原苏木素B抗结肠癌细胞的作用及机制.pdf

基础研究原苏木素 B 抗结肠癌细胞的作用及机制金少雄1,邱成志2,林清江1,曾荣耀1,杨锦锋1,许泽波1摇(1郾 福建医科大学附属第二医院急诊科,福建摇 泉州摇 362000;2郾 福建医科大学附属第二医院普外科,福建摇 泉州摇 362000)摘摇 要摇 目的:研究原苏木素 B(PSB)对人结肠癌 SW620、SW480 细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探讨其抗结肠癌细胞的作用及机制。方法:实验1:将 SW620、SW480 细胞各分为7 组,分别为对照组(不加药物经 DMSO 处理)和PSB鄄1 PSB鄄6 组(分别给予 6郾 25 滋g/ml、12郾 50 滋g/ml、25郾 00 滋g/ml、50郾 00 滋g/ml、100郾 00 滋g/ml 和 200郾 00 滋g/ml PSB),并分别处理24 h、48 h、72 h 和 96 h。实验 2:将结肠癌 SW620、SW480 细胞各分为 4 组:对照组(不加药物经 DMSO 处理)、PSB鄄7 PSB鄄9组(分别给予 17郾 5 滋g/ml、35郾 0 滋g/ml 和 70郾 0 滋g/ml PSB 处理 24 h);另外 SW620 细胞中又分为实验 1 组(25郾 0 ng/ml IGF鄄1处理 24 h)、实验 2 组(25郾 0 ng/ml IGF鄄1+35郾 0 滋g/ml PSB 处理 24 h)、实验 3 组(1 滋mol/L AZD2858 处理 24 h)和实验 4 组(1 滋mol/L AZD2858+35郾 0 滋g/ml PSB 处理 24 h)。检测 SW620、SW480 细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡情况、高尔基磷蛋白 3(GOLPH3)及 SW620 细胞磷酸化蛋白激酶 B(p鄄AKT)、磷酸化 p70 核糖体蛋白 S6 激酶(p鄄p70S6K)、茁鄄连环蛋白(茁鄄catenin)的表达水平。结果:PSB 以浓度和时间依赖效应抑制 SW620、SW480 细胞的增殖。在 SW620 细胞中,PSB鄄8 组与对照组的细胞迁移数目分别为(367郾 67依8郾 18)个和(890郾 00依19郾 65)个,细胞侵袭数目分别为(122郾 33依9郾 18)个和(374郾 67依13郾 47)个,细胞凋亡率分别为(27郾 74依2郾 57)%和(6郾 13依0郾 45)%,PSB鄄7 PSB鄄9 组和对照组的 GOLPH3 蛋白相对表达量分别为(0郾 52依0郾 03)、(0郾 36依0郾 03)、(0郾 07依0郾 01)和(0郾 96依0郾 12),PSB鄄8 组、对照组及实验 2 组中的 p鄄AKT 的蛋白相对表达量分别为(0郾 10依0郾 05)、(1郾 04依0郾 34)和(10郾 00依1郾 61),p鄄p70S6K 的蛋白相对表达量分别为(0郾 40依0郾 14)、(1郾 05依0郾 12)和(2郾 52依0郾 29),茁鄄catenin 的蛋白相对表达量分别为(0郾 14依0郾 07)、(0郾 99依0郾 23)、(6郾 06依0郾 89),对照组、PSB鄄8 组、实验 3 组和实验 4 组的相对荧光强度值分别为(1郾 00依0郾 07)、(0郾 14依0郾 06)、(1郾 98依0郾 16)和(1郾 31依0郾 14),差异均有统计学意义(均 P0郾 001);在 SW480 细胞中,PSB鄄8 组与对照组的细胞迁移数目分别为(314郾 33依5郾 31)个和(589郾 67依22郾 87)个,细胞侵袭数目分别为(75郾 67依7郾 04)个和(196郾 33依11郾 90)个,细胞凋亡率分别为(22郾 05依0郾 90)%和(7郾 07依0郾 56)%,PSB鄄7 PSB鄄9 组和对照组的 GOLPH3 蛋白相对表达量分别为(0郾 83依0郾 01)、(0郾 54依0郾 02)、(0郾 48依0郾 03)和(1郾 00依0郾 06),差异均有统计学意义(均 P0郾 001)。结论:PSB通过下调 GOLPH3 表达,抑制 PI3K/AKT/mTOR 和 Wnt/茁鄄catenin 信号通路,从而抑制结肠癌 SW620、SW480 细胞的增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。关键词摇 原苏木素 B;高尔基磷蛋白 3;结肠癌;磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B/哺乳动物西罗莫司靶蛋白;Wnt 家族分泌蛋白/茁鄄连环蛋白基金项目:福建省中医药科技项目项目编号:2021zyyj73通讯作者:邱成志The effect and mechanism of protohematoxylin B on colon cancer cells摇 摇JIN Shao鄄xiong1,QIU Cheng鄄zhi1,LINQing鄄jiang1,et al(1郾 Emergency Department of the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University,Quanzhou 362000,China;2郾Department of General Surgery,The Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University,Quanzhou 362000,China)Abstract:Objective To study the effect of pro鄄hematoxylin B(PSB)on the proliferation,migration,invasion,and apoptosis ofhuman colon cancer SW620 and SW480 cells,and to explore its anti鄄colon cancer cell effect and mechanism郾 Method Experiment 1:SW620 and SW480 cells were divided into 7 groups,namely the control group(treated with DMSO without drugs)and the PSB鄄1 PSB鄄6 groups(treated with 6郾 25,12郾 50,25郾 00,50郾 00,100郾 00 and 200郾 00滋g/ml PSB,respectively)and treated for 24,48,72,and 96 hours,respectively;Experiment 2:Colon cancer SW620 and SW480 cells were divided into four groups:control group(treatedwith DMSO without drugs),PSB鄄7鄄PSB鄄9 group(treated with 17郾 5,35郾 0,and 70郾 0滋g/ml PSB treatment for 24 hours,respective鄄ly);In addition,SW620 cells were divided into experimental group 1(25郾 0 ng/ml IGF鄄1 treatment for 24 hours)and experimentalgroup 2(25郾 0 ng/ml IGF鄄1+35郾 0 滋g/ml PSB treatment for 24 hours),experimental group 3(1 滋 mol/L AZD2858 treatment for 24hours and experimental group 4(1 滋 mol/L AZD2858+35郾 0 滋g/ml PSB treatment for 24 hours)郾 Detection of cell proliferation,mi鄄gration,invasion,apoptosis,and Golgi phosphoprotein 3(GOLPH3),phosphorylated protein kinase B(p鄄AKT),p70 ribosomal pro鄄tein s6 kinase(p鄄p70S6K),茁鄄catenin(茁鄄catenin)expression郾 Results PSB inhibited the proliferation of SW620 and SW480 cells ina concentration and time鄄dependent manner郾 In SW620 cells,the number of cell migration was(367郾 67 依 8郾 18)and(890郾 00 依7602吉林医学 2023 年 8 月第 44 卷第 8 期19郾 65)in psb鄄8 group and control group,the number of cell invasion was(122郾 33 依 9郾 18)and(374郾 67 依 13郾 47),the apoptosisrate was(27郾 74 依 2郾 57)%and(6郾 13 依 0郾 45)%respectively,and the relative expression of GOLPH3 protein in PSB鄄7 PSB鄄9group and control group was(0郾 52 依 0郾 03),(0郾 36 依 0郾 03),(0郾 07 依 0郾 01)and(0郾 96 依 0郾 12),respectively,The relative proteinexpression of p鄄Akt in PSB鄄8 group,control group and experimental group 2 was(0郾 10 依 0郾 05),(1郾 04 依 0郾 34)and(10郾 00 依1郾 61)respectively,and the relative protein expression of p鄄p70s6k was(0郾 40 依 0郾 14),(1郾 05 依 0郾 12)and(2郾 52 依 0郾 29)respec鄄tively,the relative expression levels of 茁鄄catenin protein were(0郾 14 依 0郾 07),(0郾 99 依 0郾 23),(6郾 06 依 0郾 89)respectively郾 Therelative fluorescence intensity values of control group,PSB鄄8 group,experimental group 3 and experimental group 4 were(1郾 00 依0郾 07),(0郾 14 依 0郾 06),(1郾 98 依 0郾 16)and(1郾 31 依 0郾 14)respectively,the difference was statistically significant(allP0郾 001);In SW480 cells,the number of cell migration was(314郾 33 依 5郾 31)and(589郾 67 依 22郾 87)in PSB鄄8 group and control group,thenumber of cell invasion was(75郾 67 依 7郾 04)and(196郾 33 依 11郾 90)respectively,and the apoptosis rate was(22郾 05 依 0郾 90)%and(7郾 07 依 0郾 56)%respectively郾 The relative expression of GOLPH3 protein in PSB鄄7 PSB鄄9 group and control group was(0郾 83 依0郾 01),(0郾 54 依 0郾 02),(0郾 48 依 0郾 03)and(1郾 00 依 0郾 06)respectively郾with statistical significance(all P 0郾 001).Conclusion PSB inhibits the PI3K/AKT/mTOR and Wnt/茁鄄catenin signaling pathways by downregulating the expression of GOLPH3,thereby inhibiting the proliferation,migration,and invasion of colon cancer SW620 and SW480 cells,and inducing their apoptosis郾Key Words:Protosappanin B;Golgi phosphoprotein 3;Colon cancer;PI3K/AKT/mTOR;Wnt/茁鄄catenin摇 摇 结肠癌是一种高发病率的消化道恶性肿瘤,临床治疗主要包括手术、化疗、靶向药物和免疫治疗1。原苏木素 B(PSB)属于原苏木素类的活性物质,具有抗炎、抗菌及抗肿瘤的作用。本实验通过研究 PSB 对人结肠癌细胞的作用,探索其抗结肠癌细胞的作用机制。1摇 材料与方法1郾 1摇 材料:细胞株:结肠癌 SW620、SW480 细胞,均购自中国科学院上海生物化学与细胞研究所。药品与试剂 PSB,规格:20 mg/支,批号:B21622鄄201806,上海源叶生物科技有限公司生产;高尔基磷蛋白 3(GOLPH3)、蛋白激酶 B(AKT)、磷酸化蛋白激酶 B(p鄄AKT)抗体,均由英国 Abcam 公司生产;p70 核糖体蛋 白 S6 激 酶(p70S6K)、磷 酸 化 p70S6K(p鄄p70S6K)、茁鄄连环蛋白(茁鄄catenin)抗体,均由美国Santa cruz 公司生产;TOPflash 报告质粒、pSV鄄茁鄄Gal乳糖苷酶质粒,均由武汉淼灵生物科技有限公司生产;萤火虫荧光素酶底物、茁鄄Gal 酶底物,均由南京碧云天公司生产。仪器 DTX880 酶标仪、Gallios 流式细胞仪,均为美国 Beckman Coulter 公司产品。1郾 2摇 实验方法1郾 2郾 1摇 细胞培养:将结肠癌 SW620、SW480 细胞置于含有 RPMI Medium 1640 和 10%胎牛血清培养基中,放入 37益、湿度饱和、5%CO2+95%空气培养箱中培养。1郾 2郾 2摇细胞分组与给药方法:实验 1 将 SW620、SW480 细胞各分为 7 组,分别为对照组(不加药物经 DMSO 处理)和 PSB鄄1 PSB鄄6 组(分别给予6郾 25 滋g/ml、12郾 50 滋g/ml、25郾 00 滋g/ml、50郾 00 滋g/ml、100郾 00 滋g/ml 和200郾 00 滋g/ml PSB),并分别处理24 h、48 h、72 h 和 96 h。实验 2 将结肠癌 SW620、SW480 细胞各分为 8 组:对照组(不加药物经 DMSO处理)、PSB鄄7 PSB鄄9 组(分 别 给 予17郾 5 滋g/ml、35郾 0 滋g/ml 和 70郾 0 滋g/ml PSB 处 理 24 h),另 外SW620 细胞中又分为实验 1 组(25郾 0 ng/ml IGF鄄1 处理 24 h)、实验 2 组(25郾 0 ng/ml IGF鄄1+35郾 0 滋g/mlPSB 处理 24 h)、实验 3 组(1 滋mol/L AZD2858 处理24 h)和实验 4 组(1 滋mol/L AZD2858+35郾 0 滋g/mlPSB 处理24 h)。1郾 2郾 3摇用 CCK鄄8 法测定细胞活性2:取对数生长期的结肠癌 SW620、SW480 细胞,调整细胞密度为1伊104cell/ml,接种于 96 孔板中,100 滋l/孔,每组设置 4 个对照孔和复孔,箱中培养 24 h 后,按“实验1冶进行分组和处置,加入 CCK鄄8 溶液。用酶标仪在490 nm 处测定各孔光密度(OD)值。增殖抑制率=(1-OD 实验组)/OD 对照组伊100%。用 Logit 法计算不同时间点半抑制浓度(IC50)。1郾 2郾 4摇用平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力3:取对数生长期的SW620、SW480 细胞,胰酶进行消化,接种2伊103个细胞到 6 孔培养板中,培养 24 h后,按“实验2 中对照组和 PSB鄄7 PSB鄄9 组冶进行分组和处置,继续培养24 h,待对照组细胞集落已可见,停止培养。细胞用磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤 2 次后,用100%甲醇在固定10 min,加入 0郾 5%结晶紫染液染色30 min,PBS 洗涤细2 次,计数。1郾 2郾 5摇用 Transwell 法检测细胞的迁移及侵袭能力4:取基质胶于 4益 冰箱过夜溶化,3益 孵箱30 min成胶。取对数生长期的 SW620、SW480 细胞,调整浓度为每孔 2伊105个接种于上室中,在下室加8602吉林医学 2023 年 8 月第 44 卷第 8 期入 10%血清,按“实验 2 中对照组和 PSB鄄8 组冶进行分组和处置,培养 24 h 后,弃去培养液,加入 4%甲醇 1 ml,室温固定 30 min,用 PBS 漂洗 3 次,用含有0郾 5%结晶紫 500 滋l 染色 20 min 后,用 PBS 溶液清洗,在倒置显微镜下观察细胞,拍照计数。1郾 2郾 6摇用 Western 印迹法检测信号通路相关蛋白的表达水平5:按“实验 2冶进行分组和处置,收集各组细胞用 PBS 洗涤,加入 RIPA 液置于冰上作用20 min,BCA 法进行蛋白浓度测定。分别将提取的细胞总蛋白用 10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶进行电泳(每个泳道 40 滋g),湿转至 PVDF 膜,浸泡在含 5%脱脂奶粉的封闭液中,室温孵育 1 h。分别加入 p鄄AKT、AKT、p鄄p70S6K、p70S6K、茁鄄catenin、GOLPH3、GAPDH,4 益 孵育过夜。PBST 漂洗 3 次,加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗溶液(1 颐5 000),室温孵育 1 h,PBST 漂洗 3 次,ECL 化学发光试剂检测。1郾 2郾 7摇 用 Annexin V鄄FITC/PI 流式细胞术检测细胞的凋亡情况6:取对数生长期的 SW620、SW480 细胞,以每孔 5伊105 个接种于 6 孔板中,置于孵育箱24 h 后,按“实验 2 PSB鄄8 组冶 进行分组和处置。24 h后收集细胞,PBS 洗涤 2 次后,加入 PBS 150 滋l重悬细胞,向细胞悬液内加入 Annexin V鄄FITC 结合液 195 滋l、Annexin V鄄FITC 5 滋l 和碘化丙啶染色液10 滋l,避光、室温孵育 10 min,上机检测。1郾 2郾 8摇 用 Topflash 报告基因检测 Wnt/茁鄄catenin 信号通路的活性7:取对数生长期的 SW620 细胞以每孔2伊105个接种于24 孔板中,于37益、5%CO2培养箱中培养过夜。将 TOPflash 报告质粒与 pSV鄄茁鄄Gal乳糖苷酶质粒(3 颐1)共同转染进 SW620 细胞中。转染 6 h 后,更换新鲜培养基,按“实验 2冶中的对照组、PSB鄄8 组、实验 3 组、实验 4 组进行分组和处置。24 h 后弃培养液,用 PBS 缓冲液洗 1 次,加入 Har鄄vest 缓冲液 100 滋l 作用 10 min 后,裂解细胞,轻轻吸取其中 40 滋l 置于离心管中,再加入荧光素酶底物或 茁鄄Gal 酶底物 20 滋l。1郾 3摇 统计学处理:用 GraphPad Prism 7 软件进行统计分析。计量资料以均数依标准差(x依s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较用 LSD鄄t 法。2摇 结果2郾 1摇 PSB 抑制结肠癌细胞增殖:如表 1 所示,PSB 对SW620、SW480 细胞有明显抑制作用,呈浓度、时间依赖效应(P 0郾 05,P 0郾 01,P 0郾 001)。PSB 处理SW620 和 SW480 细 胞 24 h 的 IC50 分 别 为35郾 25 滋g/ml 和 52郾 15 滋g/ml。在 SW620 细 胞 中PSB鄄7 PSB鄄9 组和对照组的集落数分别为(204郾 50依12郾 82)滋g/ml、(122郾 25 依 19郾 43)滋g/ml、(68郾 50 依24郾 15)滋g/ml 和(329郾 00依14郾 81)滋g/ml,在 SW620 细胞中对照组和 PSB鄄7 PSB鄄9 组的集落数分别为(191郾 25 依 9郾 04)滋g/ml、(123郾 00 依 6郾 04)滋g/ml、(57郾 75依4郾 15)滋g/ml 和(259郾 25依11郾 48)滋g/ml,PSB鄄7 PSB鄄9 组与对照组比较,SW620、SW480 结肠癌细胞的增殖能力均显著下降,呈浓度依赖效应,差异均有统计学意义(均 P0郾 001)。见图1。表 1摇 PSB 处理后结肠癌细胞的增殖抑制率(x依s)浓度(滋g/ml)抑制增殖率(%)24 hSW620SW48048 hSW620SW48072 hSW620SW48096 hSW620SW48000郾 00依11郾 760郾 00依6郾 200郾 00依19郾 280郾 00依6郾 730郾 00依7郾 410郾 00依6郾 000郾 00依6郾 080郾 00依7郾 766郾 2511郾 77依13郾 620郾 79依3郾 6912郾 23依19郾 277郾 98依4郾 77于11郾 76依18郾 008郾 52依3郾 51盂6郾 71依25郾 6111郾 84依3郾 16淤12郾 5015郾 84依8郾 3011郾 15依2郾 14淤28郾 12依13郾 8823郾 40依2郾 41盂28郾 75依12郾 81淤32郾 63依2郾 97盂愚31郾 59依17郾 37淤40郾 00依2郾 94盂愚25郾 0025郾 00依10郾 88淤19郾 53依2郾 94于33郾 73依14郾 40淤34郾 76依4郾 58盂42郾 78依12郾 04于40郾 68依3郾 64盂虞46郾 36依12郾 84于50郾 70依2郾 92盂愚50郾 0026郾 02依13郾 68淤32郾 57依5郾 12盂43郾 74依17郾 44淤47郾 14依1郾 20盂榆59郾 61依14郾 51于榆57郾 37依2郾 81盂愚68郾 17依12郾 85盂虞60郾 23依2郾 83盂愚100郾 0033郾 46依21郾 28淤43郾 74依3郾 87盂52郾 82依11郾 03于58郾 56依2郾 41盂虞65郾 57依14郾 07盂70郾 08依2郾 97盂愚75郾 03依11郾 91盂榆76郾 05依3郾 30盂愚200郾 0039郾 09依24郾 14淤56郾 33依3郾 90盂61郾 72依16郾 34于67郾 65依2郾 67盂榆71郾 73依12郾 30盂79郾 30依5郾 65盂虞79郾 35依8郾 21盂榆83郾 16依1郾 60盂愚摇 注:同一时间不同浓度比较,淤P0郾 05,于P0郾 01,盂P0郾 001;同一时间不同浓度比较,榆P0郾 05,虞P0郾 01,愚P0郾 0012郾 2摇PSB 抑制结肠癌细胞迁移、侵袭能力:在SW620 细胞中,PSB鄄8 组与对照组的细胞迁移数目分别为(367郾 67依8郾 18)个和(890郾 00依19郾 65)个;在SW480 细胞中,PSB鄄8 组与对照组的细胞迁移数目分别为(314郾 33 依5郾 31)个和(589郾 67 依22郾 87)个。PSB鄄8 组与对照组比较,结肠癌细胞的迁移数均显著减少,差异均有统计学意义(均 P0郾 001)。见图2A。在 SW620 细胞中,PSB鄄8 组与对照组的细胞侵袭数目分别为(122郾 33依9郾 18)个和(374郾 67依13郾 47)个;在 SW480 细胞中,PSB鄄8 组与对照组的细胞侵9602吉林医学 2023 年 8 月第 44 卷第 8 期图 1摇 PSB 对结肠癌细胞克隆形成的影响袭数目分别为(75郾 67依7郾 04)个和(196郾 33依11郾 90)个。PSB鄄8 组与对照组比较,结肠癌细胞的侵袭数均显著减少,差异均有统计学意义(均 P0郾 001)。见图 2B。图 2摇 PSB 对结肠癌细胞迁移力(A)和侵袭力(B)的影响2郾 3摇 PSB 抑制结肠癌细胞中 GOLPH3 蛋白的表达:在 SW620 细胞中,PSB鄄7 PSB鄄9 组和对照组的GOLPH3 蛋白相对表达量分别为 0郾 52依0郾 03、0郾 36依0郾 03、0郾 07依0郾 01 和 0郾 96依0郾 12,在 SW480 细胞中,PSB鄄7 PSB鄄9 组和对照组的 GOLPH3 蛋白相对表达量分别为 0郾 83依0郾 01、0郾 54依0郾 02、0郾 48依0郾 03 和1郾 00依 0郾 06。在两种细胞中 PSB鄄7 PSB鄄9 组的GOLPH3 蛋白相对表达量与对照组比较,差异均有统计学意义(均 P0郾 01)。见图 3。2郾 4摇PSB 下调 SW620 细胞信号通路相关蛋白表达:在 SW620 细胞中,实验 2 组、PSB鄄8 组和对照组的 p鄄AKT 蛋白相对表达量分别为 10郾 00 依 1郾 61、0郾 10依0郾 05 和 1郾 04依0郾 34;p鄄p70S6K 蛋白相对表达量分别为 2郾 52 依0郾 29、0郾 40 依0郾 14、1郾 05 依0郾 12;茁鄄catenin 蛋白相对表达量分别为 6郾 06依0郾 89、0郾 14依0郾 07、0郾 99依0郾 23。在 SW620 细胞中 PSB鄄8 组中 p鄄AKT、p鄄p70S6K 和 茁鄄catenin 的蛋白相对表达量与对照组相应蛋白相比明显降低(P0郾 05)。但在相同浓度 PSB 处理下加入 IGF鄄1 的实验 2 组中的 p鄄AKT、p鄄p70S6K 和 茁鄄catenin 的蛋白相对表达量比PSB鄄8 组相应蛋白的相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(P0郾 01)。见图 4。图 3摇 PSB 影响结肠癌细胞 GOLPH3 蛋白的表达2郾 5摇 PSB 对结肠癌细胞凋亡的影响:在 SW620 细胞中,PSB鄄8 组和对 照 组 的 细 胞 凋 亡 率 分 别 为(27郾 74依2郾 57)%和(6郾 13依0郾 45)%;在 SW480 细胞中,PSB鄄8 组和对照组的细胞凋亡率分别为(22郾 05依0702吉林医学 2023 年 8 月第 44 卷第 8 期图 4摇 PSB 对 SW620 细胞相关信号通路蛋白表达的影响0郾 90)%和(7郾 07依0郾 56)%。与对照组比较,PSB鄄8组的细胞凋亡率均显著上调,差异均有统计学意义(均 P0郾 001)。2郾 6摇PSB 抑制 SW620 细胞 Wnt 信号通路活性:在SW620 细胞中,对照组、PSB鄄8 组、实验 3 组和实验 4组的相对荧光强度值分别为 1郾 00依0郾 07、0郾 14依0郾 06、1郾 98依0郾 16 和1郾 31依0郾 14,与对照组比较,PSB鄄8 组的相对荧光强度值明显降低,差异有统计学意义(P0郾 01);与 PSB鄄8 组比较,实验4 组的相对荧光强度值明显上调,差异有统计学意义(P0郾 01)。3摇 讨论摇 摇 苏木素的提取物可对多种肿瘤细胞产生显著抑制作用8。本研究发现,PSB 抑制结肠癌细胞增殖和转移,促进凋亡。文献报道,PSB 可显著抑制除 SV鄄HUC鄄1 细胞外的多个膀胱癌细胞系的生长9。Liu等10研究证明,SV鄄HUC鄄1 细胞系中的 GOLPH3 表达明显低于其他膀胱癌细胞系。因此,本课题组推测PSB 的抗肿瘤作用可能与癌细胞中 GOLPH3 的表达有关。本研究结果发现,经 PSB 处理后,SW620 和SW480 细胞中 GOLPH3 的表达显著下调。同时,本课题组前期实验结果证实,SW620 和 SW480 细胞中的GOLPH3 表达明显高于其他结肠癌细胞系11。这些结果证实了本研究的假设,即 PSB 通过抑制 GOLPH3表达对结肠癌细胞发挥抗肿瘤作用。PI3K/Akt/mTOR 与 Wnt/茁鄄catenin 信号通路在结肠癌发生发展过程中扮演重要角色,这些通路的异常激活与癌细胞的增殖和转移相关,并受多种上游蛋白调控12鄄13。GOLPH3 是这些信号通路的上游组成部分,结合本研究结果显示 PSB 显著抑制PI3K/AKT/mTOR、Wnt/茁鄄catenin 信号通路的活性,但可被相应的信号通路激动剂拮抗,提示 PSB 可能作用于上述信号通路共同的上游调控位点。因此,PSB 抑制信号通路活性的机制是下调上游的 GOL鄄PH3 表达。4摇 参考文献1摇 Xu R,Wang W,Zhu B,et al.Disease characteristics andtreatment patterns of Chinese patients with metastatic colorectalcancer:a retrospective study using medical records from ChinaJ.BMC Cancer,2020,20(1):131郾2摇 李海璐,费小明,汤摇郁,等 郾 多西环素对骨髓瘤细胞株 H929 内源性凋亡的影响及其作用机制J.中国实验血液学杂志,2022,30(2):441鄄448郾3摇 季文媛,魏少荫,刘摇炜 郾 大荨麻提取物对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制J.中国肿瘤生物治疗杂志,2021,28(8):803鄄809郾4摇 刘摇 韵,邢摇辉,兰艳丽 郾 miR鄄130b鄄3p 靶向肝细胞生长因子调控妊娠滋养层细胞增殖,迁移和侵袭的机制研究J.中国临床药理学杂志,2021,37(1):36鄄40郾5摇 韦有生,姚德生,李摇力,等 郾 METTL14 在卵巢上皮性癌组织中的表达及对 A2780,SKOV3 细胞增殖,侵袭和迁移的影响J.中华妇产科杂志,2022,57(1):46鄄56郾6摇赵摇革,张摇丹,杨小会,等 郾 丁香活性组分抑制PI3K/Akt/mTOR 通路诱导人结肠癌 HCT116 细胞凋亡的研究J.中国中药杂志,2021,46(5):1197鄄1204郾7摇 汤呈怀 郾 松果菊苷通过抑制 Wnt/茁鄄catenin 信号通路发挥抗乳腺癌效应的作用机制研究D.重庆:重庆医科大学,2020郾8摇 邓成杰,刘摇 爽,徐晓云,等 郾 苏木化学成分及药理作用的研究进展J.中国现代中药,2020,22(5):810鄄826郾9摇 Yang X,Zhao L,Zhang T,et al.Protosappanin B promotesapoptosis and causes G1 cell cycle arrest in human bladder canc鄄er cellsJ.Sci Rep,2019,9(1):1048郾10摇 Liu MK,Ma T,Yu Y,et al.MiR鄄1/GOLPH3/Foxo1 sig鄄naling pathway regulates proliferation of bladder cancer J.Technol Cancer Res Treat,2019,18:1533033819886897郾11摇 Qiu CZ,Wang MZ,Yu WS,et al.Correlation of GOLPH3gene with Wnt signaling pathway in human colon cancer cellsJ.J Cancer,2016,7(8):928鄄934郾12摇 Piao SS,Shang B郾 Pizotifen inhibits the proliferation andmigration of colon cancer HCT116 cells by down鄄regulating wntsignaling pathwayJ.Ann Clin Lab Sci,2019,49(2):183鄄188郾13摇 Zhang F,L譈 HZ,Liu JM,et al.UNBS5162 inhibits coloncancer growth via suppression of PI3K/Akt signaling pathwayJ.Med Sci(Paris),2018,34(F1):99鄄104郾收稿日期:2023鄄02鄄13摇 编校:孟玲玲1702吉林医学 2023 年 8 月第 44 卷第 8 期