稿日期:2001209229 视网膜平铺片用于多种研究之中,包括视网膜逆行标记节细胞定量研究,单个节细胞的定位注射,以及某些电生理研究和免疫组化研究15。有些研究需要在视网膜铺片后确定方向,以便更加精确。目前,如何使用简单方法将视网膜平铺,并能很好地确定视网膜的方向,详细介绍的还不多。我们通过多次实验,找到了一种简单准确的大鼠视网膜定向铺片方法,现介绍如下。1 材料与方法实验动物选用SD大鼠12只,体重200250克,眼部检查无异常。将大鼠分为3组,每组4只。采用腹腔注射过量6%水合氯醛处死动物,有齿镊夹少量碳素在上方球结膜处夹23下,使碳素附着在该处球结膜上,取出眼球。第一组不固定,第二组置于4%多聚甲醛011M PBS固定112小时,第三组置于4%多聚甲醛011M PBS固定24小时以上。在碳素标记相应部位的后巩膜处再次标记碳素,见图1。沿角膜缘后015mm剪开,去掉角膜和晶状体,呈现出眼杯。左手用有齿镊夹住标记处后巩膜组织,右手用结膜剪在对侧分离视网膜。在视盘处将视网膜与其下面紧贴的组织剪开,继续分离,此时视网膜自然卷曲呈纺锤状,尖端指向标记处。将卷曲的视网膜放置在载玻片上,指向标记处的尖端放在上方,见图2。这样根据左右眼就可以确定视网膜的上下鼻颞4个方向。沿鼻上、鼻下、颞上、颞下四个方向剪开视网膜并逐渐展平。将视网膜暴露在空气中自然干燥,可见到视网膜逐渐变得透明,约30分钟左右,视网膜全部变得透明,见图3。此时就可用于拍片,视网膜平整,满足拍摄照片的需要。2 结果不固定组视网膜比较软,分离困难,易于碎裂,第一组8只眼球中,6只视网膜碎裂,不能全部完整832眼科2002年第11卷第4期 Ophthalmol CHN,2002,Vol 11,No.4铺平,2只眼的视网膜中有裂孔,部分视网膜丢失。固定112小时组分离容易,8只眼的视网膜铺片平整,如图3。固定24小时以上组易于分离,铺平后边缘卷曲,不断切去卷曲的视网膜边缘,最后8只眼球的视网膜所剩大小不一。3 讨论视网膜铺片并不是一个复杂的技术,但需要掌握一定的方法才能使铺开的视网膜平整,并且很好地确定出方向。有些研究人员用角膜缘缝线的方法确定视网膜的方向,但在剪开角膜缘后,缝线处就被剪掉,使得后面的视网膜方向容易搞混。有些再次在后巩膜处缝线标记,这样比较浪费时间。我们采用碳素标记简单实用,方法可行,而且节省时间。同时,能够精确地确定出视网膜的各个方向。不固定的视网膜柔软,难于分离铺片。固定24小时以上组视网膜韧性增加,容易分离,但在铺片后边缘卷曲。根据我们的经验,固定时间越长视网膜越韧,越易于分离,但铺片后卷曲也越明显。固定112小时比较合适。以上介绍的方法简单可行,可用于目前的研究之中。然而,这种方法只能满足于视网膜当时的拍摄照片,不能较长期地保存视网膜,今后需要找到一种方法,使平铺片后的视网膜得以较长期的保存。(本文图13见254页)参考文献:1Y oles E,Wheler LA,Schwartz M.2-adrenoreceptor ago2nists are neuroprotective in rat model of optic nerve degenera2tionJ.Invest Ophthalmol Vis Sci,1999,40:65-73.2Freeman EE,Grosskreutz CL.The effects of FK506 onretinal ganglion cells after optic nerve crush J.InvestOphthalmol Vis Sci,2000,41:1111-1115.3Mittag TW,Danias J,Poborenec G,et al.Retinal damageafter 3 to 4 month of elevated intraocularpressure in a ratglaucoma modelJ.Invest Ophthalmol Vis Sci,2000,41:3451-3459.4Levkovitch-Verbin H,Harris-Gerruti G,Groner Y,etal.RGC death in mice after optic nerve crush injury ox2idative stress and neuroprotectionJ.Invest OphthalmolVis Sci,2000,41:4169-4174.5Wheeler LA,Lia R,Woldemussie E.From the lab to theclinic:Activation of an alpha-2 agonist pathway is neu2roprotective in models of retinal and optic nerve injuryJ.Eur J Ophthalmol,1999(suppl),9:S17-S21.(本文编辑:郭家驹)阴道粘膜移植治疗眼窝狭窄一例马 斌(阳新县人民医院眼科,湖北 阳新435200)关键词:粘膜移植;眼窝狭窄/外科学;病例报告中图分类号:R779164 文献标识码:B 文章编号:100424469(2002)0420239201收稿日期:2002205222眼球摘除术后或眼内容物剜除术后,如患者眼窝不能安装义眼,或安装义眼以后出现偏斜,或脱出,即说明存在着不同程度的眼窝狭窄,需要进行结膜囊成形术。用阴道粘膜移植治疗眼窝狭窄未见报道,现将我院一例报告如下。1 病例报告 患者:女,48岁,农民,1998年4月10日因眼窝狭窄入院,3个月前因萎缩性眼球感染,在我院行眼球摘除术。术后一个月,因眼窝狭窄而行部分结膜囊成形术未能矫正,考虑到此患者为女性,已绝经,遂用阴道粘膜移植。操作方法:术前三天,每天用1%碘伏擦洗阴道粘膜,作术前清洁准备。第一步妇产科医生取阴道前中段侧后壁中厚粘膜3cm6cm,创面用1/0羊肠线间断缝合,移植片修剪整齐后,置庆大霉素和生理盐水混合液中;第二步分离眼窝瘢痕组织,并去除多余的瘢痕组织,将移植片铺于分离的创面上,用3/0丝线间断缝合,移植粘膜边缘用1号丝线作三对褥式缝合,从移植片下穹窿粘膜,经下眶骨膜到下睑皮肤面引出,并在皮肤外套一根头皮针软管,眼窝内用凡士林纱球压迫,加压包扎。全身用抗生素,术后10天拆除皮肤外缝线和眼窝内缝线,移植阴道粘膜片色泽鲜红柔软存活,眼窝形成,而顺利配置义眼,随访2年义眼配戴满意。2 讨论 眼窝狭窄一般用唇粘膜或颊粘膜移植治疗,而用阴道粘膜移植未见报道。其优点是阴道粘膜较疏松,易于取材;痛苦小,创面容易愈合;色泽相近,易于存活。因在临床中这种特殊病人不多,仅作1例,报道出来供同道参考。(本文编辑:邬文兰)932眼科2002年第11卷第4期 Ophthalmol CHN,2002,Vol 11,No.4452眼科2002年第11卷第4期 Ophthalmol CHN,2002,Vol 11,No.4