河北省衡水生物一轮复习细胞肌细胞工程-实验一生物组织中还原糖脂肪蛋白质的鉴定.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,【,实验原理,】,化合物,还原糖,脂肪,蛋白质,鉴定试剂,斐林试剂,苏丹,染液,苏丹,染液,双缩脲试剂,颜色反应,砖红色沉淀,橘黄色,红色,紫色,【,用品分析,】,1,实验材料的选择,项目,鉴定还原糖,鉴定脂肪,鉴定蛋白质,依据,含糖量高，且颜色为白色或近于白色的材料,选择含脂肪丰富的种子,含蛋白质丰富的材料,材料处理,研磨制备样液,干种子需浸泡,1 d,2 d,若用蛋清则需要稀释,常用材料,苹果、梨等,花生种子,豆浆、稀释的蛋清,特别提醒,鉴定还原糖时，选择白色材料能排除实验材料自身颜色对颜色反应的影响。,鉴定脂肪时一般不选择蓖麻，因为其虽含脂肪较多，但有坚硬的外壳，不易除去，很难制作切片。,使用蛋清时若不稀释，则实验后会粘在试管壁上，使反应不彻底，试管不易洗刷。,2.,试剂使用的注意事项,(1),斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液,(0.1 g/mL,的,NaOH,溶液,),和乙液,(0.05 g/mL,的,CuSO,4,溶液,),分别配制、储存，使用时再临时配制。,(2),苏丹,染液的染色时间为,2 min,3 min,，苏丹,染液的染色时间为,1 min,，时间不能太长。,(3),双缩脲试剂的使用，应先加试剂,A(0.1 g/mL,的,NaOH,溶液,),，造成碱性环境，再加试剂,B(0.01 g/mL,的,CuSO,4,溶液,),。,【,实验步骤,】,1,还原糖的鉴定,选材：含糖,(,还原糖,),量较高，白色或近于白色的植物组织,结论：生物组织中含有还原糖,2,脂肪的鉴定,3,蛋白质的鉴定,选材与制备组织样液：卵清稀释液或大豆研磨液,(,或豆浆,),【,思考乐园,】,1,在做可溶性还原糖与蛋白质鉴定的实验时，在鉴定前，为什么要留出一部分样液？,虽然本实验是验证性实验，但也要注意对照。在鉴定可溶性还原糖和蛋白质时留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色变化作对照，这样可以增强说服力。,2,为什么蛋白质要稀释？,制备蛋白质稀释液，主要防止蛋白质与双缩脲反应后粘固在试管壁上，使反应不彻底，也不易洗刷试管。,3,斐林试剂与双缩脲试剂都由,NaOH,和,CuSO,4,组成，两者有何不同？,有如下,3,点不同：,溶液浓度不同,斐林试剂由质量浓度为,0.1g/mL NaOH,溶液和质量浓度为,0.05g/mL CuSO,4,溶液配制而成，双缩脲试剂的成分是质量浓度为,0.1g/mL NaOH,溶液与质量浓度为,0.01g/mL CuSO,4,溶液。,使用原理不同,斐林试剂实质是新配制的一定浓度的,Cu(OH),2,溶液，在加热条件下，与加入的葡萄糖,(,可溶性还原糖，分子内部含有还原性半缩醛羟基，,),能够生成砖红色的,Cu,2,O,沉淀，而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。,双缩脲试剂实质是在碱性环境下的,Cu,2,与双缩脲,(H,2,NOC,NH,CONH,2,),作用，形成紫色或紫红色的络合物。,使用方法不同,斐林试剂使用时，先把,NaOH,溶液和,CuSO,4,溶液混合，而后立即使用。,双缩脲试剂使用时，先加,NaOH,溶液，然后加入,CuSO,4,溶液。,4,反应过程中，出现的颜色变化及原因分别是什么？,用斐林试剂鉴定还原糖的实验,因先加入刚配制的,Cu(OH),2,溶液，故溶液变成浅蓝色；加热后，部分,Cu(OH),2,被还原成砖红色的,Cu,2,O,沉淀，二者混合故呈现棕色；随着反应的继续进行，,Cu(OH),2,被全部还原成,Cu,2,O,，故而出现砖红色沉淀。颜色变化：,浅蓝色棕色砖红色,(,沉淀,),双缩脲试剂鉴定蛋白质实验,加入双缩脲试剂,A,，溶液为无色；加入双缩脲试剂,B,，因有,Cu(OH),2,生成，故呈现浅蓝色；振荡均匀后，由于反应的进行，出现紫色的络合物。颜色变化：无色浅蓝色紫色,5,斐林试剂为何要现配现用？用斐林试剂鉴定时，为何不能先加入,NaOH,，后加入,CuSO,4,，而必须混合后再加入？,因斐林试剂很不稳定，容易生成蓝色的,Cu(OH),2,沉淀，所以应将甲液与乙液分别配制储存，使用时再临时配制。,若先加入,NaOH,，还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入,CuSO,4,后不能产生砖红色的,Cu,2,O,沉淀，只有将其先配制成,Cu(OH),2,溶液，才能产生砖红色的沉淀。,6,为何在该实验中，一般不选用双子叶植物的叶片和单子叶植物的叶片？,在双子叶植物中，光合作用的主要产物葡萄糖形成后合成淀粉，暂时储存在叶片内，因此最好不选用双子叶植物的叶片作实验材料；在单子叶植物如韭菜、鸢尾，并不将光合作用的初始产物转变为淀粉，因此叶内含有大量的可溶性还原糖，但是，由于叶片中叶绿素的颜色较深，对于鉴定时的颜色反应起到掩盖作用，导致实验现象不明显，因此也不选用单子叶植物的叶片。,7,在使用双缩脲试剂时，为什么要先加入试剂,A,，后加入试剂,B,？加入试剂,A,后，为什么只能加入,3,滴,4,滴双缩脲试剂,B,，而不能加入过量？,先加入试剂,A,，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才容易与,Cu,2,发生颜色反应。,因为若加入过量的双缩脲试剂,B,，,CuSO,4,在碱性溶液中生成大量的蓝色,Cu(OH),2,沉淀，会遮蔽实验中所产生的紫色，影响观察的结果。,一、实验中的注意事项,1,对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向人，以免沸腾的溶液冲出试管，造成烫伤。,2,在提取液与斐林试剂混合后，为缩短时间，实验前将烧杯内的水煮沸备用。,3,鉴定还原糖和蛋白质时，在鉴定之前可以留出一部分样液，以便与鉴定后样液的颜色变化作对比，这样可以增强说服力。,二、斐林试剂与双缩脲试剂的比较,斐林试剂,双缩脲试剂,成分,甲液,0.1g/mL NaOH,乙液,0.05g/mL CuSO,4,A,液,0.1g/mL NaOH B,液,0.01 g/mL CuSO,4,使用方法,甲液和乙液混合均匀后方可使用，且现用现配,使用时先加,A,液，再加,B,液,反应原理,还原糖中的醛基被,Cu(OH),2,氧化，,Cu(OH),2,被还原为,Cu,2,O,具有两个肽键以上的化合物在碱性条件下与,Cu,2,反应生成紫色物质,颜色变化,砖红色,紫色,显色反应的条件,加热煮沸,不需加热,三、利用本实验原理和方法可以解决以下问题,1,鉴定生物组织或器官中的有关成分。,2,在医学上进行疾病的诊断。,3,鉴定某些消化液中酶的化学本质。,4,用于食品中相关成分的鉴定。,5,比较不同生物组织中相关成分含量的高低。,6,检测生物在不同的代谢条件下，尿液中某些成分的变化。,例,1,将小麦种子分别置于,20,和,30,培养箱中培养,4,天，依次取等量的萌发种子分别制成提取液,和提取液,。取,3,支试管甲、乙、丙，分别加入等量的淀粉液，然后按下图加入等量的提取液和蒸馏水，,45,水浴保温,5,分钟，立即在,3,支试管中加入等量斐林试剂并煮沸,2,分钟，摇匀观察试管中颜色。结果是,(,),A,甲呈蓝色，乙呈砖红色，丙呈无色,B,甲呈无色，乙呈砖红色，丙呈蓝色,C,甲、乙皆呈蓝色，丙呈砖红色,D,甲呈浅砖红色，乙呈砖红色，丙呈蓝色,解析,20,和,30,培养条件下相比较，,30,时淀粉酶的活性相对较高，淀粉酶催化淀粉水解成麦芽糖的速率更快，相同条件下产生的麦芽糖更多。麦芽糖属于还原性糖，与斐林试剂反应生成砖红色沉淀，麦芽糖越多显色越明显。斐林试剂本身为蓝色。,答案,D,例,2,据药理研究，一种茅草的根内含有降血糖的因子及多种有益健康的成分。某公司将它开发成一种保健饮料，而该产品是否适用于糖尿病患者，生物学兴趣小组的同学就以此作为研究课题。,请你完成下面的鉴定报告。,(1),实验目的：鉴定一种茅草的根是否具有还原糖和淀粉。,(2),实验原理：还原性糖可用,_,试剂。,淀粉可用,_,试剂来鉴定。,(3),实验器材：一种茅草的根、所需试剂、刀片、载玻片、酒精灯、试管夹、火柴、滴管。,(4),实验步骤：,鉴定还原糖：,_,。,鉴定淀粉：,_,。,(5),实验现象：,_,。,(6),结果分析：,_,。,(7),在鉴定还原糖的实验操作中应注意：,_,。,解析,为验证生物组织中含有某种成分，可用某些化学试剂与生物组织发生特定的颜色反应来进行鉴定。斐林试剂,(,或班氏试剂,),，与可溶性还原糖在加热条件下可产生砖红色,(,或红黄色,),沉淀；淀粉遇革兰氏碘液后会产生蓝色或蓝紫色。设计实验步骤，要借鉴自己曾经做过的相关实验或教材中的经典实验，还要结合题中给出的实验器材和条件。同时还要依据已经学过的相关知识对实验结果做出正确的预测和分析。,答案,(2),班氏试剂或斐林革兰氏碘液,(4),将一种茅草的根切成薄片,(,或压碎,),，放在载玻片上，滴加,1,2,滴班氏试剂。将载玻片放在酒精灯上加热，观察颜色变化。,将一种茅草的根切成薄片,(,或压碎,),，放在载玻片上，滴加,1,2,滴革兰氏碘液，观察颜色。,(5),、,(6),可以有几种不同的答法，但要求实验现象与结果一致。如观察到有红黄色，说明有还原糖存在；如没有红黄色，说明无还原糖存在。如有蓝色或蓝紫色出现，说明有淀粉存在；如无蓝色或蓝紫色出现，说明无淀粉存在。,(7),载玻片在火焰上加热时要来回移动，以免加热不均而爆裂。,总结点评,此题主要考查学生对还原糖和淀粉鉴定方法的掌握水平，以及独立进行实验设计、预测并分析实验结果的能力，属于高档题。,