骨髓间充质干细胞来源外泌体通过TGF-β1_smad2_3信号通路抑制增生性瘢痕的机制研究.pdf

论 著 收稿日期2 0 2 2-0 8-3 0 基金项目 河北省医学科学研究课题计划(2 0 2 2 0 3 5 6)作者简介 范龙坤(1 9 8 5-),男,河北正定人,河北省沧州市中心医院主治医师,医学硕士,从事先天及后天性颌面部畸形的整复修复研究。*通信作者。E-m a i l:9 9 4 0 1 5 7 8 1q q.c o m骨髓间充质干细胞来源外泌体通过T G F-1/s m a d 2/3信号通路抑制增生性瘢痕的机制研究范龙坤,刘春晖,赵钰佳,马 超*(河北省沧州市中心医院医学整形美容科,河北 沧州0 6 1 0 0 1)摘要 目的 探讨骨髓间充质干细胞(b o n em a r r o w m e s e n c h y m a l s t e mc e l l s,BM S C s)来源外泌体对增生性瘢痕成纤维细胞(h y p e r t r o p h i cs c a r-d e r i v e df i b r o b l a s t s,H S F s)增殖和迁移能力的影响,并验证BM S C s来源外泌体抑制H S F s合成胶原的信号通路。方法 分离并培养S D大鼠BM S C s、BM S C来源外泌体及S D大鼠H S F s,设置空白对照组(P B S组),实验组(BM S C s来源外泌体组),阴性对照组(去外泌体间充质干细胞浓缩上清液组)。流式细胞周期实验及细胞划痕实验检测外泌体对H S F s增殖及迁移的影响。荧光定量聚合酶链反应(p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n,P C R)检测3组细胞中T I MP-1、基质金属蛋白酶1、型胶原、型胶原的mR NA表达。W e s t e r nb l o t检测3组细胞中转化生长因子1、-平滑肌肌动蛋白、型胶原的蛋白水平及s m a d 2/3的磷酸化水平。结果BM S C s来源外泌体抑制了H S F s的增殖和迁移能力。与P B S组比较,BM S C s来源外泌体组T I MP-1、型胶原、型胶原mR NA表达显著降低,而基质金属蛋白酶1mR NA表达显著升高,差异有统计学意义(P0.0 5)。与P B S组比较,BM S C s来源外泌体组转化生长因子1、-平滑肌肌动蛋白、型胶原的蛋白水平及s m a d 2/3的磷酸化水平显著降低,差异有统计学意义(P0.0 5)。结论BM S C s来源外泌体抑制了H S F s的增殖及迁移,通过T G F-1/s m a d 2/3信号通路抑制胶原合成,从而有利于抑制瘢痕增生。关键词 间质干细胞;外泌体;瘢痕;成纤维细胞 d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 7-3 2 0 5.2 0 2 3.0 8.0 0 2 中图分类号 R 3 2 9.2 4 文献标志码 A 文章编号 1 0 0 7-3 2 0 5(2 0 2 3)0 8-0 8 7 6-0 8S t u d yo nt h em e c h a n i s mo fBM S C-e x o s i n h i b i t i n gh y p e r t r o p h i cs c a r t h r o u g hT G F-1/s m a d 2/3s i g n a l p a t h w a yF ANL o n g-k u n,L I UC h u n-h u i,Z HAOY u-j i a,MAC h a o*(D e p a r t m e n t o fM e d i c a lP l a s t i cS u r g e r y,C a n g z h o uC e n t e rH o s p i t a l,H e b e iP r o v i n c e,C a n g z h o u0 6 1 0 0 1,C h i n a)A b s t r a c t O b j e c t i v e T os t u d yt h ee f f e c to fb o n em a r r o w m e s e n c h y m a l s t e mc e l l-d e r i v e de x o s o m e s(BM S C-e x o s)o nt h ep r o l i f e r a t i o na n d m i g r a t i o na b i l i t yo fh y p e r t r o p h i cs c a r-d e r i v e df i b r o b l a s t s(H S F s),a n dt ov e r i f yt h es i g n a l i n gp a t h w a yo fBM S C-e x o si n h i b i t i n gc o l l a g e ns y n t h e s i sb yH S F s.M e t h o d s B o n em a r r o w m e s e n c h y m a l s t e mc e l l s(BM S C s),BM S C-e x o sa n dH S F s i nS Dr a t sw e r ei s o l a t e da n dc u l t u r e d.T h e yw e r ed i v i d e di n t ob l a n kc o n t r o lg r o u p(P B Sg r o u p),e x p e r i m e n t a lg r o u p(BM S C-e x o s g r o u p),a n d n e g a t i v e c o n t r o l g r o u p(e x o c r i n em e s e n c h y m a l s t e mc e l l c o n c e n t r a t e ds u p e r n a t a n tg r o u p).T h ee f f e c to f e x o s o m e so np r o l i f e r a t i o na n d m i g r a t i o no f H S F s w a sd e t e c t e db yf l o w c y t o m e t r ya n dc e l ls c r a t c ht e s t.T h e mR NAe x p r e s s i o n so fT I MP-1,m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e1(MMP-1),t y p e c o l l a g e n(C o l-)a n dt y p ec o l l a g e n(C o l-)i nc e l l so f t h et h r e eg r o u p sw e r ed e t e c t e db yf l u o r e s c e n c eq u a n t i t a t i v e678第4 4卷第8期2 0 2 3年8月 河北医科大学学报J OUR NA L O F HE B E I ME D I C A L UN I V E R S I T Y V o l.4 4 N o.8 A u g.2 0 2 3 p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n(F Q-P C R)m e t h o d.T h ep r o t e i nl e v e l so f t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r-1(T G F-1),-s m o o t h m u s c l ea c t i n(-S MA)a n dC o l-,a n dt h ep h o s p h o r y l a t i o nl e v e lo fs m a d 2/3 i nt h et h r e eg r o u p sw e r ed e t e c t e db y W e s t e r nb l o t.R e s u l t s BM S C-e x o s i n h i b i t e dt h ep r o l i f e r a t i o na n dm i g r a t i o na b i l i t yo fH S F s.T h emR NAe x p r e s s i o no fT I MP-1,C o l-,a n dC o l-i nBM S C-e x o sg r o u pw e r e s i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e d,w h i l e t h emR NAe x p r e s s i o no fMMP-1w a ss i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d,s h o w i n gs i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P0.0 5).T h ep r o t e i n l e v e l so fT G F-1,-S MAa n dC o l-a n dt h ep h o s p h o r y l a t i o nl e v e l o f s m a d 2/3 i nBM S C-e x o sg r o u pw e r ed e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y,s u g g e s t i n gs i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P1.8O D2 6 0/2 3 01.5。(4)样品c D NA合成:根据T a k a r a公司的P r i m e S c r i p tR Tr e a g e n tK i t反转录试剂盒,参照说明书反转录条件合成每个样本2 0L的c D NA。R T反应:将制备好反应液置P C R扩增仪进行R T反应(3 73 0m i n;8 51 5s),反应完毕后,将其放-2 0备用。(5)基因引物合成:参照G e n B a n k数 据 库,GA P DH为 内 参 照,采 用P r i m e rp r i m e r 5.0计算机软件设计引物,基因序列见表1,引物由T a k a r a公司合成。(6)R T-P C R检测利用T a k a r a公司的R T-P C R试剂盒S Y B RP r e m i xE xT a q TM,严格参照试剂盒说明书,设置每个样本每个基因为三个副孔,在试剂盒要求的反应条件下在A p p l i e d B i o s y s t e m s 7 5 0 0 R e a l-T i m e P C RS y s t e m进P C R反应。本实验重复3遍,每组样本量为6个。表1 基因序列表T a b l e1 G e n e s e q u e n c e t a b l e引物名称序列号(5 -3)GA P DH上游A C C A C A G T C C A T G C C A T C A C下游T C C A C C A C C C T G T T G C T G T AT I MP-1上游GA C C T G G T C A TAA G G G C T AAA下游G C C C G T GA T GAGAAA C T C T T C A C TMMP-1上游G C C A C AAAG T T GA T G C A G T T下游G C A G T T GAA C C A G C T A T T A GC o l 1上游GAA G T C A G C T G C A T A C A C下游AG GAA G T C C A G G C T G T C CC o l 3上游C A GA G G C T T T GA T G GA C G C A下游T C T C C C T T C G C A C C G T T C T T1.3.6.2 W e s t e r nb l o t检测3组细胞中转化生长因子1、-平滑肌肌动蛋白、型胶原的蛋白水平、s m a d 2/3的磷酸化水平 将生长状态良好的第2代H S F s接种于6孔板中,每孔细胞数为(1.01.2)1 05,待细胞贴壁后按实验分组进行干预,A组每孔加入1 0 0LP B S,B组每孔加入含有1 0 0L外泌体悬液(4 0 0 m g/L)无血清培养基,C组每孔加入1 0 0L去外泌体间充质干细胞浓缩上清液,常规换液培养1 4d,待细胞增殖至瓶底的8 0%,用P B S小心将第3代细胞生长面覆盖,小心抽去P B S。使用B C A试剂盒对各组蛋白浓度进行定量,加5的L o a d i n gb u f f e r于金属浴1 0 0 变性1 0m i n,以每孔2 0g的总蛋白量上样进行S D S-P AG E电泳,凝胶上分离的蛋白通过湿转法2 0 0 mA2h印迹到P V D F膜上,5%脱脂牛奶室温封闭2h,T B S T洗涤3遍,加入待检基因的大鼠单克隆抗体(分别为转化生长因子1、-平滑肌肌动蛋白、型胶原的蛋白水平、P-s m a d 2/3蛋白一抗),4 孵育过夜,T B S T洗涤3遍,使用羊抗兔二抗室温孵育2h,T B S T洗膜后将膜放置于全自动凝胶成像分析仪的载样抽屉里,然后把配制好的E C L发光工作液取适量均匀滴在膜上,孵育5m i n后,再滴适量的E C L发光工作液;打开电脑的凝胶成像分析软件进行拍照或者直接观察和分析实验结果。结果分析。每组实验均做3次重复,每组样本量为6个。1.4 观察指标 电子显微镜观察S D大鼠H S F s及BM S C s的 细 胞 形 态,流 式 细 胞 仪 分 析S D大 鼠H S F s中C D 7 3、C D 9 0、C D 3 4的 表 达、BM S C s中C D 2 9、C D 4 4、C D 4 5的表达及BM S C s来源外泌体表面标志物C D 6 3的表达情况;W e s t e r nB l o t检测显示BM S C s来源外泌体表达的C D 6 3、C D 8 1蛋白;流式细胞周期实验检测3组H S F s的G 1、G 2/S期细胞占比,分析其各组的增殖能力;细胞划痕实验检测划痕间的距离表达各组H S F s的迁移能力;荧光定量P C R检测三组H S F s中基质金属蛋白酶抑制剂1、基质金属蛋白酶1、型胶原、型胶原表达量;W e s t e r nb l o t检测各组H S F s中转化生长因子1、-平滑肌肌动蛋白、型胶原、p-S m a d 2/3蛋白水平。1.5 统计学方法 应用S P S S1 9.0统计软件分析数据。计量资料采用单因素方差分析,两组间比较采用S NK-q检验,多组间计量资料不同时点同一指标比较采用重复测量的方差分析。P0.0 5);在G 2、M上的细胞百分比差异有统计学意义(P0.0 5),空白对照组细胞百分比明显高于实验组、阴性对照组(P0.0 5),实验组细胞百分比明显低于阴性对照组(P0.0 5),见表2。表2 流式细胞周期实验检测3组H S F s增殖能力T a b l e2 T h ep r o l i f e r a t i v ea b i l i t yo fH S F sd e t e c t e db y f l o wc y t o m e t r y(n=6,x-s)组别G 0、G 1期G 2、M期S期空白对照组6 8.2 32.4 71 9.5 40.6 81 0.5 41.0 6实验组6 7.7 21.8 09.6 90.3 9*1 1.8 62.0 8阴性对照组6 8.0 21.1 11 7.7 80.6 2#1 2.4 70.8 9F值0.1 1 24 9 9.3 0 32.7 9 1P值0.8 9 40.0 0 10.0 9 3*P值0.0 5与空白对照组比较#P值0.0 5与实验组比较(S NK-q检验)2.5 细 胞 划 痕 实 验 检 测BM S C s来 源 外 泌 体 对H S F s迁移能力的影响 BM S C s来源外泌体组2 4h细胞划痕之间的距离相比较P B S组增加了1.6倍左右,差异有统计学意义(P0.0 5),P B S组在4 8h划痕基本愈合,BM S C s来源外泌体组愈合速度明显减慢,差异有统计学意义(P0.0 5),P B S组与去外泌体间充质干细胞浓缩上清液组仍有裂隙,说明BM S C s来源外泌体可以显著抑制H S F s的迁移,见表3。表3 细胞划痕实验检测各组H S F s的迁移能力T a b l e3 T h em i g r a t i o na b i l i t yo fH S F sd e t e c t e db yc e l l s c r a t c ht e s t(n=1 2,x-s)组别0h2 4h4 8h空白对照组0.0 00.0 06 2.5 16.6 69 0.0 47.1 7实验组0.0 00.0 05 5.5 34.3 88 4.8 11.9 5阴性对照组0.0 00.0 06 6.0 85.0 78 9.4 74.7 9组间F值=1 1.5 2 8 P值0.0 0 1时点间F值=44 1 3.5 3 4 P值0.0 0 1组间时点间F值=5.5 5 0 P值=0.0 0 12.6 荧光定量P C R检测BM S C s来源外泌体对H S F s胶 原 合 成 的 影 响 3组T I MP-1、MMP-1、C O L-、C O L-上差异有统计学意义(P0.0 5),实验组中T I MP-1、MMP-1、C O L-、C O L-各均值明显低于空白对照组、阴性对照组中各T I MP-1、MMP-1、C O L-、C O L-均值(P0.0 5),见表4。表4 荧光定量P C R检测各组H S F s中T I M P-1、MM P-1、C O L-、C O L-型胶原表达量T a b l e4 T h e e x p r e s s i o no fT I M P-1,MM P-1,C O L-a n dC O L-i nH S F sd e t e c t e db yf l u o r e s c e n c eq u a n t i t a t i v eP C R(n=6,x-s)组别T I MP-1(相对灰度值)MMP-1(相对灰度值)C O L-(相对灰度值)C O L-(相对灰度值)空白对照组1.0 00.0 11.0 00.0 21.0 00.0 21.0 00.0 1实验组0.9 40.0 2*2.1 20.0 4*0.9 40.0 3*0.6 90.0 4*阴性对照组0.9 90.0 3#1.0 10.1 1#1.0 00.0 2#1.0 00.0 4#F值1 5.3 7 95 5 4.5 9 71 1.8 3 41 8 9.5 3 8 P值0.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 1*P值0.0 5与空白对照组比较#P值0.0 5与实验组比较(S NK-q检验)2.7 BM S C s来源外泌体通过T G F-1/s m a d 2/3信号通路对H S F s胶原合成的作用 3组在T G F-1/GA P DH、-S MA/GA P DH、C O L-/GA P DH、p-s m a d 2/3/GA P DH上 差 异 有 统 计 学 意 义(P0.0 5),实 验 组 中T G F-1/GA P DH、-S MA/GA P DH、C O L-/GA P DH、p-s m a d 2/3/GA P DH各均 值 明 显 低 于 空 白 对 照 组、阴 性 对 照 组 中 各T G F-1/GA P DH、-S MA/GA P DH、C O L-/GA P DH、p-s m a d 2/3/GA P DH(P0.0 5),见图6,表5。图6 W e s t e r nb l o t检测各组H S F s中-S M A、转化生长因子1、C O L-、p-S m a d 2/3蛋白电泳图A.3组-S MA电泳对比图;B.3组T G F-1电泳对比图;C.3组C O L-电泳对比图;D.3组p-s m a d 2 d电泳对比图;电泳图谱中颜色越深代表所检测蛋白含量越高,反之越低F i g u r e6 E l e c t r o p h o r e t i cp a t t e r n so f-S MA,T G F 1,C O L-1a n dp-S m a d 2/3p r o t e i n s i ne a c hg r o u po fH S F s188河 北 医 科 大 学 学 报 第4 4卷 第8期表5 各组H S F s中T G F-1、-S M A、C O L-、p-S m a d 2/3蛋白水平比较T a b l e5 C o m p a r i s o no f t h ep r o t e i n l e v e l so fT G F-1,-S MA,C O L-a n dp-s m a d 2/3/G A P D Hi nH S F s(n=6,x-s)组别T G F-1/GA P DH-S MA/GA P DHC O L-/GA P DHp-s m a d 2/3/GA P DH空白对照组1.0 00.0 21.0 00.0 31.0 00.0 21.0 00.0 3实验组0.4 80.0 3*0.5 60.0 2*0.4 20.0 2*0.9 60.0 2*阴性对照组0.9 90.0 3#0.9 90.0 2#1.0 00.0 2#1.0 00.0 3#F值8 0 4.4 2 96 7 7.0 6 511 8 4.4 4 14.3 1 1 P值0.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 1 1*P值0.0 5与空白对照组比较#P值0.0 5与实验组比较(S NK-q检验)3 讨 论当前的研究表明,间充质干细胞可以促进皮肤创面愈合,减少瘢痕形成。BM S C s可能通过旁分泌的方式发挥抗瘢痕的作用,提示以BM S C s作为干细胞治疗工具可能成为瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的预防和治疗新方法1 9-2 0。外泌体中包含有功能性的蛋白质、mR NA、m i c r o R NA s以及t R NA等2 1,在介导细胞间的通讯方面起着重要的作用2 2-2 3。文献报道大鼠BM S C s来源外泌体可以抑制T G F-1诱导的成纤维细胞转分化2 4。该实验通过流式细胞周期实验表明BM S C s来源外泌体抑制了H S F s的增殖。通过细胞划痕实验表明BM S C s来源外泌体可以显著抑制H S F s的迁移。H S F s增殖和迁移能力下降,从而抑制了胶原的合成,有利于抑制瘢痕的增生。基质金属蛋白酶1在胶原更新过程中扮演着重要的角色,基质金属蛋白酶抑制剂1是一种内源性基质金属蛋白酶1抑制剂,上调基质金属蛋白酶抑制剂1的表达能够直接抑制细胞外基质的降解,促进细胞外基质聚集,促进瘢痕的增生2 5。荧光定量P C R检测结果显示BM S C s来源外泌体组基质金属蛋白酶抑制剂1基因表达显著降低、而基质金属蛋白酶1基因表达则相反,并且与增生性瘢痕形成相关的靶基因型胶原、型胶原的表达明显降低,显示出BM S C s来源外泌体对胶原代谢的促进作用,进而可以促进细胞外基质的降解,减少细胞外基质的聚集,从而抑制瘢痕的增殖。T G F-1/S m a d 2/3信号通路在成纤维细胞胶原合成过程中起着至关重要的作用。瘢痕的形成最主要是胶原的过度增殖,而胶原的增殖过程是依靠T G F-信 号 通 路 的 自 我 调 控。因 此 作 者 推 测,BM S C s来源外泌体通过该信号通路调控了H S F s转分化。W e s t e r nb l o t检测结果显示BM S C s来源外泌体组转化生长因子1、-平滑肌肌动蛋白和型胶原的蛋白水平及s m a d 2/3的磷酸化水平显著降低。该实验说明BM S C s来源外泌体可以通过抑制T G F-1的活化,进而抑制S m a d 2/3的活化,从而阻碍了成纤维细胞的胶原合成。通过T G F-1/S m a d 2/3途径抑制胶原的合成,进而抑制瘢痕的增生。外泌体被公认为提示健康或疾病的重要介质,而且可能是特定条件下的重要生物标志物。由于间充质干细胞是外泌体高效的生产者,将来可以被设计为过度表达,从而设计、开发外泌体药品,可作为增生性瘢痕在体内体的药物传递系统。到目前为止,虽然病理性瘢痕的研究己达到分子水平,但增生性瘢痕的发病机制仍不明确,近年来随着激光、肉毒素、脂肪移植等在临床上的应用,综合治疗瘢痕的总体成功率和患者满意度正在缓慢上升,但在分子水平上还需要继续进行深入研究,从而为临床工作提供更好的理论指导。参考文献1 马倩玉,武晓莉.增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的最新治疗进展J.组织工程与重建外科杂志,2 0 2 0,1 6(1):1-5.2 徐晨,郭芳芳.增生性瘢痕治疗的研究进展J.东南大学学报(医学版),2 0 1 9,3 8(1):1 9 5-1 9 8.3 S i d g w i c k G P,B a y a t A.E x t r a c e l l u l a r m a t r i x m o l e c u l e si m p l i c a t e d i nh y p e r t r o p h i c a n dk e l o i ds c a r r i n gJ.JE u rA c a dD e r m a t o l,2 0 1 2,2 6(2):1 4 1-1 5 2.4 C h e nZ Y,Z h o uY,Q i a nY,e ta l.M a n a g e m e n to fh e t e r o t o p i cc e s a r e a ns c a rp r e g n a n c y w i t h p r e s e r v a t i o n o fi n t r a u t e r i n ep r e g n a n c y:Ac a s er e p o r tJ.W o r l dJC l i nC a s e s,2 0 2 1,9(2 2):6 4 2 8-6 4 3 4.5 L vWC,W uM,R e nY P,e ta l.T r e a t m e n to fk e l o i d st h r o u g hR u n x 2s i R NAi n d u c e d i n h i b i t i o no f t h eP I 3 K/AK Ts i g n a l i n gp a t h w a yJ.JM o lM e dR e p,2 0 2 1,2 3(1):5 5-6 3.6 G l a v cD,R a v n i k-G l a v c M.E s s e n t i a lr o l eo fm i c r o-R NAi ns k i np h y s i o l o g ya n dd i s e a s eJ.A d vE x pM e dB i o l,2 0 1 5,8 8 8(1 6):3 0 7-3 3 0.7 H e a t h e rJ P,D e s h k aS F,M i c h a e lT L,e ta l.F i b r o b l a s t sa n dw o u n dh e a l i n g:a nu p d a t eJ.R e g e n M e d,2 0 1 8,1 3(5):4 9 1-4 9 5.(下转第8 9 9页)288范龙坤等 骨髓间充质干细胞来源外泌体通过T G F-1/s m a d 2/3信号通路抑制增生性瘢痕的机制研究用r e v e r s i b l es u c c i n y l a t i o nJ.M o lC e l l,2 0 1 9,7 4(4):8 4 4-8 5 7.1 1 Z h a n g X X,K o n g J,Y u n K.P r e v a l e n c e o f d i a b e t i cn e p h r o p a t h ya m o n gp a t i e n t sw i t ht y p e2d i a b e t e sm e l l i t u s i nC h i n a:am e t a-a n a l y s i so fo b s e r v a t i o n a l s t u d i e sJ.JD i a b e t e sR e s,2 0 2 0,2 0 2 0:2 3 1 5 6 0 7.1 2 L iZ,C h e nQQ,Y a nJ Y,e ta l.E f f e c t i v e n e s so fm o t i v a t i o n a li n t e r v i e w i n go ni m p r o v i n g C a r ef o rp a t i e n t s w i t ht y p e2d i a b e t e si n C h i n a:ar a n d o m i z e dc o n t r o l l e dt r i a lJ.BMCH e a l t hS e r vR e s,2 0 2 0,2 0(1):5 7.1 3 Y eQ,F uJ F.P a e d i a t r i ct y p e2d i a b e t e si nC h i n a-P a n d e m i c,p r o g r e s s i o n,a n dp o t e n t i a ls o l u t i o n sJ.P e d i a t r D i a b e t e s,2 0 1 8,1 9(1):2 7-3 5.1 4 Z h e n gR,X u Y,N i uJ Y,e ta l.T y p e2d i a b e t e s R C T si nm a i n l a n dC h i n a:i n s i g h t s f r o mas y s t e m a t i c r e v i e wJ.L a n c e tD i a b e t e sE n d o c r i n o l,2 0 2 1,9(2):6 4-6 6.1 5 H uC,J i a WP.D i a b e t e si nC h i n a:e p i d e m i o l o g ya n dg e n e t i cr i s kf a c t o r s a n d t h e i r c l i n i c a l u t i l i t y i np e r s o n a l i z e dm e d i c a t i o nJ.D i a b e t e s,2 0 1 8,6 7(1):3-1 1.1 6 S u n ML,T a n g WC,L iS,e ta l.M o l e c u l a rd o p i n go fb l u ep h o s p h o r e n e:a f i r s t-p r i n c i p l e si n v e s t i g a t i o nJ.J P h y sC o n d e n sM a t t e r,2 0 2 0,3 2(5):0 5 5 5 0 1.1 7 B r i o l a y A,B e s s u e i l l e L,M a g n e D,e ta l.T NA P:a n e wm u l t i t a s ke n z y m ei ne n e r g ym e t a b o l i s mJ.I n tJM o lS c i,2 0 2 1,2 2(1 9):1 0 4 7 0.1 8 S u nY Z,R a h b a n iJ F,J e d r y c h o w s k iMP,e ta l.M i t o c h o n d r i a lT NA Pc o n t r o l st h e r m o g e n e s i sb yh y d r o l y s i so fp h o s p h o c r e a t i n eJ.NN a t u r e,2 0 2 1,5 9 3(7 8 6 0):5 8 0-5 8 5.1 9 M i l l sE L,H a r m o nC,J e d r y c h o w s k iMP,e t.a l.C y s t e i n e2 5 3o f U C P 1r e g u l a t e se n e r g y e x p e n d i t u r ea n ds e x-d e p e n d e n ta d i p o s et i s s u ei n f l a mm a t i o nJ.C e l lM e t a b,2 0 2 2,3 4(1):1 4 0-1 5 7.2 0 C h o u c h a n iE T,K a z a kL,S p i e g e l m a nBM,e t a l.N e wa d v a n c e si na d a p t i v e t h e r m o g e n e s i s:U C P 1a n db e y o n dJ.C e l lM e t a b,2 0 1 9,2 9(1):2 7-3 7.(本文编辑:刘斯静)(上接第8 8 2页)8 Z h uZ Y,H o u Q,L i MR,e ta l.M o l e c u l a r m e c h a n i s m o fm y o f i b r o b l a s tf o r m a t i o n a n d s t r a t e g i e sf o r c l i n i c a ld r u g st r e a t m e n t s i nh y p e r t r o p h i c s c a r sJ.JC e l lP h y s i o l,2 0 2 0,2 3 5(5):4 1 0 9-4 1 1 9.9 W a n gX,G a oZ,W u X,e ta l.I n h i b i t o r ye f f e c to fT G F-p e p t i d e a n t a g o n i s t o n t h e f i b r o t i c p h e n o t y p e o f h u m a nh y p e r t r o p h i cs c a rf i b r o b l a s t sJ.P h a r m B i o l,2 0 1 6,5 4(7):1 1 8 9-1 1 9 7.1 0 C u iYQ,D i n gX F,L i a n gHY,e t a l.E f f i c a c ya n ds a f e t yo f l o w-d o s ec o r t i c o s t e r o i d sf o ra c u t er e s p i r a t o r yd i s t r e s ss y n d r o m e:As y s t e m a t i cr e v i e wa n d