大肠杆菌对七种常见抗菌药的敏感性试验.docx

畜禽大肠杆菌对七种常见抗菌药的敏感性试验

董卫超
（2010届动医专升本08-2）

摘要：为了的了解河南地区的大肠杆菌耐药情况，更好的对大肠杆菌病进行有效防治，近期从河南省内数家养殖场的带病或死亡的猪、鸡、鸭分离、鉴定大肠杆菌17株，采用微量肉汤稀释法测定它们对几种常用抗菌药物的敏感性。结果显示：不同源地的大肠杆菌,对单用氟苯尼考、强力霉素的耐药率高达94.1%~100%；单用克林沙星的抗菌活性最强，仅5.9%的菌株产生耐药； SMM/TMP（5/1）联用对大多数菌株的MIC值几乎都是≥640 μg/mL；以上结果表明：在河南地区大量存在着耐药大肠杆菌菌株，而且磺胺类药物与叶酸代谢途径抑制剂联用仍表现出较高的耐药率，而单用克林沙星能收到较好的效果。
关键词：药物敏感性实验；最小抑菌浓度；大肠杆菌；耐药性；猪；禽

The Antibiotics susceptibility test of several commonly used antibiotics against Animal E. coli

DONG Wei-chao
(Class 2 of Animal Veterinary, Graduated in 2010)

Abstract: In order to understand the resistance of E. coli in Henan and to carry out effective prevention and treatment of E. coli illness, recently we isolated and identifide 17 strains of E. coli from several farms of pigs, chickens, ducks in Henan Province. Microdilution was used to measure their sensitivity to several common antibiotics. The results showed that the rate is as high as 94.1% to 100% when we single use of florfenicol, doxycycline resistance to different sources of E. coli.The antibacterial activity is strongest when we single use Clinafloxacin,the drug resistance and the drug resistance is just 5.9%. Combined SMM with TMP,the MIC is almost ≥640 μg/mL. These results suggest that lots of resistant E. coli is presenced in Henan.And high resistance rates were show when sulfonamides combined folic acid metabolic pathway inhibitors combined. And clinafloxacin receive good results
Key words: Drug sensitivity test; Minimum inhibitory concentration; E. coli; Resistance; Swine;Poultry

近期随着畜禽养殖业的快速发展，大肠杆菌病已成为危害养殖业的主要传染病之一。近年来，由于长期大量抗菌药物的滥用，造成大肠杆菌耐药菌株不断产生，尤其是兽医临床已出现多重耐药性、超强耐药的大肠杆菌，即同时对兽医临床常用抗菌药物：如β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类和氟 喹诺酮类等产生耐药性[1]，导致常规药物的药效降低甚至消失，临床可供选择药物的余地越来越少，大肠杆菌病的防治难度日益增加，给养殖业造成了严重的损失。
氟苯尼考（Florfenicol）属动物专用的广谱抗生素，具有广谱、高效、低毒、吸收良好体内分布广泛和不致再生障碍性贫血等特点。多西环素(Doxycycline)是四环素类药物中毒性小、抗菌活性强和与天然品交叉耐药不明显而被广泛应用。喹诺酮类（quinolones）是指一类具有4-喹诺酮环结构的药物，具有抗菌谱广，杀菌力强，吸收快、体内分布广泛，抗菌作用独特，与其他抗菌药物无交叉耐药性。克林沙星属于第四代喹诺酮类药物，抗菌谱广、杀菌力强、吸收快、体内分布广、血浆半衰期较长,有望在临床上广泛用于各种感染[2,3]。阿米卡星（Amikacin）又名丁胺卡那霉素，属半合成的氨基糖苷类抗生素。磺胺类药物是20世纪30年代发现并最早应用于临床的化学治疗药物，曾在细菌感染性疾病的控制方面起到了重要的作用。此类药物具有一个氨苯磺酰胺的基本结构，与细菌生长繁殖所必需的对氨基苯甲酸的化学结构相似，能竞争性地与二氢叶酸合成酶结合，是细菌不能利用对氨基苯甲酸合成叶酸，进而核酸合成受阻细菌生长繁殖受到抑制。SMM是磺胺类中抗菌活性最强的药物，甲氧苄啶（TMP）是抑制叶酸合成中的二氢叶酸还原酶活性，也是细菌叶酸合成抑制，核酸无法合成，与磺胺类药物伍用，对叶酸代谢的双重阻断作用而起到增强抗菌的协同作用[3]。
鉴于各种药物的抗菌机理以及抗菌谱，为了更好的指导临床用药及减少耐药菌株产生，故此，对河南部分地区的畜禽大杆菌进行简单药敏分析。
1材料与方法
1.1试验时间、地点
2010年03月08日~2010年04月03日于河南农业大学牧医工程学院药理试验室。
1.2试验材料
1.2.1 病料 本试验所用病料如表所示。

表1 病料来源
Table 1 Sources of the diseases
菌株
编号
脏器
日龄
分离源地
近期用药史
1
肝脏
60
新乡风景区某猪厂
磺胺类药物
2
肝脏
90
中牟县官渡镇某猪厂
磺胺类药物、氟苯尼考
3
肺脏
90
中牟县官渡镇某猪厂
磺胺类药物、氟苯尼考
10
脾脏
20
新乡获嘉县某猪厂
氟苯尼考、头孢噻呋
12
肝脏
50
荥阳广武三关猪厂
双黄连+头孢噻呋、氟苯尼考、磺胺类药物
14
脾脏
7
郑州西开发区沟赵农大博圣猪厂
A. 注射磺胺类药物、氟苯尼考
B. 拌料强力霉素、氨基比林、增效剂
19
肝脏
40
郑州某鸭厂
氟苯尼考
21
肝脏
250
新郑某蛋鸡厂
不明
22
肝脏
14
开封杞县某鸡厂
双黄连；拌料强力霉素、泰乐菌素
24
肝脏
30
原阳县某鸡厂
强力霉素
27
淋巴结
20
新乡获嘉县某猪厂
氟苯尼考、头孢噻呋
28
脾脏
60
南阳新野某猪厂
注射：磺胺类 口服：阿司匹林
29
肝脏
60
社旗县城郊乡某猪厂
青霉素、氨基比林、安乃近、抗病毒药
30
肝脏
25
社旗县城郊乡某猪厂
青霉素类、磺胺类
31
肺脏
120
禹州某猪厂
痢菌净、安乃近
33
肺脏
120
禹州某猪厂
痢菌净、安乃近
34
肾脏
90
荥阳茹寨村猪厂
庆大霉素、盐酸小檗碱

1.2.2 培养基 （1）血平板培养基 郑州博赛生物科技股份有限公司。生产批号：100302-1。（2）麦康凯琼脂（不含结晶紫）(Mac-Conkey Agar) 杭州天和微生物试剂有限公司（原浙江省军区后勤部卫生防疫检验所）。（3）营养肉汤(Nutrient Broth) 北京双旋微生物培养基制品厂。生产批号：20060829。（4）CRM002 大肠杆菌显色培养基(Chromogenic E.coli Agar) 广东环凯微生物科技有限公司。生产批号：200706166。
1.2.3 药品 阿米卡星：河南牧翔动物药业有限公司，含量：90%；强力霉素：河南牧翔动物药业有限公司，含量：90%；氟苯尼考：河南牧翔动物药业有限公司，含量：95%；恩诺沙星：河南牧翔动物药业有限公司，含量：94% 08.08.01；克林沙星：郑州克尔泰生化科技有限公司 含量：90% 生产批号：20070601；加替沙星：河南大用实业公司 含量：98.5% ；SMM 含量：河南牧翔动物药业有限公司，90%；乳酸TMP：河南牧翔动物药业有限公司，含量：90%；NaOH 1mol/L 、无水乙醇、 N,N-二甲基甲酰胺。
1.2.4 仪器 DZF-6021型真空干燥箱：上海精宏实验设备有限公司， 编号：20022535；SHZ-88-1台式水浴恒温振荡器：中国太仓市光明实验分析仪器厂， 编号：20022544；LRH-250-Ⅱ微电脑控制生化培养箱：广东省医疗器械厂，编号：20022552；洁净工作台：苏净集团安泰公司制造，编号：20002541；GMSX-汽消毒器：北京市永光明医疗器械厂，编号：B26297；BS224S型电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司，出厂号：50961815；BCD-39VC型新飞冷藏冷冻箱；移液器（0.5~10 μL、20~200 μL 、100~1000 μL）；彩色8ch移液器，生产批号：285738；96孔V型反应板：姜堰市新康医疗器械有限公司。
1.3操作程序及方法
每次实验开始前，先把所需的实验器材置于洁净工作台上打开紫外线灯照射30 min后，方可开始试验。
1.3.1培养基的制备
血平板培养基:可以直接购买后，放置于4℃冷藏备用。营养肉汤培养基:称取营养肉汤粉适量，按照1 L灭菌蒸馏水18 g营养肉汤粉的比例，加热溶解后，分装试管，每支试管5 mL，121℃高压灭菌15 min后放入37℃生化培养箱中保存备用。麦康凯琼脂培养基:称取麦康凯琼脂粉适量，按照1L灭菌蒸馏水51g麦康凯琼脂粉的比例，充分混匀，经121℃高压灭菌15 min后冷却至50℃左右，在洁净工作台上倾注于灭菌平皿中约15 mL即可，凝固后倒置放入37℃生化培养箱中保存备用。大肠杆菌显色培养基:称取本品适量，按照1 L灭菌蒸馏水（或去离子水）18g大肠杆菌显色培养基粉的比例混合，搅拌加热煮沸至完全溶解后，经121℃高压灭菌10 min后，在洁净工作台上倾注于灭菌平皿中约15 mL即可，凝固后倒置放入37℃生化培养箱中保存备用。
1.3.2细菌的分离培养 病料采集:病料采集前应准备好采样器械和容器，对死因不明的动物必须排除炭疽后才能解剖采样，并在动物死后六小时内进行。尽可能无菌操作采集带病猪、鸡、鸭的肝脏、肺脏、脾脏、淋巴结等[4]，放入干净的自封袋中，尽量避免其他病原微生物对所采集病料的污染。放入冰箱冷冻保存备用。在采集病料的过程中，要注意个人卫生，注意个人防护，病料采集后对动物尸体无害化处理，被污染场地进行彻底消毒。
细菌分离培养：按照有关资料所述的方法[5]，将病料从冰箱中取出，待解冻后到洁净工作台上进行无菌操作，划线时右手执接种环，将环直立于酒精灯外焰烧红，再将接菌环横转，在火焰上转动，来回将柄部下端来回灼烧三次，待冷却后，用接种环在病料的新鲜切面上蘸取一环组织液，用左手掌握血平板培养基，无名指与小拇指在平皿底部，食指在平皿盖上，大拇指及中指将平皿盖掀开一口，右手的接种环用连续划线法先将组织液涂于培养及边缘，成为基准线，从基准线开始向左右两侧划开，并连续向下移动，连续划成若干条曲线[4],在酒精灯旁划线接种后37℃培养24小时。
增菌培养：左手持血平板培养基、营养肉汤试管，右手持灭菌接种环在长有细菌菌落的血平板培养基上用接种环挑取单个典型菌落后，拔下棉塞，夹持于右手小拇指与手掌中间，将接种环插入营养肉汤试管中，在试管内壁与液面接触处轻轻涂擦使样品乳化，接种于营养肉汤试管中进行增菌培养，接种完毕后，塞上棉塞竖立放置，37℃培养24小时（菌液1）[6]。
菌种鉴定：用接菌环挑取一环试管中的菌液1，在麦康凯琼脂平板上进行划线接种， 37℃培养24小时，观察细菌菌落大小、颜色等生长性状。再用接菌环挑取桃红色菌落，再次接种至营养肉汤培养基中37℃增菌培养24小时（菌液2）。然后再用接菌环钩取一环菌液2，在大肠杆菌显色培养基上划线接种后，37℃增菌培养24小时，进一步确认是否为大肠杆菌。
1.3.3药液配制 药物称取：用电子天平称取：阿米卡星0.0071 g，强力霉素0.0071 g，氟苯尼考0.0067 g，恩诺沙星0.0068 g，克林沙星0.0071 g，加替沙星0.0065 g，SMM 0.0142 g，乳酸TMP 0.0206 g。
药液配制：将称量好的药品用无菌蒸馏水配制成浓度为1280 μg/mL的药液，置4℃冰箱中保存备用，各贮存药液须在一周内用完。其中：a.恩诺沙星、克林沙星稀释时先加入少许无菌蒸馏水，然后加入1mol/L的NaOH 200 μL，待充分溶解后，逐步加入无菌蒸馏水稀释至1280 μg/mL的药液； b. 氟苯尼考稀释时首先加入N,N-二甲基甲酰胺40 μL,至完全溶解后，再加入20 μL无水乙醇充分混匀后，加入无菌蒸馏水逐步稀释至1280 μg/mL的药液。 SMM/乳酸 TMP(5:1)：取5 mL SMM+1 mL乳酸 TMP混合均匀备用。
1.3.4菌液的配制 在洁净工作台上进行无菌操作，从菌液2中吸取5 μL菌液后重新接种于5 mL的营养肉汤试管中，经37℃过夜培养（约16小时）后，吸取2 μL菌液于无菌平皿中，再向平皿中加入20 mL无菌营养肉汤进行万倍稀释[7]，充分均匀混合后，使受试菌悬液浓度约为105 CFU/mL即可使用。
1.3.5最小抑菌浓度的测定 取标记过的灭菌96孔V型反应板，采用微量肉汤稀释法[8]的方法来测定药物对所分离菌株的最小抑菌浓度（Minimal inhibitory concertration ，MIC值）。首先，在第1列一次加入不同的药物各60 μL；然后再向第12列前4孔每孔加入无菌营养肉汤60 μL作阴性对照，后4孔每孔加入稀释好的菌液60 μL作阳性对照；然后再将彩色8ch移液器调至60 μL，吸取菌液，从第11孔依次加至第1孔；将第一孔中的药液和菌液充分混合均匀后吸出60 μL于第二孔，以同样的方法依次稀释至第11孔，充分混合均匀后，吸出60 μL弃去。最后将96孔V型反应板用保鲜膜覆盖好，标记信息后置于37℃生化培养箱中培养24小时，观察实验结果。用同样的方法将每株细菌每种药物均重复做两次，对比结果观察是否有重现性，如果两次结果相差较大，则需要重新做几次直至又重现性即可。
2实验结果
2.1细菌的鉴定观察结果
观察所分离的细菌的生长情况，在麦康凯培养基上形成桃红色、扁平、圆形、隆起、光滑、湿润的菌落，可以初步确认为大肠杆菌。另外在麦康凯培养基上还培养出桃红色和黄白色透明状两种菌落，将这两种菌落分别接种于营养肉汤培养基中增菌培养后，再次用接菌环分别蘸取两种菌液在大肠杆菌鉴别培养基上做鉴别培养，结果显示：在大肠杆菌显色培养基上，大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。即在麦康凯培养基上显示桃红色的菌落经大肠杆菌显色培养基培养呈蓝绿色的，可鉴定为大肠杆菌[9]，康凯培养基上显示黄白色透明状的菌落，在大肠杆菌显色培养基上则显示无色，所以不是大肠杆菌。将确定为大肠杆菌的菌液2试管4℃保存备用，方可进入本试验进一步分析。
2.2不同药物对不同菌株的MIC值
2.2.1 MIC值测定结果 以下七种药物对不同源地不同种属宿主的大肠杆菌MIC值测定结果见表2。表2所示：氟苯尼考除对地24号菌株的MIC值较低外，其他菌株的MIC值均不小于160 μg/mL；多西环素除对19号菌株的MIC值为20 μg/mL，对其他菌株的ＭMIC值均不低于80 μg/mL；另外，喹诺酮类的药物中，恩诺沙星MIC值较大，加替沙星及克林沙星的MIC值均比较小。多西环素和恩诺沙星耐药率均高达100%；氟苯尼考耐药率也高达94.1%；SMM/TMP（5/1）联用对大多数菌株的耐药较为严重，耐药率高达82.4%；而大部分菌株均对阿米卡星、克林沙星较为敏感，其中阿米卡星耐药率为17.6%，克林沙星为5.9%；

表2 几种常用抗菌药物对猪、鸡、鸭大肠杆菌的抗菌活性（μg/mL）
Table 2 The antibacterial activities of several commonly used antibiotics against E.coil isolated from pigs, chickens, ducks （μg/mL）
菌名
氟苯尼考
多西环素
阿米卡星
SMM/TMP（5/1）
恩诺沙星
加替沙星
克林沙星
1
320
160
<0.625
160
40
5
1.25
2
>640
160
<0.625
>640
640
10
5
3
>640
160
<0.625
>640
160
10
2.5
10
640
160
<0.625
>640
40
10
2.5
12
640
160
<0.625
>640
20
5
1.25
14
640
160
<0.625
>640
640
5
2.5
19
160
20
10
80
10
2.5
1.25
21
640
160
320
>640
80
10
1.25
22
640
160
80
>640
20
2.5
1.25
24
5
80
20
80
10
5
1.25
27
320
640
1.25
640
40
40
2.5
28
640
80
<0.625
>640
640
20
10
29
640
160
1.25
>640
80
10
5
30
160
80
<0.625
>640
20
5
1.25
31
640
80
1.25
>640
640
20
2.5
33
640
80
640
>640
640
20
2.5
34
640
160
20
>640
320
10
2.5
注：表格中药物MIC值为首写药物的MIC值。
Note: the MICs in the table is the first drugs .

2.2.2 受试菌株对不同抗菌药物耐药情况比较 临床分离的这17株大肠杆菌对不同抗菌药物耐药情况比较见表3表4所示。

表3 17株临床分离菌对不同抗菌药物耐药情况
Table 3 Resistance of 17 clinically isolated strains against different antibiotics
药物名称
耐药浓度
(μg/mL)
耐药株数
MIC范围
(μg/mL)
MIC50
(μg/mL)
MIC90
(μg/mL)
耐药率(%)
多西环素
≥16
17
20~640
160
160
100
恩诺沙星
≥4
17
10~640
80
640
100
氟苯尼考
≥8
16
5~>640
640
>640
94.1
SMM/TMP
≥512
14
80~>640
>640
>640
82.4
加替沙星
≥8
10
2.5~40
10
20
58.8
阿米卡星
≥64
3
<0.625~640
1.25
320
17.6
克林沙星
≥8
1
1.25~10
2.5
5
5.9

表4 17株临床分离菌的多重耐药谱
Table 4 The multi-resistant spectrums of 17 isolates
菌株
分离源地
多重耐药谱
合计
1
新乡
氟苯尼考、多西环素、恩诺沙星
3
2
中牟
氟苯尼考、多西环素、恩诺沙星、加替沙星、SMM/TMP
5
3
中牟
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星
5
10
新乡
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星
5
12
荥阳
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星
4
14
郑州
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星
4
19
郑州
氟苯尼考、多西环素、恩诺沙星
3
21
新郑
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星、阿米卡星
6
22
开封
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、阿米卡星
5
24
原阳
多西环素、恩诺沙星
2
27
新乡
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星
5
28
南阳
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星、克林沙星
6
29
社旗
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星
5
30
社旗
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星
4
31
禹州
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星
5
33
禹州
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星、阿米卡星
6
34
荥阳
氟苯尼考、多西环素、SMM/TMP、恩诺沙星、加替沙星
5

由表2~4可知，不同源地的大肠杆菌菌株，对喹诺酮类药物的耐药率有明显差异，其中，所以细菌对恩诺沙星的耐药率均为100%，而对加替沙星及克林沙星的耐药率分别为58.8%、5.9%；对强力霉素的耐药率高达100%；氟苯尼考的耐药率也高达94.1%；克林霉素、阿米卡星的效果相对较明显，耐药率分别为5.9%、17.6%；但 SMM/TMP（5/1）联用效果并不佳，耐药率也高达82.4%。各种药物的MIC50以及MIC90浓度最高的均为SMM/TMP（5/1），均>640 μg/mL；MIC50最低的为阿米卡星的1.25 μg/mL，MIC90最低的为克林沙星的5 μg/mL。对于不同源地的大肠杆菌来说耐药情况如表4所示：达到四重及四重以上的耐药菌株高达14株，分别为：2、3、10、12、14、21、22、27、28、29、30、31、33、34号菌株，其中常见的耐药组合为：氟苯尼考+多西环素+SMM/TMP+恩诺沙星，在17株受试菌中占82.35%，而且第21、28、33号菌株均同时对六种抗菌药物产生多重耐药性。
3讨论
1）大肠杆菌是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当做正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物的病原性，尤其是对幼儿和幼畜（禽），常引起严重的腹泻和败血症。随着大型集约化养畜（禽）业的发展，病原性大肠杆菌对畜牧业造成的损失已经日益明显[10]。大肠杆菌菌株可能感染多种哺乳动物和禽类，大多数临床发病的病例多见于鸡，火鸡，鸭河仔猪[11]。大肠埃希氏菌是动物肠道的常在菌，其密度为108/g个菌或略少些该菌在饮用水中的出现被认为是粪便污染的指标。正常鸡内10%~15%的大肠杆菌是潜在的致病性血清型[12]。致病性大肠埃希氏菌经常通过鸡蛋传播，而成为雏鸡大量死亡的病因。致病性大肠杆菌在新孵出的雏鸡消化道中出现率比孵出这些雏鸡的鸡蛋要高,说明致病性大肠杆菌在孵化后徐素传播。啮齿动物的粪便经常含有致病性大肠杆菌，通过污染的井水也可将致病性血清引入禽群。
2）根据实验结果可知，这些受试菌株对四环素类的多西环素、氯霉素类的氟苯尼考等动物专用的药物耐药性较强，耐药率分别为100%、94.1%。分析其原因可能是由于四环素类药物作为保健药物长期拌料使用而引起的交叉耐药性，如：土霉素等；氟苯尼考自作为动物专用抗菌药物以来被长期大量滥而使细菌对其敏感性逐步降低以致产生大面积耐药菌株的产生。自据有关资料称大多抗菌药物如β-内酰胺类、氯霉素、磷霉素、氨基糖苷类药物均主要通过大肠杆菌外膜蛋白(OmpF和OmpC，主要是OmpF)进入细胞内发挥抗菌作用的[13]，推测对这类抗菌药物的耐药机制可能与大肠杆菌外膜蛋白的变化有关。
其中，喹诺酮类药物作为一种应用较晚的广谱抗菌药物[14],其耐药性也呈逐年上升的趋势[15]，如克林沙星、加替沙星、恩诺沙星的耐药性分别为5.9%、58.8%和100%。
可见，受试大肠杆菌对同一类药物的不同种类抗生素的耐药率有着明显差异。如：恩诺沙星耐药率高达100%，这些在我省的郑州地区和南阳地区表现最为明显。其中，其MIC值为同类药物的4~256倍，原因可能由于长期用作动物专用药物被大量滥用所引起，这也表明动物源大肠杆菌对其适应性产生速度之快,也说明兽医临床上对药物的选择并非越新越好；而受试菌株对克林沙星及加替沙星的耐药率有明显的降低，这可能是由于目前防治大肠杆菌病的选择药物习惯有关，恩诺沙星作为动物专用药物而被经常大量使用，而克林沙星及加替沙星较少使用。由此推测，耐药性的产生可能与次中药物的使用时间按成正相关。
根据试验数据，耐药率较小的药物除了克林沙星外还有阿米卡星，其耐药率为17.6%。分析表2中阿米卡星的MIC值，得知猪源大肠杆菌的MIC值整体较小，其中有10株猪源大肠杆菌的MIC值不大于1.25 μg/mL，禽源大肠杆菌对阿米卡星的MIC值整体明显高于猪源大肠杆菌的MIC值（除个别的33、34号菌株较高外）。猪源大肠杆菌对阿米卡星的耐药率为8.3%，而且对66.7%的猪源大肠杆菌MIC值均<0.625 μg/mL，而阿米卡星对禽源大肠杆菌则不及猪源大肠杆菌敏感。究其原因，可能是由于可能是由于菌源种属差异及阿米卡星在禽源大肠杆菌病和猪源大肠杆菌病的使用率不同有关。对于33、34号菌株的个别现象，推测原因，可能是由于曾经多次使用过阿米卡星防治疾病所致。
3）根据表4得知，受试菌株几乎均存在多重耐药性这一显现。其中常见的耐药组合为：氟苯尼考+多西环素+SMM/TMP+恩诺沙星，在17株受试菌中占82.35%。由于，动物专属药物的长期使用及交叉耐药性的产生，致使多重耐药性的产生。也就是说我们临床联合用药时，这些配伍已经对大肠杆菌效果大大减退，尽量选择其他的组合进行联合用药。昔日有效的许多药物渐成无效或低效，为了减少耐药性的产生，延长抗菌药的使用寿命及治疗效果，应该规范合理使用抗菌药物，对养殖场分离细菌进行药敏试验，加强耐药性的流行病学调查，采用合理的联合用药、交叉用药、轮换用药的方式增加药物的使用寿命方能取得良好的效果[17]；开发有效的抑制剂等增效剂，与抗菌药物联合使用提高药物的敏感性,降低使用剂量[18,19,20]，减少耐药性的产生。

致谢：在本论文的写作过程中，我的指导老师苑丽倾注了大量的心血，从写作提纲，到一遍又一遍地指出每稿中的具体问题，严格把关，循循善诱，在此我表示衷心感谢。同时向在我学习期间给我极大关心和支持的各位老师以及关心我的同学和朋友表示由衷的感谢！

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