铁冬青-单面针浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量测定.pdf

Jun.2023Journal of HainanrmairaScience2023年6 月Vol.36 No.2第36 卷第2 期海南师范大学学报（自然科学版）Doi:10.12051/j.issn.1674-4942.2023.02.011铁冬青-单面针浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量测定彭佳欣，谭洋12，周喆，胡诗安，杨学斌，李玲，袁园1,2*（1.湖南中医药大学药学院，湖南长沙410 2 0 8；2.湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室，湖南长沙410208)摘要：开展了HPLC法测定铁冬青-单面针及其浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量的方法学研究。确定了铁冬青的最优测定条件（流动相为乙睛-水；检测波长210nm；流速1.0 mL/min；柱温30；进样量10 L）、单面针的最优测定条件（流动相为甲醇-0.1%甲酸水；检测波长2 7 2 nm；流速1.0 mL/min；柱温30；进样量10 L）、铁冬青-单面针浸膏的最优测定条件（流动相为乙睛-0.4%磷酸水；长梗冬青苷、白鲜碱检测波长为2 10 nm；紫丁香苷、氯化两面针碱检测波长为2 7 2 nm；流速1.0 mL/min；柱温30；进样量5uL）。在上述条件下，开展了HPLC测定法的线性范围、精密度、稳定性、重复性、回收率等实验，结果表明HPLC法可以较好地用于测定铁冬青-单面针及浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱的含量。关键词：铁冬青；单面针；含量测定；HPLC中图分类号：R284.2文献标志码：A文章编号：16 7 4-49 42(2 0 2 3)0 2-0 18 3-0 9Determination of Syringin,Pedunculoside,Nitidine Chloride andDictamnine in Ilex Rotunda Thunb and Zanthoxylum DissitumHemsl ExtractPENG Jiaxin,TAN Yang2,ZHOU Zhe,HU Shian,YANG Xuebin,LI Ling,YUAN Yuant,2(1.School of Pharmacy,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha 410208,China;2.Hunan Provincial Key Laboratory of Modernization of Traditional Chinese Medicine,Changsha 410208,China)Abstract:HPLC was used to determine the contents of syringin,pedunculoside,nitidine chloride and Dictamnine in IlexRotunda Thunb and Zanthoxylum Dissitum Hemsl and Its Extract.The optimal determination conditions of Ilex RotundaThunb were determined(mobile phase:acetonitrile-water;detection wavelength 210 nm;flow rate 1.0 ml/min;column tem-perature was 30 C,sample size was 10 L).The optimal determination conditions of Zanthoxylum Dissitum Hemsl(mobilephase:methanol-0.1%formic acid water;Detection wavelength 272 nm;Flow rate 1.0 ml/min;column temperature 30 C;sample size 10 L),and the optimal determination conditions of Ilex Rotunda Thunb and Zanthoxylum Dissitum Hemsl De-coction(mobile phase:acetonitrile-0.4%phosphoric acid water,the detection wavelength of pedunculoside and dictamninewas 210 nm,and the detection wavelength of syringin and nitidine chloride was 272 nm.The flow rate is 1.0 mL/min.Col-umn temperature 30 C;injection volume 5 L)were determined.Under the above conditions,the linear range,precision,收稿日期：2 0 2 2-11-0 9基金项目：湖南省自然科学基金项目（2 0 2 0 J5429）第一作者：彭佳欣（19 9 8 一），湖南衡阳人，研究方向为中药复方及其物质基础。E-mail：1419 49 39 42 q q.c o m*通信作者：袁园（19 8 4），湖南长沙人，实验师，研究方向为临床中药学。E-mail：49 46 456 5 q q.c o m1842023年海南师范大学学报（自然科学版）stability,repeatability and recovery rate of the HPLC method were tested.The results showed that the HPLC method devel-oped in this paper was good for the content determination of syringin,pedunculoside,nitidine chloride and dictamnine inIlex Rotunda Thunb and Zanthoxylum Dissitum Hemsl and Its decoction.Keywords:llex rotunda Thunb;Zanthoxylum dissitum Hemsl;content determination;HPLC铁冬青主产于广东、广西等岭南地区，是中国药典2 0 10、2 0 15、2 0 2 0 版收录的品种，2 0 2 0 版中国药典规定铁冬青干燥品中长梗冬青苷含量不得少于4.5%，紫丁香苷含量不得少于1.0%。故本实验中选择以长梗冬青苷与紫丁香苷作为质量控制标准。单面针生长于我国广东、广西、湖南、云南等山地林中，具有活血散瘀、祛风活络、续筋接骨、抗乳腺癌等功效，用于治疗跌打损伤、骨折等 1-4。单面针中含有氯化两面针碱、白鲜碱等生物碱类化合物，在现代研究中都有重要的药理活性，氯化两面针碱具有抗肿瘤、强心、降血压、抗真菌等药理作用，白鲜碱因其抗菌、抗肿瘤、抗炎与抗变态反应、抗溃疡、抗冠状动脉粥样硬化、保护肝脏和神经等药理作用受到关注，上述2 种活性成分均具有良好利用前景。有学者采用高效液相法测定单面针中生物碱含量 5-8,其中以检测氯化两面针碱与白鲜碱居多,故本实验中选择以氯化两面针碱与白鲜碱作为质量控制标准。2 0 0 9 版湖南中药材标准收载单面针，但缺乏专属性和可定量的指标，无含量测定项，单面针缺乏完善的质量控制标准 2。本实验对铁冬青中紫丁香苷、长梗冬青苷含量，单面针中氯化两面针碱、白鲜碱含量进行测定，建立单面针药材及铁冬青配伍单面针水煎液的质量控制标准，以期为铁冬青、单面针、铁冬青配伍单面针水提取所得浸膏的质量控制提供依据1铁冬青中紫丁香苷、长梗冬青苷的含量测定1.1材料与仪器1.1.1实验材料铁冬青广东茂名；单面针，湖南张家界；紫丁香苷标准品，中国食品药品检定研究所，批号为12 16 35；氯化两面针碱标准品，中国食品药品检定研究所，批号为12 12 54；白鲜碱标准品，中国食品药品检定研究所，批号为PS012022；长梗冬青苷标准品，中国食品药品检定研究所，批号为10 0 0 8 1；乙睛，色谱纯，安徽天地高纯溶剂有限公司；甲醇，色谱纯，安徽天地高纯溶剂有限公司；磷酸，分析纯，湖南汇虹试剂有限公司；甲酸，分析纯，湖南汇虹试剂有限公司。1.1.2实验仪器SPD-16高效液相色谱仪，日本岛津公司；KQ5200DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；分析天平，上海浦春计量仪器有限公司；砂芯过滤器，烟台江友硅胶开发有限公司；微孔滤膜，青岛海洋化工有限公司；电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科技有限公司；自动进样器SIL-20AT，日本岛津公司。1.2实验方法1.2.1供试品溶液的制备取铁冬青药材，置干燥箱中，6 0 干燥至恒重，用打粉机粉碎，过三号筛，精密称取铁冬青粉末0.5g置具塞锥形瓶中，加人7 0%甲醇10 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，称定质量，以7 0%甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.45m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。1.2.2对照品溶液的制备称取紫丁香苷2.5mg置容量瓶中，少量7 0%甲醇溶解，定容至5mL，用0.2 2 m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；称取长梗冬青苷1.2 mg置于容量瓶，少量7 0%甲醇溶解，定容至1mL，用0.45m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得1.2.3色谱条件上海月旭uitimateXB液相色谱柱C18（2 50 mmx 4.5mm，5m），柱温30，检测波长2 10 nm，乙腈为流动相A，纯水为流动相B，梯度洗脱（0 5min，9 5%B;5 9 mi n，9 5%9 0%B;9 13mi n，9 0%8 0%B；13 2 3mi n，值RSD5508(185香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量测定第2 期彭佳欣，等：铁冬青-单面针浸膏中紫0%75%B;2326 min,75%50%B;2642 min,50%40%B;4245 min,40%B;4550 min,40%95%B;5min,95%B),流速1.0 mL/min,进样量10 L。1.2.4方法学考察1.2.4.1线性关系考察分别量取1.2.2 项下对照品溶液各1mL，依次稀释得紫丁香苷浓度为0.40 0、0.2 0 0、0.10 0、0.0 50、0.0 2 5mg/mL，长梗冬青苷浓度为1.2 0 0.0.6 0 0.0.30 0、0.150.0.0 7 5mg/mL的系列对照品，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。紫丁香苷在0.0 2 5 0.40 0 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，长梗冬青苷在0.0751.200mg范围内与峰面积呈良好线性关系，结果见表1。表12 种对照品的线性回归方程Table 1 Linear regression equations of two control substances指标成分回归方程相关系数(r)紫丁香苷Y=47566 275.322 6X+283 339.125 00.999 2长梗冬青苷Y=5801540.3047X+340210.95870.999.71.2.4.2精密度试验按1.2.3项下色谱条件，1.2.2 项下紫丁香苷标准溶液重复进样6 次，每次10 L，记录峰面积，计算的I为0.7 3%。表明仪器精密度良好1.2.4.3稳定性试验按1.2.3项下色谱条件操作，取1.2.2 项下对照品溶液，分别在室温下放置0、3、6、12、2 4和48 h后进样分析，测定化合物紫丁香苷及长梗冬青苷的峰面积。按峰面积计算2 个化合物的RSD分别为0.7 3%、1.46%，表明供试品溶液在48 h内稳定。1.2.4.4重复性实验精密称取同一批供试品药材铁冬青0.5g，按1.2.1项下供试品溶液制备方法平行制备6 份供试品溶液，测得紫丁香苷、长梗冬青苷平均含量分别为10.47、7 7.34mg/g，计算2 个化合物的RSD分别为1.40%、1.9 1%。表明本方法重复性良好，结果见表2。表2 重复性考察结果Table2Repeatability test results含量/(mg/g)成分平均值/(mg/g)RSD/%123456紫丁香苷10.6510.4710.4310.5210.4510.3210.471.04长梗冬青苷77.9476.4177.1078.5177.9276.1877.341.201.2.4.5加样回收率试验取已知含量的同批药材样品6 份，每份0.5g，精密称定。分别加人一定量已知浓度的对照品溶液，按1.2.1项供试品溶液制备方法制备，按1.2.3项色谱条件进行测定，计算紫丁香苷、长梗冬青苷的加样回收率分别为10 1.7 9%、10 3.0 5%，RSD均小于2%，结果见表3。1.2.5含量测定按照“1.2.1 项下方法制备供试品溶液。准确吸取10 L，按照“1.2.3 项下色谱条件进样分析，记录色谱图及峰面积，根据色谱峰面积来计算紫丁香苷、长梗冬青苷的含量，分别为10.47 和7 7.34mg/g，对照品及样品图谱见图1。孔滤，71862023年海南师范目然科学版）表3铁冬青加样回收率Table 3The average recoveries of llex rotunda Thunb成分取样量/g紫丁香苷含量/mg标准品加人量/mg测得总量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%0.49870.55221.21.756100.320.51240.57211.21.789101.410.50780.57211.21.784103.13紫丁香苷101.791.440.51250.574 11.21.798100.100.50790.548 01.21.793103.750.51220.573.71.21.795101.780.498 73.85692.15.973100.770.51243.962.92.16.116102.530.507 83.927 32.16.111103.99长梗冬青苷103.051.290.51253.96372.16.123102.820.507 93.92812.16.122104.470.51223.961 42.16.140103.7421.紫丁香苷2.长梗冬青苷111020304050102010203040时间/min时间/min时间/min(a)铁冬青供试品图(b)紫丁香苷对照品(c)长梗冬青苷对照品图1铁冬青供试品、紫丁香苷对照品、长梗冬青苷的HPLC图Figure1HPLC of llex rotunda Thunb test productsyringin and pedunculosid2单面针中氯化两面针碱、白鲜碱的含量测定2.1材料与仪器同“1 项下“1.1”2.2实验方法2.2.1供试品溶液的制备取单面针药材置于燥箱中，6 0 干燥至恒重，用打粉机粉碎，过三号筛，精密称取单面针粉末2 g置具塞锥形瓶中，加人甲醇40 mL，密塞，称重，超声处理1h，放冷，称重，甲醇补足减失的质量，4下放置2 4h，浓缩至10 mL，0.45m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。2.2.2对照品溶液的制备称取氯化两面针碱1.0 mg、白鲜碱2.0 mg置容量瓶，少量甲醇溶解，加甲醇定容至10 mL，用0.45m微膜过滤，取续滤液，即得2.2.3色谱条件上海月旭uitimateXB液相色谱柱C18（2 50 mmx 4.5mm，5m），柱温30，检测波长2 7 2 nm，甲醇为流动相A，0.1%甲酸水为流动相B，梯度洗脱（0 5min,95%B;510min，9 5%6 0%B;10 40 mi n，6 0%187第2 期彭佳欣，等：铁冬青-单面针浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量测定0%B;4045 min,0%60%B;4548min,60%95%B;4850min,95%B）,流速1.0 mL/min,进样量10uL。2.2.4方法学考察2.2.4.1线性关系考察分别量取2.2.2 项下对照品溶液1mL，依次稀释得氯化两面针碱浓度为0.10 0 0 0、0.0 50 0 0、0.0 2 50 0、0.01250、0.0 0 6 2 5m g/m L 和白鲜碱浓度为0.2 0 0 0、0.10 0 0、0.0 50 0、0.0 2 50.0.0 12 5mg/mL的系列对照品，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归。氯化两面针碱在0.0 0 6 2 5 0.10 0 0 0 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，Y=31186692.0430X+21264.0833,r=0.9996;白鲜碱在0.0 12 5 0.2 0 0 0 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，Y=1425688.8172X+4290.9167,r=0.9995。2.2.4.2精密度试验按2.2.3项下色谱条件，2.2.2 项下混合照品溶液重复进样6 次，每次10 L，记录峰面积，计算2 个化合物的RSD值分别为0.54%、1.0 1%。表明仪器精密度良好。2.2.4.3稳定性试验按2.2.3项下色谱条件操作，取2.2.2 项下对照品溶液，分别在室温下放置0、3、6、12、2 4和48 h后进样分析，测定化合物氯化两面针碱和白鲜碱的峰面积。按峰面积计算2 个化合物的RSD分别为0.54%、1.0 1%，表明供试品溶液在48 h内稳定。2.2.4.4重复性实验精密称取同一批供试品药材粉末2 g，按2.2.1项下供试品溶液制备方法平行制备6 份供试品溶液，测得氯化两面针碱、白鲜碱平均含量分别为0.1147、0.9 40 0 mg/g，计算2 个化合物的RSD均小于2%，表明本方法重复性良好，结果见表4。表4重复性考察结果Table 4Repeatability test results含量/(mg/g)成分平均值/(mg/g)RSD/%123456氯化两面针碱0.114 10.112.50.11480.116 30.114 70.115 80.11471.17白鲜碱0.91590.924 10.961 90.949 90.934 30.953 90.94001.932.2.4.5加样回收率试验取已知含量的同批单面针药材样品12 份，每份2 g，精密称定。分别加入一定量已知浓度的2 种化合物对照品溶液，按2.2.1项供试品溶液制备方法制备，按2.2.3项下色谱条件进行测定，计算氯化两面针碱、白鲜碱的平均加样回收率分别为10 0.55%、10 2.31%，RSD均小于2%，结果见表5。2.2.5含量测定按照2.2.1项方法制备供试品溶液。精密吸取10 L，按照2.2.3项色谱条件进样分析，记录色谱图及峰面积，根据色谱峰面积来计算氯化两面针碱、白鲜碱的含量，分别为0.1147、0.9 40 0 mg/g，对照品及样品图谱见图2。3铁冬青与单面针配伍水提取所得浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱的含量测定3.1材料与仪器同“1 项下“1.1”2023年188海南师范大学学报（自然科学版）表5单面针加样回收率Table 5 The average recoveries of Zanthoxylum Dissitum Hemsl成分取样量/g样品中化合物含量/mg标准品加人量/mg测得总量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%2.063 20.236 60.470.707 4100.172.07730.23830.470.715 4101.512.01900.23160.470.698 299.38氯化两面针碱100.551.142.10330.24120.470.721 999.282.078 30.23840.470.7123100.832.10330.241 20.470.721 6102.122.02001.89883.85.691 399.802.098 21.97233.85.9177103.832.10221.97013.85.9123103.74白鲜碱102.311.902.01871.89763.85.692.499.862.123 71.996 33.85.906 7102.912.109 11.98263.85.923 4103.703022025305101520253035时间/min时间/min单面针供试品图谱单面针混标图谱1.氯化两面针碱2.白鲜碱图2单面针供试品及对照品的HPLC图谱Figure2HPLC of tested Zanthoxylum Dissitum Hemsl product and reference materials3.2实验方法3.2.1供试品溶液的制备按2:3比例取铁冬青和单面针，称取铁冬青2 0 g、单面针30 g置于圆底烧瓶中，第一次加蒸馏水40 0 mL，第二次加蒸馏水30 0 mL，煎煮2 次，每次回流2 h，过滤，合并两次煎煮液，浓缩，进一步浓缩制成浸膏。精密称取浸膏粉末0.5g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，密塞，称定质量，超声处理1h，放冷，称重，甲醇补足至原质量，摇匀，用0.45m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得3.2.2对照品溶液的制备称取紫丁香苷2.0 mg、长梗冬青苷3.6 mg、氯化两面针碱0.1mg、白鲜碱0.5mg于容量瓶中，加少量甲醇溶解，再定容至2 mL，摇匀，过0.45um微孔滤膜，取续滤液，即得混合标准品溶液。3.2.33色谱条件上海月旭uitimateXB液相色谱柱C18（2 50 mm4.5mm，5m），柱温30，流动相为乙腈（A）-0.4%磷酸水（B），梯度洗脱（0 52 min，9 5%50%B;52 57 mi n，50%9 5%B;57 6 0 mi n，9 5%B），流速1.0 mL/min，柱温30，检测波长为2 10 nm（长梗冬青苷、白鲜碱）、2 7 2 nm（紫丁香苷、氯化两面针碱），进样量5L。189第2 期彭佳欣，等：铁冬青-单面针浸膏中紫丁香、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量测定3.2.4方法学考察3.2.4.1线性关系考察移取3.2.2 项下混合对照品溶液1mL，依次稀释得紫丁香苷浓度为1.0 0 0 0、0.50 0 0、0.2 50 0、0.12 50、0.0625mg/mL，长梗冬青苷浓度为1.8 0 0 0、0.9 0 0 0、0.450 0、0.2 2 50、0.112 5mg/mL，氯化两面针碱浓度为0.050000、0.0 2 50 0 0、0.0 12 50 0、0.0 0 6 2 50、0.0 0 312 5mg/mL，白鲜碱浓度为0.2 50 0 0 0、0.12 50 0 0、0.0 6 2 50 0、0.031250、0.0 156 2 5mg/mL 的系列对照品，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。紫丁香苷在0.0 6 2 5 1.0 0 0 0 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，长梗冬青苷在0.112 5 1.8 0 0 0 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，氯化两面针碱在0.0 0 312 5 0.0 50 0 0 0 mg范围内与峰面积呈良好线性关系，白鲜碱在0.0156250.25000mg范围内与峰面积呈良好线性关系，结果见表6。表6 4种对照品的线性回归方程Table 6 Linear regression equations of the 4 control substances指标成分回归方程相关系数(r)紫丁香苷Y=19217706.3226.Y+136287.00000.999.9长梗冬青苷Y=3516475.4361X+33531.58330.999.5氯化两面针碱Y=43058157.849 0X-29115.208 00.999 8白鲜碱Y=3 4434 319.149 8X-16 203.666 70.999 93.2.4.2精密度试验按3.2.3项下色谱条件对混合对照品溶液重复进样6 次，每次5L，记录峰面积，计算4个化合物的RSD值分别为0.7 0%、0.6 8%、1.53%、0.7 2%，表明仪器精密度良好。3.2.4.3稳定性试验按3.2.3项下色谱条件对混合对照品溶液进行操作，分别在室温下放置0、3、6、12、2 4和48 h后进样分析，测定4种化合物的峰面积。按峰面积计算各化合物的含量RSD分别为0.7 0%、0.6 8%、1.53%、0.7 2%，表明供试品溶液在48 h内稳定。3.2.4.4重复性实验精密称取同一批供试品浸膏0.5g，按3.2.1项供试品溶液制备方法平行制备6 份供试品溶液，测得紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱平均含量分别为9.46 4、15.58、0.0 8 0 9 2、0.47 34mg/g，计算各化合物的RSD分别为0.8 8%、1.33%、1.9 2%、1.8 4%，表明本方法重复性良好，结果见表7。表7 重复性考察结果Table7Repeatabilitytest results含量/(mg/g)成分平均值/mg/g)RSD/%123456紫丁香苷9.4199.5289.3299.5379.4329.5369.4640.88长梗冬青苷15.7915.7015.3815.8215.4115.4015.581.33氯化两面针碱0.082780.079.870.079970.082.300.080360.080250.080921.92白鲜碱0.48540.48250.470.50.46490.47090.466 40.47341.843.2.4.5加样回收率试验取已知含量的同批药材样品6 份，每份0.5g，精密称定。分别加人一定量已知浓度的4种化合物对照品，按供试品溶液制备方法制备，按3.2.3项下色谱条件进行测定，计算紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱的加样回收率分别为10 0.44%、10 0.32%、9 9.9 4%、9 9.9 6%，RSD均小于2%，结果见表8。2023年190海南师范日然科学版表8 铁冬青配伍单面针水提取所得浸膏样回收率Table 8 The average recoveries of llex rotunda Thunb and Zanthoxylum dissitum Hemsl decoction成分取样量/g样品中化合物含量/mg标准品加人量/mg测得总量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%0.50104.546 626.54199.720.514 44.668 226.678100.490.50504.582926.592100.46紫丁香苷100.440.890.51514.674 626.684100.470.501 14.547426.588102.030.51514.674526.66499.480.50107.484 91.18.57599.870.514 47.685 11.18.77199.820.505 07.544.71.18.657101.12长梗冬青苷100.320.470.515 17.695 61.18.801100.490.501 17.486 41.18.590100.330.51517.695 61.18.799100.310.501 00.03890.240.2798100.380.514 40.03990.240.2810100.450.505 00.039 20.240.277799.38氯化两面针碱99.940.550.51510.039 90.240.280 1100.050.50110.03890.240.276 899.130.51510.03990.240.2806100.260.50100.22740.290.516599.690.514 40.23350.290.5242100.240.505 00.229 20.290.519.9100.24白鲜碱99.960.320.51510.233 80.290.524 6100.280.501 10.227.40.290.515 499.710.51510.233 80.290.522.799.623.2.5含量测定按照3.2.1项方法制备供试品溶液。精密吸取5L，按照3.2.3项色谱条件进样分析，记录色谱图及峰面积，根据色谱峰面积来计算紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱的含量，分别为9.46 4、15.58、0.0 8 0 9 2、0.4734mg/g，图谱见图3 图4。405010203040501020304050时间/min时间/min(a)检測波长2 10 m(b)检测波长2 7 2 nm1.长梗冬青苷2.白鲜碱3.紫丁香苷4.氯化两面针碱图3铁冬青配伍单面针水提取所得漫膏供试品HPLC图谱Figure3HPLC of extracts from liex rotunda Thunb and Zanthoxylum dissitum Hemsl decoction191第2 期香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量测定彭佳欣，等：铁冬青-单面针浸膏中紫32410203040501020304050时间/min时间/min(a)检测波长2 10 nm(b)检测波长2 7 2 nm1.长梗冬青苷2.白鲜碱3.紫丁香苷4.氯化两面针碱图4铁冬青配伍单面针水提取所得浸膏标准品HPLC图谱Figure 4 HPLC of standard pucduct from water extracts of llex rotunda Thunb and Zanthoxylum dissitumHemsl decoction4讨论按照2 0 2 0 版中国药典和文献上测定各成分的波长进行测定，结果显示，在检测波长为2 10 nm时，紫丁香苷、长梗冬青苷有较大吸收并基线平稳，噪声较小；波长检测为2 7 2 nm时，氯化两面针碱、白鲜碱有良好吸收，峰形良好，基线平稳。因此，药材铁冬青中紫丁香苷、长梗冬青苷在2 10 nm下进行检测，药材单面针中氯化两面针碱、白鲜碱在2 7 2 nm下进行检测。检测铁冬青配伍单面针水煎液的色谱图结果显示，检测波长为2 10 nm时长梗冬青苷、白鲜碱分离度与峰形较好，检测波长为2 7 2 nm时紫丁香苷、氯化两面针碱有较大吸收并峰形良好，因此，选用2 10 nm检测铁冬青配伍单面针水提取所得浸膏中的长梗冬青苷、白鲜碱，选用272nm检测铁冬青配伍单面针水提取所得浸膏中的紫丁香苷、氯化两面针碱。铁冬青配伍单面针水煎液是黔本草中的苗医名方，本研究对铁冬青配伍单面针水提取所得浸膏及其中两味药材有效成分进行含量测定，采用高效液相法对紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱4个有效成分进行测定。经测定，药材铁冬青中紫丁香苷、长梗冬青苷的质量浓度分别为10.47 mg/g、7 7.34mg/g，符合2 0 2 0 版中国药典中铁冬青干燥品中紫丁香苷含量不得少于1.0%、长梗冬青苷含量不得少于4.5%的规定。药材单面针中氯化两面针碱、白鲜碱平均含量分别为0.1147、0.9 40 0 mg/g。铁冬青配伍单面针水提取所得浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱平均含量分别为9.46 4、15.58、0.0 8 0 9 2、0.47 34mg/g。本研究立足于铁冬青配伍单面针水提取所得浸膏中具有药理活性的成分，采用高效液相法测定紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱4个有效成分的含量。该方法简单、灵敏、重复性好，为科学评价铁冬青配伍单面针水煎液、建立铁冬青配伍单面针水煎液质量控制标准提供了参考参考文献：1国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部 M.北京：中国医药科技出版社，2 0 2 0:32 5.2湖南食品药品监督管理局.湖南省中药材标准 M.长沙：湖南科学技术出版社，2 0 0 9:48-49.3全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编：下册 M.北京：人民卫生出版社，19 7 8:158 6.4国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草：9 M.上海：上海科学技术出版社，19 9 9:9 8 7-9 8 8.5刘倩倩，雷思敏，胡玉珍，等，单面针HPLC指纹图谱及质量标准研究 J.中国中医药信息杂志，2 0 2 0,2 7(10)：7 3-7 9.6吴润菁，王欢，祝晨，等.高效液相色谱法测定单面针中木兰花碱的含量 J1.广州中医药大学学报，2 0 14,31(3）：443-447。7韦熹苑，裴刚，袁园.单面针茎中氯化两面针碱和橙皮苷含量测定 J.中国现代药物应用，2 0 14,8(3):2 4-2 5.8杨学芬，陆晓珊.HPLC法测定三九胃泰颗粒中氯化两面针碱的含量 J1.中国民族民间医药，2 0 17,2 6(13)：2 5-2 7.