健康青少年口腔正常菌群.pdf

中国穗 生态堂 杂志 I 年第2 卷 健康青少年 口腔正常菌群的初步研究 大连 学院微生卷学研究 太连1 1 8 0 2 3 蒋 采青：j l 芒蓉 扬 是蓠 康 白 提 要本文 采 用非选 择 性培养 基对 2 2 名 健康 青少 年的 唾渡、掏裂 菌斑、龈 上苗 斑及龈 下 苗斑 中 的需氧偿 燕 性 厌 襞菌及 专 性厌 氧菌 进行 了分 离培 养 并计 算其 在 不 同标 本 中【可培 养 菌 的百 分 比及 检 出宰。结果共 分离 到 包括 I 8 个 菌眉 妁 s 种 细菌。其 中 链 球 菌、放 线茼、奈 瑟氏 球菌、二 氧化碳 瑾 纤维 苗、樊 杆菌，拨 杆 菌 奴 卡 氏菌及棒 状 杆 菌在 口腔4 个 部 位的 检出 率及 所占 比例均 较 高 是健 康青少年 口腔中 时优 势菌群 运过 比较 还发 现 其 中一 些菌 在 口腔4 个部 位 的分 布存在 一定 差异 本文 还 采 用刚果 红 负性染 色涂 片 法 镜 下 观察 龈上、龈 下菌 斑 中妨螺旋 体 并 计算 其 相对 比 例 结果 龈 下菌斑 中螺 旋 体 的相 对 比 例明 显高 于龈 上菌 斑 关 键 词L7腔正 常菌群口腔螺 旋体 为 了解青少年 时期 口腔 菌群 的 一 般 情 况，本文从 微生态 学观 点出 发，运用 微生态 学实验方法，研究健康青 少年 口腔各 部位 的 正常菌群的组成，为 口腔疾病 的 防治 和 口腔 微生态学 的研究提供实验 依据。材料与方法 一，安验 材料 1 实验 器 材：厌 氧 手 套 箱(F o r ma S e l e a t i f i e An a e r o b i e Sy s t e m)，SL一 1 型 离子色谱仪(成都市解放仪表厂)。2 培养基；本 实验采 用 了 牛 心 牛 脑 浸 液血琼脂(简称 B HI A)，用于各种 厌氧 菌、大多数兼性厌氧菌及 微需氧菌的分 离培 养：采用普通血琼脂(简称 B A)，用 于 多 数需氧 菌及兼 性厌氧菌的 离培养；采 用蛋 白胨酵 母提 取 物 一 葡，糖 液 体 培 养基(简称 P YG)，用于培养瓣菌后进行离子色 谱分析；采用硫乙醇酸盛转送稀释液，用于 厌 氧菌分离培养 前标本 转 送和稀释。3 试剂：系列厌氧 菌微量生化反 应 鉴 定 试剂(华西 医科大学 口腔研究 所研制)；2 X 刚尽红 二、实 验 方 法 1 实验对象 的选择 从 成都市某 中学 选 择健康 青少年2 2 名，男性 l 0 名，女性 l 2 名，年 龄在l 3 l 6 岁。选择标准 1)无全身 系 统 性疾病；2)近3 个月无使用抗生索 史 3)临 床检 查无龋病及牙周病。2。标本 的采集：采集标本 前，检 查并记 录受检 者 的牙 龈指数(Gi n g i v a l i n d e x)，菌斑 指数(Pl a q u e I n d e x)，龈 沟 出血 指 数(S u l e ll s B l e e d i a g I n d e x)。检查 L-I _ ：一 六个牙齿作为代表。上颔牙检 查 其 颊 侧，下 颔牙检查其舌侧。2 2 名受检 者 的牙龈 指数 均为0，菌 斑 指 数 为 0。7 9 0。2 9，龈淘 出血 指数为0 0 2 3 0 0 6。标 本 均于1 0 时采集。收 集受检者非刺 激 性 自然流出的唾液于带玻珠 的灭菌试营 中。沟裂 菌斑、龈上 菌斑、龈下菌斑三 种标本 在 局部 用无菌棉纱 隔湿 的情 况下，用镰形器 在 6 I l的骀面刮取沟裂菌斑，在一；一的近 中面 刮取 龈上菌斑，继续将 龈 上 菌 斑 除 净 后，用匙形器在 一 一 的近 中面 龈下，刮取 华西医科士学 口腔压学院中心实验室 成都6 1 0 0 4 1 华西 医科大学 口腔压学跪口腔内科。成都6 1 o o 4 1 维普资讯 http:/ 酿下菌斑，分别将取到 的三种标 率立 即混 入 含 I ml 转送稀释液及带 玻珠 的试管 中。在：的远中面用上述同样方法刮取 龈上及龈下菌斑标本，分别与玻片上 事先滴 有 1 滴 的2 刚果红染料 充分混 合，并涂抹成 均匀的薄 片，嚣空 气中 自然干燥，用 于刚果 红 负性染色，观 察 口腔螺旋体 的情 况，3 标本的稀释，接 种，培 养 立 印将标本 在旋涡震 荡器上 分散 1 O 秒 钟 左 右，L I 转送稀释液作 l o 倍系列稀释每份 标 本选择适 当的两 种稀 释度，分 别 取o 0 2 m1，各滴 于BHI A及 BA平 板上 各 1 2面 积 上，经L型玻棒 均匀涂布后，将 B HI A 置 于 厌氧手套箱 中，充 入8 O N。、1 O H，1 0 CO：，3 7 培养 5 天 将BA平板置于普通孵 箱 中，3 7 培养 1 4 4 8 小 时 4 细 菌鉴定 具体过 程如下：物IA一墨 霉 蠡 萋=袅 蔷 嚣 扩 大 培 养 f B HI A 上 菌落+-BA上 菌落 0 转 种 转 种 r BHI A。厌氧一 一 BA，3 7 C，2 4 h r i 3 7 ，4 8 h r J I l l 转 种 l l 涂 片，革 兰P YG肉汤 耐氧试验 涂 片，革兰 氏染 色 氏染色 厌氧，3 7 f 4 8 h r J J J _生 化试验 一 一 涂 片，革兰 氏染色 l 代谢 酸测定 生化试 验采 用夏 传初的 9 B 于 L 反血扳微 量生 化 快遗鉴 定 口腔 厌氧蕾 的方往 综 台上述结果，主要 与伯杰 氏细 菌学鉴 定 手册 第九版 所述 的各种 菌的模 式株 的特征 比较，把分 离到 的菌株归到相应的属 以至 种。计算各种 菌在唾液、沟 裂菌斑、龈上 菌 斑，龈下菌斑 中的检 出率 对各 部位 常检 出 菌，先 计算其在各 阳性检 出者的相应部位 占 可培养菌的百分数，然后 求各百 分数 的均数 及标 准差：昱 S D呖，以表示该 菌 在 该 阳 性检 出人群 中的水 平。5 刚果红负性染色涂片的观察 将已干燥 的剐果 红 涂 片 用 浓 盐 酸 熏 片，当涂 片由红色变成蓝色后 即 可 观 察 计 数。显微镜 下放 大l O O O 倍 可 见涂 片为蓝 色 背景，螺旋体、细 菌为光亮 的 白色，分别计数 龈上，龈 下茁斑 涂片 中螺旋体 的相对 百分比。培 果 一，从 口腔4 十部位捡 出的细 菌种 娄 对在 B A、B HI A上 分 离到 的细 菌 进行 鉴 定，共鉴定 出包括l 8 个菌属的 3 5 种细 菌。这些 菌多数鉴定到 种，少数 仅鉴定到属，还 有 少部 分未能鉴定。鉴定 出的需氧 菌包括：奴 卡氏菌、奈瑟 氏球 菌、布 兰汉 氏球 菌、棒 状杆菌、藤黄徽球菌；兼性厌氧菌包括：链 球菌、内氏放线菌、粘性放线菌、龋齿罗氏 苗、乳杆菌、表皮葡萄球菌、肺炎双球菌及 未定种革兰氏阴性及阳性兼性厌氧杆菌：专 性厌氧苗包括：衣 氏放线 菌、龋齿放线菌、梅 氏放线 菌、酿脓放 线 菌、丙酸 蛛网菌、真 杆 菌类 杆菌梭杆 菌二 氧化 碳 噬 纤 维：目 j 态 二 置 维普资讯 http:/ 鹾 r、韦荣氏球 茵、生痰月形单胞菖颊纤毛 菌，消化链球菌及未定种革兰氏阴性碾氧杆 菌。可见 口腔 中专性厌 氧菌及 兼性厌氧菌 的 种类 较多：、口腔4 个部 位的优 势苗群硬 优 势 茵 在 口腔4 4-部位 的分 布-33 B A分 离到 柏链 球 茵、奈 瑟氏球 菌、奴 卡氏 菌，棒状杆菌以及在B HI A 分 离 到的链球 菌、放线菌、类杆菌、梭杆菌、二氧化碳噬 纤维菡在各部位的检出率及所占 比 倒 均 较 高 所以，我们认为它们是健 康青 少年 日腔 中的优势 菌群。从 表1，2 可 以看 出，在菌属水 平 上，从 通过 对优势 菌在口腔4 个部位 的检 出 蜜 袭 1 在BA平 板上 常检 出菌的 拴 出率 及相对 比例 衰2 在 BHI A板上 常检 出菌 的检 出率及 相对 比例 维普资讯 http:/ 04 及相对 比划的统 计学 比较发现；唾液链 球菌 主要分布于 唾液 中，血链 球菌主要 分布 子牙 菌斑 中，米 蒂氏链球 蔺及轻型链球 菌在 I 1 腔 中分布 较广，变形链球 菌，米勒 氏链球 菌较少 存在 内氏放线菌较广泛地分布于 口腔 中，而衣 氏放 线菌，粘 性放 线菌较多分布 子牙 菌 斑 中：干燥奈 瑟 氏球菌，微黄 奈瑟 氏球菌及 粘液奈 瑟氏球 菌较一致地分布于 l 丁 腔 中，且 以干燥奈 瑟 氏球 菌为主；牙龈二氧化碳 噬纤 维 菌主要 分布 于龈上及龈下菌斑 中：类杆菌 以龈 下菌斑 中分布较多。通过镜检 刚果红负性染色涂 片，2 0 名受 检者 的龈上菌斑，龈下茵斑螺旋体 的相对百 分 比分 别为 1 1 3 0 0 0 1 7 5 1 6 0，榆 出率分 别为8 9 5 经秩和检验，两 部位 螺旋体 的相 对百 分比差异显著，P0 0 0 1。说 明龈下菌斑 中螺旋体的相对 含量高。讨 论 一 健 康 青 少年 口=空 正 宥微 生 物 群 的复 杂性：从人类 口腔微生态环境的变化及 H腔 微生物群的演替 过程，不难解释这 种复杂性 个体从 出生到成 年，口腔 微生态环境在不断 地发生变化，青少年时期恒牙完全萌出，口 腔 组织结构 发育成熟，口腔微生态环境趋 于 稳定。一些研究 表 吼在 1 0 岁左 右，口腔 内各 种菌的定 植过 程基 本完成，几 乎可 以从 口腔 中分 离到 所有 正常 成人 V-I 腔 中能分离到 的细 菌。7-、健康 青 少年 口腔优 势茵群在 口腔 中 分 布的 差异：优势 菌群 中的一些细 菌在 口腔 不 同部位 的分布 存在差异，这种差异是 多方 面原 因造成 的。但主 要可归结为微生态环境 方面及细 菌方面。不 同生境其理 化 特 性 不 同，ll p H、Eh 等。Es k o w(E s k o w R N，e t a 1 Ox yg e i i t e ns o ns i n L h c hu 1 2 1 a 月 o r ac a v t y A r c h O r a l Bi o1 1 9 7 1；】6 1 1 2 7 )证 明舌 前 部、舌 后 部、上额颊皱 稻 下颥颊镀 裙 的Eh 各 不相同。所 以说，口 腔 内备 不相 同的微生态灶是 口腔 微生物不同 分布定植 的基础；微生物 自身 特性及 其与 口 腔不 同组织 表面 的牯附力也与 其分布有 关。三，健康青 少年龈上 及告 R 下 苗斑 中 的螺 旋体：本实 验表明 在踺康 青少 年 的 龈 上 及 龈下菌斑 中存 在一定量的螺旋体，它 也是 r 1 腔正常微 生物群成 员之一，而且龈下 菌斑 中螺旋体 的相对 比例 高。肖晓蓉 等在镜 下观 察到 它是牙周 炎患 者龈 下菌斑 中的优势 微l，j：物，与牙周炎 相 关。R e s e a r c h on t he 0 r a J No r miI FI o r a of HeaI t h y Te e n ag e r s Ji ang H an q g，e t n I De pa r t e t l I o f M f c F O e o 0 0 9 -Da f J a n 1，P di ca f Col l e ge 口 口 1 1 6 0 23 L i 0o ni K 9 P r 0 i n Ce 维普资讯 http:/