小鼠眼球取血.doc

小鼠摘除眼球采血及分离血清
一．器材
离心管，弯头镊子，离心机，移液器，剪毛剪，乙醚。
二．步骤
1. 取血前准备
在相对封闭的空间内用棉花蘸取乙醚，对小鼠进行麻醉。用剪毛剪剪去胡子，防止发生溶血反应。
2 摘除眼球采血
（1）左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤，小指固定尾部；
（2）中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位，无名指按在腹部，捻动拇指，轻压取血侧眼部皮肤，使眼球充血突出；
（3）用弯头镊夹取眼球；
（4）根据需要捻动拇指与食指的方向，使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管；
（5）同时用左手中指轻按小鼠心脏部位，以加快心脏泵血速度；
（6）当血液流尽时，用脱臼法处死小鼠。
3. 分离血清
（1）将离心管中的血置37℃温箱或水浴1小时，也可室温2小时；
（2）再置4℃冰箱内3～4小时或过夜；
（3）待血液凝固血块收缩后，4000rpm离心10分钟；
（4）取上清于干净的离心管中，保存于-20℃，或加入防腐剂(0.01％硫柳汞或0.02％叠氮钠)，置4℃冰箱中保存备用。
三．注意：
1. 采血前，可给小鼠喂点水；
2. 摘眼球采血取血量能达0.8～1.2ml，但老年和疾病小鼠血量会降低；
3. 采血场所有充足的光线；室温夏季保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜；
4. 防止血液浸入眼部周围毛发，否则会造成污染和溶血；
5. 按压心脏时，用力一定要适度，若用力过度，一是会造成动物采血中途死亡，使采血不完全，二是有可能引起溶血现象发生，影响实验结果；
6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥；
7. 采血时要防止小鼠挣扎，否则会损失比较多的血样；
8. 血液凝固后不宜在4℃放置过久，否则会溶血。