GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书.pdf

1GENMED SCIENTIFICS INC.U.S.A GMS10014.2 v.A GENMED 纯化线粒体细胞色素纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书（中文版）氧化酶活性测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途主要用途 GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过测定纯化的可溶性完整线粒体样品中的细胞色素 C 氧化酶的活性，即采用比色法测定受到细胞色素 C 氧化酶催化的氧化反应的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）细胞色素 C 氧化酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。技术背景技术背景 细胞色素 C 氧化酶（Cytochrome c oxidase）存在于真核生物的细胞线粒体上，主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。作为线粒体外膜功能的生物标记，通过线粒体膜上的酶活性变化，来衡量线粒体外膜的完整性：基于还原型细胞色素 C（reduced cytochrome c）转化为氧化型细胞色素 C（oxidized cytochrome c）的变化（550nm 波长），来定量测定细胞色素 C 氧化酶的活性。细胞色素 C 氧化酶反应系统为：产品内容产品内容 GENMED 缓冲液（Reagent A）毫升 GENMED 反应液（Reagent B）毫升 GENMED 稀释液（Reagent C）毫升 GENMED 稳定液（Reagent D）微升 产品说明书 1 份 保存方式保存方式 GENMED 缓冲液（Reagent A）和 GENMED 稀释液（Reagent C）保存在 4冰箱里，其余的保存在20冰箱里；GENMED 反应液（Reagent B）避免光照；有效保证 12 月 用户自备用户自备 1.5 毫升离心管：用于反应液配制的容器 石英比色杯：用于比色的容器 分光光度仪：用于比色分析 实验步骤实验步骤 实验开始前，将20冰箱里的试剂盒中的 GENMED 反应液（Reagent B）GENMED 反应液（Reagent B）置入冰槽里融化，然后移出 100()()+4HO2Hccytochrome4O8Hccytochrome423低吸收峰氧化型氧化酶C细胞色素22高吸收峰还原型 2微升到新的 1.5 毫升离心管，加入 微升 GENMED 稳定液（Reagent D）GENMED 稳定液（Reagent D），轻柔混匀后，室温下避光静置至少 15 分钟（可见颜色变化），置于冰槽里，标记为 GENMED 反应工作液GENMED 反应工作液（注意：见注意事项4），放在暗室里备用。然后进行下列操作。一、测读准备 一、测读准备 1 准备好含有细胞色素 C 氧化酶的样品（例如纯化的线粒体样品等），置于冰槽里融化 2 设定好分光光度仪：温度 25，波长 550nm，时延 5 秒，间隔 10 秒，测读 6 次（共 60 秒），并置零或设置 0 秒和 60 秒各测读 1 次 二、背景对照测定 二、背景对照测定 3 移取 微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的 1 毫升比色杯 4 加入 微升 GENMED 稀释液（Reagent C）GENMED 稀释液（Reagent C）5 放入分光光度仪，置零 6 取出比色杯，加入 微升含有 GENMED 反应液（Reagent B）GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 稳定液（Reagent D）GENMED 稳定液（Reagent D）的 GENMED反应工作液GENMED反应工作液 7 上下倾倒数次，混匀 8 即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照（0 秒读数60 秒读数），正常读数差值为 0.001 至 0.005 三、样品测定 三、样品测定 9 移取 微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的比色杯 10加入 100 微升待测样品（注意：建议总量 2 微克线粒体蛋白：完整线粒体而非裂解形式）11上下倾倒数次，混匀 12放入分光光度仪，置零 13取出比色杯，加入 微升含有 GENMED 反应液（Reagent B）GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 稳定液（Reagent D）GENMED 稳定液（Reagent D）的 GENMED反应工作液GENMED反应工作液 14即刻上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）15即刻放入分光光度仪检测，此为样品读数（0 秒读数60 秒读数），通常活性读数差值为正数 16（选择步骤）重复实验步骤 9 至 15，测读新的样品 四、计算样品活性：四、计算样品活性：方法一：按照操作步骤规定()()111-1mlminC mlmin84.21ml1.0摩尔细胞色素单位样品活性摩尔吸光系数样品蛋白容量背景读数样品读数或()()111-1mgminC mgmin84.21.002mg0摩尔细胞色素单位样品活性摩尔吸光系数样品蛋白量背景读数样品读数或 方法二：未知待测样品蛋白浓度()()111-1mlminC mlmin84.21ml1.0摩尔细胞色素单位样品活性摩尔吸光系数样品蛋白容量样品稀释倍数背景读数）（样品读数或 3111-11-11-11mgminC mgminmlmgmlminC mlmin=摩尔细胞色素单位样品活性样品蛋白浓度摩尔细胞色素单位样品活性或或 注意事项注意事项 1 本产品为 20 次操作，包括背景对照 2 操作时，须戴手套 3 线粒体样品中忌用 DTT 和巯基乙醇等处理 4 每增加 1 个样品，增加 GENMED 反应工作液反应工作液为：GENMED 反应液（反应液（Reagent B）50 微升GENMED稳定液（稳定液（Reagent D）1.5 微升，以此类推。配制反应工作液时，须根据样本数量配制实际工作液容量 5 系统操作过程中，背景测定只需 1 次 6 分光光度计波长严格设置在 550nm，误差 10nm 将不产生信号 7 加样后 3 秒内进行比色测定 8 比色测定后，比色杯须清洗彻底 9 背景空对照 0 秒读数通常 0.2 至 0.8 为理想状态 10背景空对照的正常读数差值（0 秒60 秒）通常为 0.001 至 0.005（正负即可）11样品 0 秒读数通常和背景空对照 0 秒读数一致 12样本测定 60 秒读数低于 0 秒读数表明具有酶活性 13样本酶活性单位通常在 0.4 至 40 毫单位 14酶活性单位浓度定义：在 25室温下，pH 7.0 的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）氧化 1 微摩尔的细胞色素 C 15建议待测样本线粒体蛋白浓度为 2 微克/100 微升；如果样本酶活性过低或过高，即 60 秒读数不变或为零，则可以增加或降低样本量（本公司提供GENMED纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒GMS30034.1为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和 GENMED 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒GMS10059）16本公司提供系列线粒体试剂产品 质量标准质量标准 1 本产品经鉴定性能稳定 2 本产品经鉴定检测敏感 使用承诺使用承诺 杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。友情提醒 友情提醒 4IF IT DOESNT WORK，RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。订购信息订购信息 编号 名称 规格 GMS10014.2 GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10014.2A GENMED 缓冲液（Reagent A）100 毫升 GMS10014.2B GENMED 反应液（Reagent B）10 毫升 GMS10014.2C GENMED 稀释液（Reagent C）10 毫升 GMS10014.2D GENMED 稳定液（Reagent D）1 毫升 GMS10014.1 GENMED 线粒体外膜功能检测试剂盒 20 次 GMS10014.3 GENMED 细胞/组织悬液细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10014.4 GENMED 纯化细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10014.5 GENMED 真菌/酵母细胞悬液细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10014.6 GENMED 植物细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10059 GENMED 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 20 次 GMS30034.1 GENMED 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次 产品编号 名称 规格 产品编号 名称 规格 GMS10006.1 动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒 10/50 次GMS10006.2 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒 10/50 次GMS10006.3 动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10006.4.1 动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒 50 次 GMS10006.4.2 动物硬组织活性线粒体分离试剂盒 50 次 GMS10006.4.3 动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10013.1 纯化线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 100 次GMS10013.2 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 20 次 GMS10013.3 完全线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 20 次 GMS10013.4 活体组织线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 10 次 GMS10013.5 真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 20 次 GMS10014.1 线粒体外膜功能检测试剂盒 20 次 GMS10014.2 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10014.3 细胞/组织悬液细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10014.4 纯化细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10014.5 真菌/酵母细胞悬液细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10014.6 植物细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次 GMS10015 线粒体功能詹纳斯绿 B（JGB）染色试剂盒 20 次 GMS10016.1 细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 20 次 GMS10016.2 细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 100 次 GMS10016.3 活体组织氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 8/20 次 GMS10016.4 活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 40/100次 GMS10016.5 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 50 次 5GMS10016.6 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 50 次 GMS10016.7 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 20 次 GMS10016.8 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 50 次 GMS10067.1 活体细胞氧化应激活性氧（ROS）染色试剂盒 100 次 GMS10067.2 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）染色试剂盒 100 次 GMS10067.3 活体细胞氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒 100 次 GMS10111.1 细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒 20 次 GMS10111.2 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒 50 次 GMS10104.1 纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 20 次 GMS10104.2 纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 20 次 GMS10104.3 膜电位依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 20 次 GMS10104.4 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 20 次 GMS10104.5 膜电位依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 20 次 GMS10104.6 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 20 次 GMS10017.1 活体细胞线粒体损伤/氧化（NAO）荧光测定试剂盒 20/200次 GMS10017.2 纯化线粒体损伤/氧化（NAO）荧光测定试剂盒 20/200次 GMS10017.3 真菌/酵母细胞线粒体损伤/氧化（NAO）荧光测定试剂盒 20/200次 GMS10018 纯化线粒体溶解试剂盒 20 次 GMS10019.1 活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒 100/200次 GMS10019.2 植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒 20 次 GMS10019.3 真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒 100 次 GMS10020.1 活体细胞线粒体跟踪试剂盒 100 次 GMS10020.2 活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒 20 次 GMS20023.2 全血线粒体 DNA 萃取试剂盒 10/20 次GMS20023.1 纯化线粒体 DNA 萃取试剂盒 20 次 GMS20023.3 细胞/组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 20 次 GMS20023.4 细胞/组织基因组/线粒体 DNA 同步萃取试剂盒 10/20 次GMS20023.5 动物血小板线粒体 DNA 萃取试剂盒 10/20 次GMS20023.6 真菌/酵母细胞线粒体 DNA 萃取试剂盒 10/20 次GMS20023.7 植物线粒体 DNA 萃取试剂盒 10/20 次GMS20023.8 动物硬组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 10/20 次GMS10047 非突触体脑组织线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10048.1 植物线粒体粗提分离试剂盒 10 次 GMS10048.2 植物活性线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10048.3 植物高质纯化线粒体分离试剂盒 10 次 6GMS10049.1 真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒 10 次 GMS10049.2 真菌/酵母细胞活性线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10049.3 真菌/酵母细胞高质纯化线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10050 细胞 ATP 生物发光法定量检测试剂盒 50 次 GMS10059 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 20 次 GMS10062.1 动物血小板线粒体粗提分离试剂盒 10 次 GMS10062.2 动物血小板活性线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10062.3 动物血小板高质纯化线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10099.1 动物全血线粒体粗提分离试剂盒 10 次 GMS10099.2 动物全血活性线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10099.3 动物全血高质纯化线粒体分离试剂盒 10 次 GMS50001 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 50 次 GMS50003.2 线粒体超氧化物歧化酶（Mn/Fe SOD）分离试剂盒 50 次 GMS50004 超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒 5 次 GMS30034.1 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次 GMS30034.2 细胞/组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次 GMS30034.3 真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次 GMS30034.4 植物线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次 GMS30034.5 全血线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次 GMS30034.6 动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次 GMS50005 NADH 活性定量检测试剂盒 20/80 次GMS50006 乳酸脱氢酶（LDH）总活性定量检测试剂盒 20/80 次GMS50007 动物线粒体呼吸链复合物 I（NADH辅酶 Q 还原酶）活性定量检测试剂盒 20 次（10 样本）GMS50008 动物线粒体呼吸链复合物 II（琥珀酸辅酶 Q 还原酶）活性定量检测试剂盒 20 次 GMS50009 动物线粒体呼吸链复合物 III（辅酶 Q细胞色素 C 还原酶）活性定量检测试剂盒 20 次（10 样本）GMS50010 动物线粒体呼吸链复合物 IV（正铁细胞色素 C氧化还原酶）活性定量检测试剂盒 20 次 GMS50083 动物线粒体呼吸链复合物 V（F0F1-ATP 酶/ATP 合成酶）活性定量检测试剂盒 20 次（10 样本）GMS10063.1 海洋动物（虾贝类）线粒体粗提分离试剂盒 10/50 次GMS10063.2 海洋动物（虾贝类）活性线粒体分离试剂盒 10/50 次GMS10063.3 海洋动物（虾贝类）高质纯化线粒体分离试剂盒 10 次 GMS10095 线粒体膜通道孔（MPTP）检测试剂盒 20 次 GMS12198 纯化线粒体冻存液 50 毫升 GMS50067 NADPH 活性定量检测试剂盒 20/80 次GMS50068.1 纯化线粒体 L3 羟酰基CoA 脱氢酶 II 型淀粉样蛋白结合的乙醇脱氢酶（HADHII/ABAD）活性定量检测试剂盒 20 次 7GMS50068.2 细胞 L3 羟酰基CoA 脱氢酶 II 型淀粉样蛋白结合的 乙醇脱氢酶（HADHII/ABAD）活性定量检测试剂盒 20 次 GMS50068.3 组织 L3 羟酰基CoA 脱氢酶 II 型淀粉样蛋白结合的 乙醇脱氢酶（HADHII/ABAD）活性定量检测试剂盒 20 次 GMS50084.1 纯化线粒体 NADH 氧化酶活性定量检测试剂盒 20 次 GMS50084.2 细胞线粒体 NADH 氧化酶活性定量检测试剂盒 20 次 GMS50084.3 组织线粒体 NADH 氧化酶活性定量检测试剂盒 20 次 GMS50095.1 细胞 NADPH 氧化酶活性化学发光法定量检测试剂盒 20 次（10 样本）GMS50095.2 组织 NADPH 氧化酶活性化学发光法定量检测试剂盒 20 次（10 样本）GMS50096.1 细胞 NADPH 氧化酶活性比色法定量检测试剂盒 20 次（10 样本）GMS50096.2 组织 NADPH 氧化酶活性比色法定量检测试剂盒 20 次（10 样本）GMS10090 NADP 活性定量检测试剂盒 20 次 GMS10097 纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒 20 次 GMS10098 纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂盒 20 次 GMS10101 纯化线粒体肿胀比色法测定试剂盒 50 次 GMS10102 活体细胞线粒体肿胀流式细胞仪测定试剂盒 20 次 GMS10103.1 细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 20 次 GMS10103.2 组织琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 20 次 GMS50097.1 细胞钙离子浓度比色法定量检测试剂盒 20 次 GMS50097.2 组织钙离子浓度比色法定量检测试剂盒 20 次 GMS50098.1 细胞镁离子浓度比色法定量检测试剂盒 20 次 GMS50098.2 组织镁离子浓度比色法定量检测试剂盒 20 次 联系我们联系我们 关于订购详情或技术支持，欢迎来电、来函、传真或电邮 GENMED SCIENTIFICS INC.U.S.A 大中华区上海分公司 上海杰美基因医药科技有限公司 上海市浦东新区张江高科技园区哈雷路 1011 号 301 室 邮编：201203 技术部电话：[phone] X 101；13661801385 市场部电话：[phone] X 102；13311661756 订购电话：[phone] X 104 传真：[phone] Email：infosh- 主页：www.sh- 8 GENMED SCIENTIFICS INC.U.S.A 438 MASS AVENUE，SUITE 223 ARLINGTON，MA 02474 U.S.A.TEL：[phone]