hela细胞的培养传代.doc

hela细胞的培养条件为:
高糖DMEM培养基,100ml/l胎牛血清;培养液中一般血清含量为10%
传代步骤: 1． 倒去细胞培养液(对于小口的培养瓶可采用顷倒方法,对于培养皿,必须用吸管吸出)
2． 吸取适量的PBS加入培养瓶中,轻轻振荡后弃去重复一次,以清于血清成分,
利于胰酶消化
3． 加入适量0.25%胰蛋白酶（一般100mm培养皿可加入1ml，15cm 培养瓶加入5-8滴）转动培养瓶，使其湿润整个细胞房，高温下消化2-3分钟。
翻转培养瓶，肉眼观察细胞单层，见细胞单层薄膜出现针孔大小空隙时即可顷去消化液，如消化程度不够可延长消化时间，或置于37°C孵箱中加速胰酶作用如见大量细胞片装脱落，已消化过头，则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作
4． 加入适量培养液终止消化
吸取瓶中培养液反复冲瓶壁上的细胞层，至全部冲下轻轻吹打，混匀，成细胞悬液取样计数，调整细胞浓度为5′10 /ml
15cm 培养瓶培养时，吸取1ml细胞悬液加到新培养瓶中，加入4ml培养液，盖好,置37°C孵箱中培养。
传代的天数要以HELA细胞的生长密度为基础,细胞密度大了就要传,应该每天观察HELA细胞,注意其生长状态.HELA细胞的生长分5期:
游离期
细胞经消化分散后，由于愿生质收缩及细胞弹性，细胞成圆形，折光性强，呈悬浮状态。
吸附期
接种24小时后，由于细胞的附壁特性，开始贴壁，圆形细胞变成延展状态。
繁殖期
细胞快速生长、分裂，形成细胞岛直至细胞单层。
维持期
细胞形成单层后生长与分裂减缓、折光性减弱，细胞内颗粒增多，由于代谢物的积累，CO2增多，培养液变黄。
衰退期
如不及时换液和传代，由于营养缺乏、代谢物积累，细胞内颗粒进一步增多,立体感差，细胞皱缩、脱落、逐渐衰老死亡。
应该在其维持期和衰退期及时换液.一般而言是4天换一次液.