HPLC法测定鞣酸蛋白原料及制剂中鞣酸的含量.pdf

中国药品标准 年第 卷第 期H ，畅 畅 作者简介：王一博，主管药师；研究方向：生物技术。：；-：HPLC 法测定鞣酸蛋白原料及制剂中鞣酸的含量王一博，曲范娜，杜莹，王常禹（黑龙江省食品药品检验检测所，哈尔滨）摘要目的：建立 法测定鞣酸蛋白原料及制剂中鞣酸的含量。方法：使用 -（畅 ，）色谱柱；流动相 为 畅 冰醋酸溶液，流动相 为乙腈，流量 畅 ，梯度洗脱；柱温 畅 ；检测波长 ；进样量 ；使用 畅 软件设计正交试验，最优前处理条件为加入 盐酸溶液 ，乙醇，水解。结果：线性范围为 畅 畅 （r 畅），平均加样回收率为 畅，畅（n ）。结论：本方法简便、准确、专属性强，可用于测定鞣酸蛋白原料及制剂中鞣酸的含量。关键词：高效液相色谱法；鞣酸蛋白；鞣酸；没食子酸；正交试验中图分类号：畅 文献标识码：文章编号：（）Determination of Tannic Acid in Albumin Tannate and Its Preparations by HPLC，（Heilongjiang Institute for Food and Drug Control，Harbin）Abstract Objective：畅Meth-ods：-（畅 ，）畅 ，畅 ；畅 -畅 畅 ，畅Results：畅 畅 （r 畅），畅 畅（n ）畅Conclusion：，畅Key words：；鞣酸（）是存在于植物中的一类水溶性多酚类化合物，具收敛性，内服可用于治疗胃肠道出血，溃疡和水泻等症；外用可使创伤后渗出物中蛋白质凝固形成痂膜，减少分泌和防止感染。鞣酸蛋白（）是根据鞣酸的化学性质而制成的止泻药物，即鞣酸与大豆蛋白混合形成的结合物经干燥制得。鞣酸蛋白经口服后在肠内经胰蛋白酶分解，缓慢释放出鞣酸，使肠黏膜表层内的蛋白质沉淀，形成一层保护膜而减轻刺激，降低炎症渗透物和减少肠蠕动，起收敛止泻作用。由此可见，鞣酸是该药物的有效成分，但是鞣酸蛋白国内外的质量标准，中均不控制鞣酸的含量，无疑这是质量标准中的一个缺失。目前，鞣酸的测定方法有皮粉法、络合滴定法、比色法、高效液相色谱法等。由于皮粉法、络合滴定法、比色法的专属性不强、易受干扰，而高效液相色谱法优于以上方法，因此，本文建立了高效液相色谱法测定鞣酸蛋白的水解产物没食子酸的含量。鞣酸一般是以没食子酸、鞣花酸、儿茶素等为单体通过各种方式结合而形成的多聚体，同时鞣酸中还含有游离的没食子酸，因此，可以用水解后总没食子酸的含量减去水解前游离没食子酸含量，得到聚合没食子酸的含量，即以此结果表示鞣酸的含量。本文所建方法可以控制鞣酸蛋白原料及其制剂中鞣酸的含量，方法简便、准确、专属性强。1仪器与试药 液相色谱配备 检测器（美国赛默飞世尔科技），型分析天平（德国梅特勒托利多公司），-型电热恒温箱（上海森信实验仪器有限公司）。没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号-，含量畅）；鞣酸蛋白原料（生产 ，畅 畅 中国药品标准 年第 卷第 期H企业 提供，批号，）；鞣酸蛋白片（生产企业 提供，批号，）；鞣酸蛋白酵母散（生产企业 提供，批号，；生 产 企 业 提 供，批 号，；生产企业 提供，批号，；生 产 企 业 提 供，批 号，）；乙腈（色谱纯，美国-公司），冰醋酸、盐酸、乙醇均为国产分析纯。2方法与结果2畅 1色谱条件色谱柱为 -（畅 ，）；流动相 为 畅 冰醋酸溶液，流动相 为乙腈，流量 畅 ，按表 条件梯度洗脱；柱温畅 ；检测波长 ；进样量 。表1流动相梯度洗脱条件时间 流动相 流动相 M/O a牋 u/c2畅 2溶液的制备2畅 2畅 1对照品溶液取没食子酸对照品 ，精密称定，加 乙醇溶解、稀释并定容至 量瓶中作为贮备液。精密量取，置 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。2畅 2畅 2供试品溶液取供试品畅 ，精密称定，置水解瓶中，精密加入 乙醇 ，盐酸 ，密塞，置 烘箱中 ，水解液用水转移并定容至 量瓶中，作为水解后总没食子酸测定溶液。取供试品 畅 ，精密称定，精密加入 乙醇，盐酸 ，加水稀释并定容至 量瓶中，作为水解前游离没食子酸测定溶液2畅 3系统适用性与专属性试验取没食子酸对照品溶液，按上述色谱条件连续进样 次，没食子酸色谱峰的保留时间的 为畅，峰面积的 为 畅；没食子酸色谱峰的理论板数在 以上，拖尾因子为 畅，见图。取鞣酸蛋白原料，按“畅 畅”项下方法水解，依法测定，记录色谱图，见图 。取鞣酸蛋白片、鞣酸蛋白酵母散所用辅料，按“畅 畅”项下方法水解并按上述色谱条件分析，结果见图 ，空白辅料对没食子酸色谱峰无干扰。图1没食子酸对照品 色谱图图2鞣酸蛋白原料游离没食子酸 色谱图图3鞣酸蛋白原料水解总没食子酸 色谱图图4鞣酸蛋白片辅料 色谱图图5鞣酸蛋白酵母散辅料 色谱图中国药品标准 年第 卷第 期H ，畅 畅 2畅 4线性关系考察精密量取“畅 畅”项下没食子酸对照品贮备液适量，加水稀释并制成每 含没食子酸 畅 畅 的溶液，按上述色谱条件分析，以浓度（C）为横坐标，以峰面积（A）为纵坐标，得到一阶线性方程为 A 畅 畅 C，r 畅。2畅 5检出限与定量限精密量取“畅 畅”项下没食子酸对照品贮备液，加水稀释并制成每 含没食子酸畅 和畅 的溶液分别作为检出限和定量限，按上述色谱条件分析，得到没食子酸色谱峰的信噪比（）分别为畅 和畅，结果没食子酸的检出限为，定量限为 。2畅 6稳定性试验取没食子酸对照品溶液，分别于，按上述色谱条件分析，结果没食子酸的色谱峰面积的 为畅。2畅 7重复性试验取同一批鞣酸蛋白原料（批号）份，按“畅 畅”项下方法平行操作制备供试品溶液，依法测定，结果含鞣酸以没食子酸计平均为 畅 ，其 为畅。2畅 8加样回收率试验取已知含量的鞣酸蛋白原料 份，每份约，精密称定，分别精密加入“畅 畅”项下没食子酸对照品贮备液，平行操作 次，按“畅 畅”项下方法制备供试品溶液并依法测定，结果没食子酸的平均加样回收率为 畅，为 畅。2畅 9样品测定取各生产企业样品，按“畅 畅”项下方法制备样品溶液，依法测定，鞣酸的含量以水解后总没食子酸的含量减去水解前游离没食子酸的含量表示，结果见表。3讨论3畅 1色谱条件的选择由于没食子酸显弱酸性，使用 畅 冰醋酸溶液作为流动相 抑制其电离，冰醋酸的浓度对没食子酸色谱峰的影响不明显；乙腈的梯度浓度可以明显改变没食子酸色谱峰的保留时间，适当调整可以避免其他杂质峰对没食子酸色谱峰的干扰；考察了其他品牌的色谱柱，均可以获得同样的峰形和分离效果；通过 光谱确定没食子酸的最大吸收波长表2鞣酸蛋白原料及制剂中鞣酸含量测定结果生产企业剂型批号没食子酸总量 游离没食子酸含量 鞣酸含量 耨 畅 畅 畅 原料耨 畅 畅 畅 耨 畅 畅 畅 葺 畅 畅 畅 散剂葺 畅 畅 畅 葺 畅 畅 畅 畅 畅 畅 散剂 畅 畅 畅 畅 畅 畅 葺 畅 畅 畅 散剂葺 畅 畅 畅 葺 畅 畅 畅 葺 畅 畅 畅 散剂葺 畅 畅 畅 葺 畅 畅 畅 葺 畅 畅 畅 片剂葺 畅 畅 畅 葺 畅 畅 畅 为 畅 （图），因此选择 作为检测波长。图6没食子酸色谱峰 光谱图3畅 2样品前处理条件的选择根据文献报道，鞣酸蛋白水解为没食子酸的影响因素主要有酸浓度、醇浓度、水解时间、水解温度。初步试验结果显示，温度越高，鞣酸蛋白水解越彻底，但由于实验条件限制，水解温度最高只能为 。使用 畅 软件对鞣酸蛋白的水解条件设计了 因素 水平的正交试验，以考察鞣酸蛋白的最优水解条件。结果显示，加入 盐酸溶液 ，乙醇 ，水解 为鞣酸蛋白的最优水解条件（图）。，畅 畅 中国药品标准 年第 卷第 期H图7鞣酸蛋白水解条件正交试验结果统计图参考文献卫生部药品标准 化学药品及制剂畅第一册，日本药局方畅第 版-董艳 畅络合滴定法测定鞣柳硼三酸散中鞣酸含量中国药业，（）：-中国药典畅 年版 畅一部 畅附录 蔡垠，吴军，贾晓斌 畅-识别中药材中的鞣质成分中成药，（）：-付文焕，徐璐扬，施孝金，等 畅-测定分心木中鞣质的水解物没食子酸中国中药杂志，（）：-（收稿日期：-）作者简介：汪玉馨，主管药师；研究方向：药检药理。：；-：离子色谱法测定注射用门冬氨酸钾镁中无水门冬氨酸钾镁含量汪玉馨，刘琦，史清水，陆益红（江苏省食品药品检验所，南京）摘要目的：建立测定注射用门冬氨酸钾镁中无水门冬氨酸钾镁含量的方法。方法：采用离子色谱法，色谱柱为（），保护柱为（）；电导检测器，阳离子抑制器；流动相为 甲烷磺酸溶液，流量为 ；柱温 。结果：无水门冬氨酸钾在 畅 畅 范围内，色谱峰面积与其浓度成良好线性关系（Y 畅 X 畅，R），回收率为 畅，为 畅；无水门冬氨酸镁在 畅 畅 范围内，色谱峰面积与其浓度成良好线性关系（Y 畅 X 畅，R），回收率为 畅，为 畅。结论：本方法可简便、快速、准确地对注射用门冬氨酸钾镁中无水门冬氨酸钾镁含量进行测定。关键词：门冬氨酸钾镁；离子色谱法；含量测定中图分类号：畅 文献标识码：文章编号：（）Determination of Potassium Aspartate and Magnesium Aspartate in Potassium Aspartate andMagnesium Aspartate for Injection by Ion Chromatography，（Jiangsu Institute for Drug and Food Control，Nanjing）Abstract Objective：-（）畅Methods：（）（）畅 畅 畅Results：畅 畅 （Y 畅 X 畅，R），畅 畅 畅 畅 畅 （Y 畅 X 畅，R），-畅 畅 畅Conclusion：，畅HPLC法测定鞣酸蛋白原料及制剂中鞣酸的含量HPLC法测定鞣酸蛋白原料及制剂中鞣酸的含量作者：王一博，曲范娜，杜莹，王常禹，Wang Yibo，Qu Fanna，Du Ying，Wang Changyu作者单位：黑龙江省食品药品检验检测所,哈尔滨,150001刊名：中国药品标准英文刊名：Drug Standards of China年，卷(期)：2014(3)本文链接：http:/