《口腔黏膜渗出液检测HIV12型抗体的方法评价》《中国艾滋病性病》;2008年2月第14卷第1期18-20.pdf

论著口腔黏膜渗出液检测HIV1/2型抗体的方法评价史佳彬,杨丽华,徐军,郭静霞,马洪滨,李永利,李伯安,毛远丽(解放军第302医院临检中心,北京 100039)摘要:目的 评价口腔黏膜渗出液检测艾滋病病毒/型(HIV21/2)抗体的敏感性和特异性,及其与血液HIV21/2抗体检测试剂的一致性。方法 分别取已知HIV感染者及未感染者餐前及餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后,牙周疾病患者、健康志愿者的口腔黏膜渗出液标本,检测HIV21/2抗体。同时平行采集上述人群的血清标本,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV21/2抗体。并进一步通过ELISA方法检测标准血清转换盘,同时用此试剂检测该感染者的口腔黏膜渗出液标本中的HIV21/2抗体。结果 15例已知HIV感染者(餐前、餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后)口腔黏膜渗出液标本为阳性,其余口腔黏膜渗出液标本均为阴性;15例已知HIV感染者血清标本均为阳性,1例健康志愿者血清标本呈阳性(后经Western Blot试验确认为阴性),余血清HIV抗体均为阴性。该口腔黏膜渗出液HIV抗体检测试剂的敏感性为100%,特异性为100%,与ELISA检测的一致性为99185%。血清转换盘实验结果显示,血清标本于感染后的33天检出阳性,口腔黏膜渗出液于感染后的28天检出阳性。结论 利用口腔黏膜渗出液检测HIV21/2型抗体与现行的血液ELISA检测结果相近。口腔黏膜渗出液标本采集方便而且危险性小,在采血较困难的人群、基层医疗机构、艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊等,可考虑使用口腔黏膜渗出液进行HIV抗体的初筛检测。关键词:艾滋病病毒/型抗体;口腔黏膜渗出液中图分类号:R 37319 文献标志码:A 文章编号:1672-5662(2008)01-0018-03Evaluating the method of detecting antibodies to Human Immunodeficiency Virus Type 1 and Type 2(HIV21/2)in hu2man oral mucosal transudate specimensS HI Jia2bin,YANG Li2hua,XU Jun,et al1(Center of Clinical Laboratory,No1302Hospital of The PLA,Beijing100039,China)Abstract:ObjectiveTo evaluate the method of detecting antibodies to Human Immunodeficiency Virus Type 1 andType 2(HIV21/2)in human oral mucosal transudate specimens(OMT)1MethodsPaired OMT and serum specimenswere collected from 15 HIV positive cases,15 HIV negative cases,30 periodontal disease cases and 570 healthy volunteers,and the collected specimens were tested for HIV antibody by using OMT HIV21/2 test kits and ELISA kits1Paired OMTand serum seroconversion specimens were sequentially detected1ResultAll OMT specimens from HIV infected personsshowed positive reactions and the rest showed negative ones1All serum specimens from the HIV infected persons showedpositive reactions;one serum specimen from the healthy volunteers showed positive reactions either(only by Western Blottest)and the rest showed negative reactions1The sensitivity of the OMT test was 100%and its specificity was 100%1Ingeneral,the consistent rate of HIV21/2 antibody screened by OMT test and ELISA test was 99185%1As shown by theseroconversion test,positive reactions in serum specimens and OMT specimens were detected in 28 and 33 days after theinfection,respectively1ConclusionThe method of detecting HIV21/2 antibody in OMT specimens had high sensitivityand specificity and also showed similar results with those of the serum ELISA test1Therefore,this method is recommendedto be introduced in HIV antibody screening practice1Key words:HIV21/2 antibody;Human oral mucosal transudate specimens收稿日期:2007-07-11;修回日期:2007-09-03作者简介:史佳彬(1974-),女,主管技师,主要从事临床免疫学相关工作。通讯 作 者:李 伯 安,Email:LBA 2631net。毛 远 丽,Email:maoyuanlee hotmail1com。艾滋病病毒(HIV)的实验室检查结果是HIV感染者和艾滋病(AIDS)病人的诊断、处理及治疗的重要客观依据。目前有条件的初筛实验室广泛采用敏感性和特异性均较高的第三代双抗原夹心试剂,对可疑人群进行HIV抗体的初步筛选。但在采集标本时不仅对病人造成针刺损伤,还容易发生职业暴露。为此研发、引进简便、快速的HIV抗体检测试剂,应用于基层及现场开展快速检测,对推动艾滋病防治具有重要的现实意义。本研究旨在评价通过口腔黏膜渗81中国艾滋病性病 2008年2月第14卷第1期 Chin J AIDS STDVol114 No11 Feb.2008出液(oral mucosal transudate,OMT)检测艾滋病病毒/型(HIV 1/2)抗体的敏感性和特异性。为今后开展OMT HIV抗体初筛提供科学依据。1 对象与方法111 研究对象 根据 全国艾滋病检测技术规范 的标准评判HIV感染状况。15例已知HIV感染者来自河南,15例非HIV感染者来北京,30例牙周疾病患者来自北京,570例健康志愿者中370例来自北京、200例来自河南。112 实验室检测方法 血清转换盘及平行OMT标本购自BOSTON BIOMEDICA,INC(BBI)(北京玛诺生物制药有限公司提供)。OMT中HIV21/2抗体的检测采用胶体金标记免疫层析法(试剂由北京玛诺生物制药有限公司提供)。OMT标本的采集、洗脱稀释、检测及结果判读均按参考文献进行2。其中15例已知HIV感染者及15例未感染者分别取餐前、餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后的OMT进行检测。血清中HIV21/2抗体的检测采用ELISA方法(试剂购自北京现代高达生物技术有限公司),试验严格按说明书操作。对于OMT与血清检测结果不一致的标本,进行Western Blot确认试验。2 结果211OMT检测结果 15例已知HIV感染者分别取餐前、餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后的OMT同时进行检测,结果显示所有标本均呈阳性反应;同时15例未感染者的餐前、餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后的OMT均呈阴性反应。30例牙周疾病患者OMT检测均呈阴性。570例健康志愿者OMT检测均呈阴性。212已知HIV感染者血清检测结果 15例已知HIV感染者血清HIV21/2抗体检测均为阳性,因此OMT检测HIV 1/2抗体的灵敏度为100%(15/15)。213 其他血清标本检测结果 15例未感染者、30例牙周疾病患者血清HIV21/2抗体检测均为阴性;570例健康志愿者中有1例HIV21/2抗体呈阳性反应,其余均为阴性。该1例阳性血清经Western Blot确认试验为阴性。OMT检测HIV21/2抗体的特异性为100%(615/615)。214OMT与血清检测HIV 1/2抗体结果比较 OMT与血清检测HIV21/2抗体结果见表1。经统计分析,两种方法检测结果相关性具有统计学意义(Fisher确切概率法统计P=01000,01001)。OMT与血清检测HIV21/2抗体检测的一致性为99185%(629/630)。表1OMT与血清检测HIV21/2抗体结果比较检测标本检测例数阳性例数(%)阴性例数OMT63015(2138)615血清63016(2153)614215OMT与血清转换盘检测结果 BBI血清及OMT转换盘检测显示,自有明确的暴露史后到第28天,OMT中可检出HIV21/2抗体,而在第33天血清中才有HIV21/2抗体的检出。3 讨论HIV抗体检测的方法已有多种,目前国内最常用的检测方法是采用敏感性和特异性均较高的第三代双抗原夹心试剂,应用ELISA法检测血液中的HIV抗体,并以蛋白印迹法(WB)加以确认。但由于血液采集须用损伤性标本采集法,检测对象的依从性差,还易使工作人员暴露于HIV感染的危险之中;同时ELISA检测对实验室条件有一定的要求,这些因素都制约了HIV抗体初步筛查的进一步推广。HIV感染者的多种体液中(如尿液、唾液、精液、泪液)均含有HIV抗体3,因此针对较易获得的体液标本,研发可应用于基层及现场开展快速检测的方法,对推动艾滋病防治具有重要的现实意义。口腔黏膜渗出液中IgG抗体的浓度约相当于血清中的1/204,由于OMT较易获得并且标本采集是无创的,因此根据此浓度范围研发具有相应灵敏度的检测试剂是个较好的选择。本研究所采用的检测试剂是由北京马诺公司基于免疫层析法,应用胶体金标记技术研发快速诊断试纸。实验证明该检测系统具有较高的灵敏度和特异性,在检测BBI血清转化Panels时,OMT标本几乎可与血清同步甚至早于血清出现HIV抗体的阳转;实验发现OMT检测HIV21/2抗体的灵敏度与特异性均为100%。同时通过对已知HIV感染者及未感染者不同状况下(餐前、餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后)采样的重复实验表明,该方法的抗干扰能力较强,具有良好的精密度。同时30例牙周患者未出现假阳性结果,进一步证明了该方法的可靠性。通过OMT与血清的平行检测发现,OMT胶体金检测方法与血清ELISA检测方法的相关性具有统计学意义,但ELISA实验出现了1例假阳性(经Western Blot确认试验为阴性)结果,其原因有待进一步探讨。从本研究的OMT检测的操作过程来看,经过一91中国艾滋病性病 2008年2月第14卷第1期 Chin J AIDS STDVol114 No11 Feb.2008般性培训后,操作技术容易掌握,并且30分钟可判读结果,符合快速试剂的要求;且该OMT HIV21/2抗体快速检测试剂操作方法比较简便,易学易用,适合需要快速获得初筛结果的医院门、急诊,或HIV实验室检测条件尚不十分成熟的基层单位使用。同时发现在利用不同标本(包括唾液、尿、血液)检测HIV抗体方法中,唾液(包括OMT)采集方法是最易被受试者接受的一种检测方法5。如果能够将其纳入国家检测技术规范中,进行严格管理和质量控制,必将提高HIV检测率。参考文献:1卫生部疾病预防控制局.2006年我国艾滋病防治工作稳步推进J 1 中国艾滋病性病,2007,13(2):99-10012 Gottfried,TD,Mink RW,Phanuphak P1Calypte Aware HIV21/2OMT antibody test using oral fluid:special challenges of rapid HIVtesting in the developing worldJ 1Expert Rev Mol Diagn,2006,6(2):139-14413Holm-Hansen C,Constantine NT,Haukenes G1Detection of antibod2ies to HIV in homologous sets of plasma,urine and oral mucosal tran2sudate samples using rapid assays in TanzaniaJ 1Clin Diagn Virol,1993,1(4):207-21414Reynolds SJ,Muwonga J1OraQuick ADVANCE Rapid HIV21/2 anti2body testJ 1Expert Rev Mol Diagn,2004,4(5):587-59115 Peralta L,Constantine N,Griffin Deeds B,et al1Evaluation of youthpreferences foxrapid and innovative human immunodeficiency virus an2tibody testsJ 1Arch Pediatr Adolesc Med,2001,155(7):838-8431(上接第14页)参考文献:1Ranjana KH1Priyokumar K,Singh TJ,et al1Disseminated Penicilliummarneffei infection among HIV2infected patients in Manipur stateJ.India J Infect,2002,45(4):268-27112中华医学会感染病学分会艾滋病学组.艾滋病诊疗指南J 1 中华传染病杂志,2006,24(2):133-14413邓卓霖,李菊裳.马尔尼菲青霉病A1 上海:上海复旦大学出版社,2001:287-29414石晓虹,郎振为,沈冰,等 1 北京地区艾滋病合并播散型马尔尼菲青霉菌病一例J 1 中华内科杂志,2005,44(10):785-78615Vanittanakom N,Cooper CR Jr,Fisher MC,et al1Penicillium marnef2fei infection and recent advances in the epidemiology and molecular bi2ology aspectsJ 1Clin Microbiol Rev,2006,19(1):95-11016Sisto F,Miluzio A,Leopardi O,et al1Differential cytokine pattern inthe spleens and livers of BALB/c mice infected with Penicillium marn2effei:protective role of gamma interferonJ 1Infect Immun,2003,71(1):465-47317陈劲峰,唐小平,蔡卫平,等.艾滋病合并马尔尼菲青霉病12例J.中华传染病杂志,2005,23(3):195-19818 Taramelli D,Tognazioli C,Ravagnani F,et al1Inhibition of intra2macrophage growth of Penicillium marneffei by 42aminoquinolinesJ.Antimicrob Agents Chemother,2001,45(5):1450-145519 Ungpakorn R1Mycoses in Thailand:current concerns J 1NipponIshinkin Gakkai Zasshi,2005,46(2):81-861(上接第17页)参考文献:1 Beral V1Epidemiology of Kaposis sarcoma J 1Cancer Surveys,1991,10:5-2212Chang Y,Cesarman E,Pessin MS,et al1Identification of herpesvirus2like DNA sequences in AIDS2associated Kaposis sarcomaJ.Sci2ence,1994,266(5192):1865-186913Guttman2Yassky E,Abada R,et al1Relationship between human her2pesvirus 8 loads and disease stage in elassic Kaposi sarcoma patientsJ 1Diagn Microbiol Infect Dis,2007,57(4):387-39214Dedicoat M1,Newton R1Review of the distribution of Kaposis sarco2ma2associated herpesvirus(KSHV)in Africa in relation to the inci2dence of Kaposis sarcomaJ 1Br J Cancer,2003,88:1-315He F,Wang X,He B,et al1Human herpesvirus 8:serovprevalence andcorrelates in tumor patients from Xinjiang,China J 1J Med Viro,2007,79(2):161-16616杜文慧,陈国敏,孙荷,等.新疆地区普通人群中人疱疹病毒8型IgG抗体的调查报告J 1 中华实验和临床病毒学杂志,2000,14(1):44-4617Speciale L,Biffi R,Mancuso R,et al1Big endothelin21 and interleukin26 modulation in human microvascular endothelial cells after humanherpesvirus 8 infectionJ 1Exp Biol Med(Maywood),2006,231(6):1171-117518Xie J,Pan H,Yoo S,Gao SJ1Kaposis sarcoma2associated herpesvirusinduction of AP21 and interleukin 6 during primary infection mediatedby multiple mitogen2activated protein kinase pathwaysJ 1J Virol,2005,79(24):15027-1503719Chaoqiliu,Okruzhnow Y,Hong Li,Human herpevirus 8(HHV28)2en2coded cytokines induce expression of and autocrine signal by vascularendothelial growth factor(VEGF)in primary2effusion lymphoma celllines and mediated VEGF2independent anti apoptotic effectsJ 1J Vi2rol,2001,(11):10933-10940110Miligan S,Robinson M,ODonnnell E,et al1Inflammatory cytokinesinhibit Kaposis sarcoma2associated herpescirus lytic gene transcrip2tion in in vitro2infected endothelial cellsJ 1J Virol,2004,78(5):2591-2596111 Friedman2Kine A1Salzman B1et al1kaposis sarcoma in HIV2nega2tive homosexual manJ 1Lancet,1990,(1):168-169112Iscovich J,Boffetta P,Franceshi S,et al1Classic Kaposi Sarcoma2Epi2demiology and Risk FactorsJ 1Cancer,2002,88(3):500-517102中国艾滋病性病 2008年2月第14卷第1期 Chin J AIDS STDVol114 No11 Feb.2008