利康保对断奶仔猪生产性能、肠道菌群及免疫水平影响的研究.doc

利康保对断奶仔猪生产性能、肠道菌群及免疫水平影响的研究

      （四川农业大学）

摘要：选用72头28±2日龄断奶杜×长大三元杂交仔猪，随机分为四个处理，每个处理三个重复，每一重复6头猪((♂3、♀3))，自由采食和饮水。结果表明：日粮中添加低利康保对断奶仔猪平均日增重(ADG)、腹泻率有明显的影响(P<0.05)；与对照组相比，添加利康保能极显著的降低仔猪肠道大肠杆菌的浓度(P<0.01)，抑制其他病原菌的生长。所有的试验组都能显著(P<0.05)促进结肠、盲肠和直肠中双歧杆菌的增殖。不同利康保添加量对结肠中乳酸杆菌的增殖效果与对照组相比，差异不显著(P>0.05)；但对盲肠、直肠乳酸杆菌的增殖效果不一致；与对照组相比，添加利康保没有显著提高血清猪瘟抗体效价、免疫球蛋白A以及免疫球蛋白M(P>0.05)，但是能显著提高血清免疫球蛋白G的含量(P<0.05)。
关键词：利康保；断奶仔猪；生长性能；抗体水平；肠道菌群

饲用抗生素的应用在带给人们极大利益的同时, 它的滥用也给人类带来了越来越大的麻烦：滥用抗生素会使细菌产生抗药性、长期使用抗生素造成畜禽机体的免疫力下降，从而对疫苗的接种产生不良影响、长期用抗生素可引起畜禽内源性感染、会在畜产品和环境中造成残留。
随着微生态学理论的发展，人们发现肠道有益菌群如双歧杆菌、乳酸杆菌等与宿主在免疫、营养、急性和慢性感染等方面都有密切的联系。许多研究表明，利康保具有促进双歧杆菌等动物体内有益菌增殖、抑制有害菌及减少肠内腐败物质等多种生理性功能，从而从多方面改善宿主动物健康。本实验研究的目的，主要是考察不同利康保添加水平对断奶仔猪生产性能、肠道菌群、免疫水平的影响，找出利康保的最适添加量，为利康保在饲粮中的应用提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 试验品  试验材料为重庆雨润生物制品有限公司生产的利康保。
1.2 试验动物及分组  试验选用72头28±2日龄杜×长×大仔猪按照单因素4处理3重复随机设计，各组基础日粮相同。实验从28日龄断奶时开始，为期42天。具体分组情况如下：
A．基础日粮+ 2‰金霉素预混剂2kg/t；B．基础日粮＋利康保4%；
C．基础日粮＋5%利康保；　D．基础日粮＋利康保6%；
每个处理3个重复，每个重复6头仔猪 (3♂、3♀)，A为对照组，B、C和D为试验组。
1.3 基础日粮  试验基础日粮的配置参照中国瘦肉型猪饲养标准（GB8471～87），结合猪场实际情况设计而成，试验日粮为粉料，饲料原料配比及营养水平见表1：
表1    基础日粮配比和主要营养水平
原料
配比（%）
营养水平
玉米Corn
52
消化能DE（MJ/kg）
15.41
脂肪粉Fat
3.0
粗蛋白CP（%）
21.04
豆粕Soybean
20.0
赖氨酸Lys（%）
1.35
鱼粉Fish meal
7.0
蛋氨酸+胱氨酸Met+Cys（%）
0.85
预混料Premix
8.0
钙Ca（%）
0.82

有效磷AP（%）
0.63
代乳粉Milk placer
10.0

合计Total
100.0
饲料单价Cost：3.5元/千克
预混料为每公斤全价料提供: VA5500IU, VD32200IU, VE50mg,VK32.2mg, VB1228 mg, 核黄素5.0mg, 硫胺素1.5mg, 尼克酸25mg, D-泛酸12mg, 胆酸800mg, Cu220mg, Fe110mg, Mn30mg, Zn160mg, I20.3mg, Se0.3mg, 赖氨酸1350mg, 蛋氨酸500mg。
1.4 饲养管理  试验于2005年3月10日至2005年4月22日在四川农大试验猪场进行。试验在同一保育舍内，用自动食槽，每日加料一次，准确记录投料量，每天清洗猪栏2次，每周消毒一次，观察试验猪只生长、采食情况，记录腹泻头数和死亡头数，常规防疫。
1.5 测定指标与方法
1.5.1 生产性能  试验开始和试验结束早饲前个体空腹称重，以计算日增重，以栏为单位测定采食量，根据采食量及增重计算料重比。
1.5.2 腹泻频率  试验开始后，每日观察仔猪排粪情况，记录腹泻个体和持续时间，最后以每重复仔猪发生腹泻的头日数除以总的饲养头日数计算出腹泻频率。
1.5.3 肠道菌群 
1.5.3.1 取样  试验最后一天，每重复随机挑取一头健康仔猪进行屠宰，立即剖腹并结扎所取肠段的两头（分别为结肠、盲肠和直肠），用酒精棉球消毒各结扎口后，放入已灭菌塑料袋中，运回实验室备用。
1.5.3.2 稀释  样品运回实验室后，立即在超净工作台上称取1.0g左右肠内容物于无菌试管中，加入先配好并已灭菌的稀释液9ml，加入玻璃珠振荡30秒钟，此为10-1；静置一段时间，吸取上清液1ml于盛有9ml稀释液的试管中进行10-2稀释，振摇3～4秒钟，并依次进行10-3～10-7倍稀释。
1.5.3.3 接种与培养
大肠杆菌  用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物10-4～10-6稀释液0.1ml涂布接种于麦康凯NO.3培养基平皿上（各稀释度设3个重复，并编号），置37℃培养箱中有氧培养24小时后，选取粉红色或红色，表面光滑、凸起，边缘整齐不透明，质地软、粘，直径1.0～3.0mm的菌落进行计数，并进一步作理化鉴定。
乳酸杆菌  用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物10-5～10-7稀释液0.1ml涂布接种于Rogosa琼脂培养基平皿上（各稀释度设3个重复，并编号），置37℃培养箱中有氧培养48小时后，选取乳白色，稍偏黄，表面光滑、凸起，边缘整齐不透明，质地软，直径0.6～2.7mm的菌落进行计数，并进一步作理化鉴定。
双歧杆菌  用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物10-5～10-7稀释液0.1ml涂布接种于双歧杆菌分离选择性培养基（罗泽民，1995）平皿上（各稀释度设3个重复，并编号），置37℃培养箱中厌氧培养48小时后，选取乳白色，表面光滑、凸起，边缘整齐不透明，质地软，直径0.7～2.5mm的菌落进行计数，并进一步作理化鉴定。
沙门氏菌  挑取各肠段的10-1稀释液各一环于装有氯化镁孔雀绿增菌培养基的试管中进行增菌，37℃培养18小时以后，用微量取液器取0.1ml涂布接种于SS琼脂培养基上，37℃培养24小时后进行菌落计数。
1.6 猪瘟抗体效价  在仔猪断奶后的第21天皮下注射猪瘟弱毒活苗，并于注射前和注射后第14天前腔静脉采血，取血清，采用正向间接血凝试验测定猪瘟抗体效价。
1.5 血清IgG、IgA、IgM  于试验结束时，每重复随机挑取1头仔猪，前腔静脉采血，用免疫比浊仪测定血清中IgG、IgA和IgM的含量。
1.7 统计分析  试验数据采用SPSS10.0统计软件进行方差分析和邓肯氏多重比较, 记录平均值和标准差, 并检查各处理间的差异是否达到显著水平。
2 结果与分析
2.1 利康保对仔猪生长性能的影响 
通过42d的饲养试验，测定了利康保对断奶仔猪ADG、ADFI、F/G以及腹泻频率的影响，结果见表2.
表2   利康保对仔猪生长性能的影响
项目
A组
B组
C组
D组
始重（Initial BW）
7.50±1.21
7.60±1.03
7.55±0.85
7.58±0.88
末重（End BW）
23.80±1.90a
25.20±1.26a
27.20±0.80b
25.50±1.70a
增重（Gain of BW）
16.30±0.42a
17.60±0.34a
19.65±0.28b
17.92±0.44a
平均日增重（ADG）
388±20a
420±30b
469±40c
427±30b
料重比（F/G）
1.75:1±0.17a
1.65:1±0.22a
1.45:1±0.12b
1.68:1±0.15a
日采食量（ADFI）
679±56.32a
691±47.25a
678±58.61a
717±67.54b
由表2可知： 增重与料重比性状C组与其他各组差异显著（P<0.05），平均日增重性状差异极显著（P<0.01），其比A、B、D组ADG分别提高17.27%，10.44%，8.96%； 同时B组提高断奶仔猪日增重8.2%，D组提高断奶仔猪日增重10%。在料重比性状上，C组与其他3组差异显著（P<0.05），A、B、D之间差异不显著。在日采食量性状上，D组与其他3组差异显著（P<0.05），A、B、C之间差异不显著。
表3  利康保对仔猪腹泻的影响
项目
A组
B组
C组
D组
样本数
18
18
18
18
腹泻猪头数
15
12
6
15
腹泻猪饲养日
200
48
28
196
试验日数
42
42
42
42
腹泻指数
0.2646±0.02a
0.0635±0.01b
0.0370±0.02b
0.2593±0.03a
在腹泻指数性状上，B、C组都能显著降低猪腹泻发病率（P<0.05），B组降低断奶仔猪腹泻发病率60.7%(绝对值)，降低腹泻频率77.88%。C组降低断奶仔猪腹泻发病率80.3%(绝对值)，降低腹泻频率90.3%。D组虽然降低断奶仔猪腹泻发病率5%(绝对值)，降低腹泻频率13.3%，但与对照组差异不显著。由此可以看出，利康保6%的添加量可能过量，从而导致腹泻。
2.2利康保对断奶仔猪肠道菌群的影响 
利康保对断奶仔猪肠道菌群的影响结果见表4。
表4   利康保对断奶仔猪肠道菌群的影响
项目
A组
B组
C组
D组
大肠杆菌E.coli

结肠Colon
7.25±0.05 A
6.15±0.01B
6.19±0.04B
6.41±0.01C  
盲肠Cecum 
7.23±0.22A
6.10±0.09B
6.33±0.20C
6.33±0.05C
直肠Rectum
7.20±0.01A
6.22±0.11B
6.43±0.07B
6.46±0.32B
双歧杆菌Bifidobacterium

结肠Colon
8.67±0.03 a
8.65±0.18 a
9.08±0.07 b
9.04±0.16 b
盲肠Cecum
8.17±0.07 a
8.89±0.03 b
8.73±0.07 b
7.85±0.13 a
直肠Rectum
8.59±0.02 a
8.94±0.09 a
9.34±0.06 b
9.37±0.06 b
乳酸杆菌Lactic bacteria

结肠Colon
8.24±0.19
8.65±0.14
8.30±0.04
8.21±0.11 
盲肠Cecum
8.18±0.05 a
8.17±0.15 a
8.67±0.02 b
8.87±0.10b
直肠Rectum
8.64±0.01b
8.27±0.23 a
8.44±0.02 a
8.02±0.04 a
2.2.1 利康保对大肠杆菌的影响   健康仔猪小肠中大肠杆菌一般为l05.9个，大肠中为107.1个。从表中可以看出，不同利康保添加量都能极显著(P<0.01)抑制结肠、盲肠和直肠中大肠杆菌的增殖，B、C组的利康保添加量效果最好。在对照组中，由于金霉素主要对革兰氏阳性菌有效，而大肠杆菌为革兰氏阴性菌，因此其对大肠杆菌的抑制不明显。
2.2.2 利康保对双歧杆菌的影响  据报道猪的结肠、盲肠、直肠内定居的正常微生物群占优势的菌群中，双歧杆菌就是其一，每克肠内容物所含不同菌群的菌数对数值均达到8.0-8.5。从表中可以看出，不同利康保的添加量都能极显著（P<0.01）抑制结肠、盲肠和直肠中大肠杆菌的增殖，C组的添加量效果更好。用递增方式添加利康保能显著（P<0.05）促进结肠、盲肠和直肠中双歧杆菌的增殖。B组的利康保添加量能显著（P<0.05）促进结肠和直肠中双歧杆菌的增殖，但对盲肠中的双歧杆菌的增殖效果不明显。
2.2.3 利康保对乳酸杆菌的影响  在健康动物消化道占优势的乳酸杆菌其定植位置和数量是相对稳定的。在定植部位上，猪以盲肠和直肠定植最多，直肠为每克内容物含108个。但也受种属、年龄、饲料、疾病、药物等而发生演替。从表中可以看出，B组和C组的利康保添加量能显著提高盲肠中乳酸杆菌的浓度（P<0.05），但是在结肠和直肠中，不同利康保添加量对乳酸杆菌的增殖效果与对照组相比差异不显著（P>0.05）。
2.2.4 利康保对沙门氏菌的影响  本次试验中无论是对照组还是试验组，所取肠段内容物中均未检出有沙门氏菌。
2.3 利康保对断奶仔猪猪瘟抗体效价的影响 
本试验发现，二免后第15天对照组猪瘟抗体效价没有变化，各利康保组的猪瘟抗体效价普遍有所上升。
表5  利康保对断奶仔猪猪瘟抗体效价的影响
项目
A组
B组
C组
D组
注射前
3.34±1.13
3.68±0.56
3.35±0.57
3.01±0.00
14天后
3.34±0.56
4.01±1.00
3.01±0.00
3.68±0.56

2.4 利康保对断奶仔猪血清中免疫球蛋白的影响 
利康保对断奶仔猪血清中免疫球蛋白的影响结果见表6。

 表6    利康保对断奶仔猪血清IgG，IgA，IgM的影响 
项目
A组
B组
C组
D组
免疫球蛋白G  IgG(g/l)
1.19±0.08a
1.58±0.08b
2.05±0.16d
1.89±0.07c
免疫球蛋白A  IgA(g/l)
0.49±0.15
0.60±0.34
0.77±0.51
0.53±0.13
免疫球蛋白M  IgM(g/l)
0.83±0.11
1.03±0.16
1.15±0.21
1.04±0.06
          经显著性检验，不同利康保添加量能显著（P<0.05）提高断奶仔猪血清中IgG的浓度，其中C、D组差异极显著（P<0.01）。对血清IgA和IgM也有提高的趋势，但统计上差异不显著（P>0.05）。
2.4.1 利康保对血清IgG的影响  从上表可以看出，不同利康保添加量能显著提高断奶仔猪血清IgG水平(P<0.05)，其中以C组效果最好。
2.4.2 利康保对血清IgA的影响  与对照组相比，B、C、D组的IgA都有所提高，以C组对其影响最大。
2.4.3 利康保对血清IgM的影响  从上表来看，以C组效果最好，B、C、D组均比对照组高，各组差异不显著（P>0.05）。
从以上分析可看出，利康保能提高断奶仔猪血清抗体水平，以5%利康保组为最好。
2.5 经济效益分析 
表7显示经济效益分析情况，结果表明饲料中添加利康保可明显提高经济效益，C组平均每kg增重饲料成本比对照组节约了8%，而D组节约3%。由此可见，5%利康保组能够显著提高经济效益，降低生产风险。
表7  添加利康保对断奶增重经济效益的影响     kg, 元/kg
项       目
A组
B组
C组
D组
全期平均耗料量 Feed consumption
22.37
21.56
24.27
20.71
相对耗料量 Relative feed consumption
100
96
108
92
饲料单价 Feed price
1.92
2.08
2.00
2.05
相对饲料单价 Relative feed price
100
108
104
106
全期平均增重 Average gains
12.35
12.62
15.06
12.49
相对增重Relative average gains
100
102
121
101
增重饲料成果Feed cost/gain
3.48
3.55
3.22
3.40
相对成本Relative feed cost/gain
100
102
92
97
3 讨论
3.1 利康保对仔猪生产性能的影响 
仔猪的生产性能较高时，其日粮中添加利康保对生产性能未见有影响；相反，仔猪的生产性能较差，处于恶劣环境或患病时，其日粮中添加利康保可进一步改善仔猪生产性能。也就是说，低生产性能仔猪饲喂利康保更有利于其生产性能的改善。艾武(2002)指出这种反应模式与抗生素的相似，但反应程度低于抗生素。本次试验是在管理严格的饲养场进行，选用28日龄断奶仔猪作为试验对象，这是与当地的饲养方式相一致的。与对照组相比，添加利康保对仔猪ADFI、F/G、ADG和腹泻频率都有所改善。其中对ADG和腹泻频率的影响大于对ADFI、F/G的影响。这种反应机制与抗生素的相一致。
3.2 利康保的添加量对其使用效果的影响 
试验结果表明，不同水平利康保添加量对断奶仔猪生产性能都有不同程度的改善。C组增重比对照组提高17.27%，比B、D组ADG分别提高10.44%，8.96%，这与Bolduan的结果是一致的；且C组的腹泻频率是最低的，这与设计该组的目的和断奶仔猪大肠杆菌的排泄情况相符合。本试验中，C组的ADG、ADFI和F/G分别比对照组提高9.01%、5.29%和-4.12%，趋势与前人结果相一致，在本试验条件下，除腹泻频率外，ADG、ADFI、F/G都以5%的利康保效果最好。
3.3 抗生素与利康保对仔猪生产性能的影响 
试验研究对比了利康保与金霉素分别对仔猪生产性能的影响。与金霉素组相比，ADG、ADFI、F/G和腹泻率分别提高了9%、-7.2%、-11%和-53%，其中以B、C组最好，表明了利康保比金霉素效果要好，这可能由于金霉素主要对革兰氏阳性菌有效，而大肠杆菌为革兰氏阴性菌有关。
3.4 利康保对仔猪肠道菌群及免疫水平的影响 
试验结果表明，添加利康保能显著降低仔猪各肠段的大肠杆菌的浓度，表明了大肠杆菌与仔猪腹泻存在一定的相关性。而且在同样的条件下培养大肠杆菌时，对照组的培养基上还生长了其他一些有害菌，试验组则没有出现这种情况，这是否能进一步说明利康保的抑菌作用还有待研究。本试验中利康保对乳酸卡丁菌和双歧杆菌的增殖作用在不同肠段表现不一致。
4 结论
4.1 在断奶仔猪日粮中不添加抗生素的情况下，添加适量的利康保能提高仔猪的生产性能，降低腹泻频率；表明利康保能部分或完全取代抗生素在饲料中的应用。其中以5%的利康保添加量综合效果最好。
4.2 利康保能降低断奶仔猪结肠、盲肠和直肠中大肠杆菌的浓度，抑制有害微生物的生长；能促进结肠、盲肠和直肠中双歧杆菌的增殖，对乳酸杆菌的增殖也有一定促进作用，从而最终保证仔猪健康，促进仔猪生长。
4.3 利康保对断奶仔猪的体液免疫有一定的影响。

简单利润计算：仔猪从保育床下来开始全过程喂养（总使用利康保10公斤左右合计65元）可以提前18-20天出栏。按照目前生猪价格计算基本上每头生猪产生多出利润150-200元左右。

（友情提示：基本上每天每头多生长150克）
关键词：改善肠道吸收功能、少排泄、少生病、多采食、多长肉、早出栏、多赚钱！

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