优质课微生物的实验室培养省名师优质课赛课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢,巴斯德,法国，微生物学家,失败原因：发酵物中混入了杂菌,变酸？,第1页,第2页,一.培养基,微生物,原核类:,真核类,非细胞类：,细菌、蓝藻等,酵母菌、霉菌、食用菌等,真菌：,原生生物：,草履虫、变形虫等,病毒,是一切肉眼看不见或看不清楚微小生物总称,关于微生物类群,第3页,牛肉膏蛋白胨培养基是一个应用最广泛和最普通细菌基础培养基,。,一、培养基概念,人们按照微生物,对营养物质不一样需求,，,配制出供其生长繁殖营养物质培养基,思索：微生物“吃”什么？,第4页,一,、,培养基成份：,微生物生存环境和营养物质,碳源（提供碳元素物质）,无机碳源：,有机碳源,CO,2,、碳酸盐,自养微生物,异养微生物,氮源（提供氮元素物质）,无机氮源：,有机氮源：,：,（葡糖糖、蔗糖、淀粉、牛肉膏、蛋白胨等）,牛肉膏、蛋白胨等,NH,4,、NO,3,-,N,2,第5页,(3).不一样微生物往往需要采取不一样培养基配方,(参考教材附录内容),(5)另外还需要满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,比如:,生长因子(,即细菌生长必需，而本身不能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶,),以及,氧气,等,要求。,(4).不论哪种培养基，普通都含有,水,、,碳源,、,氮源,、,无机盐基本成份,第6页,（1）按培养基物理形态分：,液体培养基,半固体培养基,固体培养基,一,、培养基种类,（2）按培养基功效分：,基础（通用）培养基,选择培养基,判别培养基,（3）按培养基化学成份分：,天然培养基,合成培养基,第7页,二,、,无菌技术,1.概念,无菌技术又称无菌操作，泛指,在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。,所以，取得纯净培养物关键是预防外来杂菌入侵,第8页,消毒,使用较为,温和,物理或化学方法，杀死物体,表面或内部,部分,微生物(,不包含芽孢和孢子,)。,2.消毒与灭菌,灭菌,使用,强烈,理化原因杀死物体内外,全部,微生物，包含,芽孢和孢子,。,理化原因作用强度,毁灭微生物数量,芽孢和孢子能否被毁灭,(1)定义,第9页,煮沸消毒法：100煮沸5-6min。,巴氏消毒法：70-75下煮30min或 80下煮15min。,化学药剂消毒法：用75%酒精等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。,紫外线消毒。,.消毒方法：,2.惯用消毒与灭菌方法,第10页,灼烧灭菌,干热灭菌：160-170 下加热1-2h。,高压蒸气灭菌：100kPa、121 下维持15-30min.,.灭菌方法：,第11页,二、无菌技术,（1）对试验操作,空间、操作者衣着和手,，进行,清洁和消毒,。,（2）将用于微生物培养,器皿、接种用具和培养基,等器具进行灭菌。,（3）为防止周围环境中微生物污染，试验操作应在,酒精灯火焰附近,进行。,（4）试验操作时应防止已经,灭菌处理材料用具,与周围物品相接触。,无菌技术围绕着怎样防止杂菌污染展开，主要包含以下几个方面,第12页,思索：1.无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？,思索：2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。,（1）培养细菌用培养基与培养皿,（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管,（3）试验操作者双手,无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。,（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒,。,第13页,练习,细菌培养过程中分别采取了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几个不一样处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位杂菌（）,A.接种针、手、培养基,B.高压锅、手、接种针,C.培养基、手、接种针,D.培养基、手、高压锅,C,第14页,变形题,培养基、培养皿、接种环、试验操作者双手、空气、牛奶所采取灭菌、消毒方法依次是（）,化学消毒 灼烧灭菌,干热灭菌 紫外线消毒,高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法,A.B.,C.D.,A,第15页,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.计算：（依据牛肉膏蛋白胨培养基配方百分比，计算配制100ML培养基时，各种成份用量）,物质,牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂,水,重量,5g,10g,5g,20g,定溶至1000mL,2.称量,三、试验操作,思索：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有几个基本营养成份？牛肉膏提供上述哪几个成份？,准确称取各种成份，注意事项：牛肉膏要放在,称量纸上,称量，牛肉膏、蛋白胨都易,吸潮,，称取时,动作要快速，称后及时盖上瓶盖,。,第16页,3.溶化：,4.灭菌：,5.倒平板：待培养基冷却到50,O,C左右时，在酒精 火焰附近倒平板。,注意：溶化后应该调整PH（在灭菌前）,第17页,?,思索3,溶化时为何要将牛肉膏连同称量纸一起加热?,加琼脂目标是什么?,可确保粘附在称量纸上牛肉膏也能,溶于水中,降低误差,作为凝固剂,第18页,思索4,在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基锥形瓶目标是什么？,?,在灭菌时能防止水蒸汽凝结时浸湿棉塞；,在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染作用,第19页,倒平板:,第20页,1).培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？,问题讨论,答：,能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。,2).为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？,答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。,第21页,3).平板冷凝后，为何要将平板倒置？,4).在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。,答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。,第22页,四,、,纯化大肠杆菌,微生物接种方法常见有,平板划线法和稀释涂布平板法。,（1）.平板划线法,经过,接种环,在琼脂固体培养基表面,连续划线操作,，将,聚集菌种逐步稀释分散,到培养基表面。,在数次划线后能够分离到,由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体称菌落,。,第23页,学科网,第24页,将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环_,在_旁冷却接种环，并打开棉塞,将试管口经过火焰,.,将已_接种环伸入菌液中蘸取一环菌液,左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种接种环快速伸入平板内，,划_条平行线，盖上皿盖。,注意不要划破培养基,。,.,将试管经过火焰，并塞上棉塞,火焰,冷却,三至五,灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线_开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。,注意不要将最终一区划线与第一区相连。,末端,烧红,将平板_放入培养箱中培养。,倒置,第25页,思索：,1、为何在操作第一步要灼烧接种环？,操作第一步灼烧接种环是为了,防止接种环上可能存在微生物污染培养物,；,思索：2、每次,划线之前都要灼烧接种环？,每次划线前灼烧接种环是为了,杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种,，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。,思索：3、,在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？,划线结束后灼烧接种环，能及时,杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者,。,第26页,思索：3、在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？,防止接种环温度太高，杀死菌种,思索：4,、,在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？,划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，,能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。,第27页,平板划线法关键点,接种前，每次划线前及接种后都要灼烧接种环,接种环灼烧后等其冷却后再进行划线,第二次及其之后划线操作，总是从上一次划线末端开始划线,第28页,固体培养基：菌落,（2）稀释涂布平板法,将菌液进行,一系列梯度稀释,，然后将不一样稀释度菌液分别,涂布到,琼脂固体培养基表面，进行培养。在稀释度足够高菌液里，聚集在一起微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成,单个菌落,。,第29页,将涂布器浸在盛有酒精烧杯中,取少许稀释液（,不要超出0.1ml,）滴加到培养基表面,灼烧,待酒精燃尽后冷却810s,涂布,将沾有少许酒精涂布器在火焰上引燃,用涂布器将菌液,均匀地涂布在培养基表面,。涂布,时可转动培养皿,，使菌液涂布均匀,第30页,思索：1,、,涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？,应从操作各个细节确保“无菌”。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,稀释涂布平板法关键点,用移液管吸收液体之前先摇匀,全部操作都应在,火焰附近,进行,涂布器从酒精中取出后，要在火焰上将其上酒精烧掉,涂布器要冷却（510s）后再进行涂布,涂布要均匀，且涂布时可转动培养皿，使菌液均匀分布,第31页,五.结果分析与评价,.培养基制作是否合格,假如未接种培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。,.接种操作是否符合无菌要求,假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。,.是否进行了及时细致观察与统计,培养12h与24h后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样，及时观察统计同学会发觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。,第32页,大肠杆菌纯化培养,分为,制备培养基和纯化大肠杆菌两个阶段,；试验分为试验组（,接种大肠杆菌培养基,）和对照组（,未接种大肠杆菌培养基,）。,整个试验过程一定要,严格消毒灭菌（无菌操作），,不然就无法得到纯化大肠杆菌，造成试验失败。下面可能出现试验结果及对应原因分析,1.假如对照组未长出菌落，试验组长出颜色形状大小基本一致菌落,说明培养基制备符合要求，灭菌彻底，接种操作（无菌操作到达要求）及培养时符合要求。,2.对照组未长出，试验组上出现了其它菌落,说明培养基制备符合要求，灭菌彻底，但接种操作未到达要求（无菌操作未到达要求）,3.对照组长出菌落,说明培养基制备不符合要求，灭菌不彻底,第33页,六.菌种保藏：,1.暂时保藏：,将菌种接种到试管固体斜面培养基上，在适当温度下培养,当菌种长成之后，将试管放入4冰箱中保藏，以后每3-6个月都要将菌种从旧培养基上转移到新鲜培养基,2.长久保留：,菌种易被污染或产生变异,甘油管藏,1ml甘油（灭菌）1ml菌液,20冷冰箱中保留,第34页,