安捷伦液相色谱柱选择指南_136页.pdf

安捷伦联系方式：如需安捷伦科技色谱柱与消耗品的最新详细信息：请登录网站： 与当地的安捷伦分公司联系 与当地的安捷伦授权的代理商联系 拨打电话：800-820-3278400-820-3278 或直接拨打直销电话：[phone]安捷伦液相色谱柱选择指南本文中的信息、说明和指标，如有变更，恕不另行通知。安捷伦科技（中国）有限公司，20092009年9 月10 日 中国印刷5990-4435CHCN 安捷伦液相色谱柱选择指南Our measure is your success.高效分析难分离的化合物更快地获得高质量的结果查找当地的安捷伦客户中心： Agilent 电子期刊： 反相键合相的快速指南.5ZORBAX 反相液相柱选择流程图.6色谱柱和流动相指南：反相.8USP 指定的液相色谱柱的快速指南.11从pH 1 到12的方法开发.13卡套柱选择指南.18液相分析柱.19Poroshell 120.20ZORBAX Eclipse Plus.23ZORBAX Eclipse PAH.30ZORBAX Eclipse XDB.32ZORBAX 80 StableBond.40ZORBAX Rx.49ZORBAX 80 Extend-C18.52ZORBAX Bonus-RP.56早期的ZORBAX 反相色谱柱.61ZORBAX 正相色谱柱.62ZORBAX HILIC Plus.66ZORBAX 方法开发工具包.68ZORBAX 方法认证工具包.70ZORBAX 离子交换柱SAX 和SCX.71针对特殊应用的色谱柱.73ZORBAX 超高压及快速高分离度1.8 m 柱.74ZORBAX 高分离高通量1.8 m 柱.77ZORBAX 快速分离3.5 m 柱.85ZORBAX 溶剂节省柱.90ZORBAX PrepHT.94安捷伦制备液相柱.100Ultron ES 手性柱.103用于生物分析的色谱柱.105蛋白质和多肽反相方法开发的ZORBAX 策略.106Poroshell 300.110ZORBAX 300 StableBond.113ZORBAX 300 Extend-C18.118ZORBAX 氨基酸分析(AAA)柱和消耗品.122ZORBAX GF-250 和GF-450 凝胶过滤色谱柱.124安捷伦Bio-Monolith 液相柱.1281在线订购 120 柱具有高柱效、高分离度，柱压比亚二微米柱减少了50%新的ZORBAX 超高压快速高分离度(RRHD)柱改进了填充工艺的1.8 m 柱在安捷伦1290 Infinity LC 上使用在高达1200 bar 压力下保持稳定新的Eclipse Plus 柱C18 和C8 柱提供了良好峰形，用于PAH 分离的新phenyl-hexyl 键合相和C18 键合相为更多应用提供更多选择性快速分离高通量色谱柱(RRHT)扩展系列有140多种1.8 m 色谱柱可供选择您再也不用在速度、分离度和灵敏度之间取舍了请记住，一旦选择了安捷伦ZORBAX 液相柱，您的所得将远远超出色谱柱本身。您还可以获得来自世界上最大色谱供应商40多年的专业经验，以及无可比拟的技术支持。通过网络、电话或人工咨询，安捷伦会帮助您解决可能拖延您工作并妨碍您得出最终结果的问题。2在线订购 Infinity 系统推出无限卓越的液相色谱系统新的安捷伦1290 Infinity 液相色谱仪与市场上的所有其它系统相比，具有更广泛的分析能力从2 mL/min 下1200 bar 到5 mL/min 下800 bar。Infinity 液相色谱仪具有无与伦比的性能、灵活性、方法兼容性和投资潜力。1290 Infinity 二元泵将主动阻尼与最低的延迟体积10 L 相结合加上新的安捷伦JetWeaver 混合器的多层微流控技术实现了超快速梯度与超高灵敏度UV 检测1290 Infinity 二极管阵列检测器的光路设计包括安捷伦最大光强卡套式流通池(Max-Light cartridge flow cell)使UV 灵敏度和基线稳定性都达到了新水平，包括在160 Hz速率下的快速采集光谱数据1290 Infinity 自动进样器新一代的流通设计，在不更换定量环的前提下，使大体积和小体积进样都达到了最高精密度1290 Flexible Cube 与自动进样器相结合，形成固定定量环进样模式，达到了超快速分析周期，通过针座自动反冲使交叉污染降低到一个新的水准1290 Infinity 柱温箱中的阀可弹出，并可由用户更换阀头，增强了可用性，为超高通量、多方法和自动化方法开发解决方案奠定了基础ZORBAX 超高压快速高分离度(1.8 m)液相柱通过相同的色谱柱化学实现了从HPLC 向UHPLC 轻松、快速而安全的方法转换如需了解更多信息，请访问 分类的液相柱的快速指南本章列出了美国药典条目所使用的安捷伦ZORBAX 柱系列，因此，您可以轻松地选择符合USP 或其它药典的色谱柱。反相液相色谱方法开发两个或更多峰之间的色谱分离度取决于柱效、选择性和保留等三个因素三个因素均受pH 影响。虽然用一种类型的色谱柱就可以进行许多分离，但本章介绍了基于流动相pH 变化的完整方法开发策略。在线订购 或乙腈和乙腈：H2O可溶于正己烷经许可，引自Practical HPLC Methodology and Applications,Brian A.Bidlingmeyer,John Wiley&Sons,Inc.,New York,p.109样品未涂渍硅胶的正相模式用不同键合相的正相模式用不同键合相的反相模式凝胶渗透（小分子）用不同键合相的反相模式用离子化控制的键合相反相模式使用离子对试剂的键合相反相模式未涂渍硅胶的反相模式(HILIC)离子交换模式凝胶渗透色谱凝胶过滤色谱大孔填料的离子交换模式大孔填料的反相模式参见第62 页参见第62 页参见第19 页参见第19 页参见第19 页参见第19 页参见第66 页参见第71 页参见第124 页参见第71&128 页参见第113 页45在线订购 反相键合相的快速指南现代ZORBAX RP-液相柱使用和应用建议页码Eclipse Plus提供RRHD 和RRHT 1.8 m 柱方法开发的首选使用寿命长，适合pH 2-9，对碱性、酸性和中性化合物实现可靠分离碱性化合物分析可获得良好峰形用1.8、3.5和5 m 柱获得高分离度和柱效严格的QA/QC 测试，保证了更高的长期重现性Poroshell 120表面多孔层填料，在低压可获得高柱效柱效与亚2微米类似的2.7 m 填料用封端和未封端C18 固定相进行选择性优化与400 bar 和600 bar 液相色谱仪兼容Eclipse XDB提供RRHT 1.8 m 柱有四种选择性适用于灵活的方法开发在宽pH 范围(pH 2-9)内具有高性能酸、碱和中性化合物的良好峰形超密键合和双封端使寿命延长用1.8 和3.5 m 柱进行快速、超快速和高分离度分离从毛细管柱到制备柱的选择StableBond(SB)提供RRHD 和RRHT 1.8 m 柱碱性、酸性和中性化合物低pH 下的卓越稳定性用高温（C18 最高到90C,C8,C3,Phenyl,CN 和Aq 最高至80C）和低pH 作为增加选择性的工具对不同选择性可提供最广泛的键合相选择（C18,C8,C3,CN,Phenyl,Aq）可使用含甲酸、乙酸和TFA 的LC/MS 流动相多肽和蛋白质分离可采用含TFA 的流动相用1.8和3.5 m 柱进行快速分离ZORBAX Rx提供RRHT 1.8 m 柱低pH 下分离碱性、酸性和中性化合物的通用柱，与SB 柱的选择性不同Rx-C8 与SB-C8 相同Bonus-RP提供RRHT 1.8 m 柱用含水较高的流动相分离碱性化合物在中性范围或低pH 下分离碱性、中性和酸性化合物的通用柱；在低pH 下特别稳定利用不同选择性分离多肽用3.5 m 柱进行快速分离Extend-C18提供RRHT 1.8 m 柱以其游离碱形式在pKa 以上分离碱性化合物；在高pH 下分离碱性、酸性、中性化合物；最高可达pH 11.5用氢氧化铵作为流动相添加剂，进行小分子或多肽的LC/MS 分析在高、中性范围和低pH 下分离，改变选择性用3.5 m 柱进行快速分离早期的ZORBAX 柱推荐的使用和应用页码ZORBAX在低pH 下分碱性、酸性、中性化合物的通用柱，与SB 柱的选择性不同；活性硅醇基数比SB 多在较中性pH 下的“混合模式”分离ZORBAX ODS Classic(未封端)在中性范围到低pH 条件下分离碱性、酸性和中性化合物的的通用柱，与SB 或XDB 柱的选择性不同23203240495652616180-120 6在线订购 色谱柱选择流程图的重点是反相柱的选择。要更轻松地为分析小分子和大分子化合物的方法开发选择反相柱，应遵循下列几页的流程。本流程图提供了为小分子和蛋白多肽样品方法开发选择初始色谱柱的信息，并包括如何确定键合相和色谱柱配置。ZORBAX 反相液相柱选择流程图色谱柱内径决定了您可以在柱上注入多少物质（质量）内径越小，要保持良好峰形能注入的样品量就越少。较小内径的色谱柱提高了灵敏度，因此普遍用于LC/MS 分析和样品量有限的应用。4.6 mm柱内径4.6 mm由于C18 会使中等极性到非极性化合物的保留最强，建议将其作为多数样品的方法启始的柱键合固定相。如果使用C18 相无法优化分离或您正在分析较大的蛋白质，应考虑使用短链固定相。启始柱键合固定相填料孔径的首要选择条件是基于要分析的分子的大小。典型的小分子可以很容易地扩散到标准80-120 孔径填料中以及从其中扩散，但是多肽和蛋白质可能不会在这种小孔径填料中扩散。鉴于此原因，建议使用300 孔径填料(300SB)对多肽和蛋白质进行等度或梯度洗脱分离。300填料孔径MW 2000大分子MW 2000MW 2000小分子和大分子常规分析的标准填料为5 m。但也可以使用更小粒径的填料，以提高柱效和分离度。也可以用更短的色谱柱。标准多孔填料粒径柱长5 m5 和3.5 m快速分离3.5 m 短柱可以用于多肽的更快速、高分离度的梯度分析。带实心核和多孔层的Poroshell 柱可以对蛋白质进行最快速的分析快速分析填料粒径4.6 x 50 mm,3.5 m4.6 x 150 mm,5 m959963-9024.6 x 150 mm,3.5 m959993-902959933-9024.6 x 75 mm,3.5 m快速分析660750-9022.1 x 75 mm,5 m标准分析快速分析883995-902959941-9024.6 x 50 mm,1.8 m大分子4.6 x 150 mm,5 m865973-902标准分析小分子开始选择色谱柱3.5 m 粒径可以作为更好的起始粒径，因为不需要进行方法再验证就可以放大到5 m 或缩小到1.8 m 柱上。快速分离柱3.5 m 填料与5 m 填料相比，柱效提高了60%，而快速分离高通量柱耐压600 bar 和超高压快速高分离度柱耐压1200 bar 的1.8 m 填料则使柱效提高了200%。可以用短柱明显缩短小分子的分析时间2.1 x 50 mm,1.8 m959757-902Eclipse Plus C18快速分离柱快速分离高通量柱,600 barEclipse Plus C18ZORBAX 300SB-C18快速分离柱ZORBAX 300SB-C18Poroshell 300SB-C18超高压快速高分离度窄径柱,1200 barEclipse Plus C18*1290 Infinity LC 或其它1000 bar 压力限的UHPLC 首选柱Eclipse Plus C18快速分离柱3.5 m快速分离高通量柱1.8 m超高压快速高分离度色谱柱1.8 m快速分离柱3.5 mPoroshell 5 m8在线订购 柱）的相关章节。孔径选择如果溶质分子量小于5000，则选择小孔径(60-120)填料柱，否则，应使用300 孔径的填料柱。粒径选择液相柱的标准粒径是5 m，现在方法开发主要采用3.5 m 柱。如果需要进行快速分析或需要更高分离度，可以使用1.8 m 和3.5 m 粒径的填料。这些填料的色谱柱越短，就可以进行越快的高分离度分离，1.8 m 粒径快速分离高通量柱提供了最高的柱效。3.5 m 粒径在常规工作压力下操作，可以在所有液相色谱仪上使用。1.8 m RRHT 短柱（50 mm 及更短色谱柱）可以在优化的标准液相色谱仪上使用，而更长的色谱柱可能需要更高压的液相色谱仪（支持400 bar 以上的压力）。色谱柱配置分析方法开发最常推荐的柱规格是4.6 x 150 mm 或4.6 x 75 mm。如果需要更高的分离度，则使用较长的色谱柱，4.6 x 250 mm 或同样尺寸粒径更小的色谱柱。在方法开发过程中，柱内径的选择（即2.1,3.0 mm）要适应特定的应用目的（如，灵敏度、溶剂使用等）或与一定的仪器类型相匹配（毛细管、纳流或制备）。如需了解色谱柱选择的更多信息，请访问9在线订购 反相柱采用三种不同类型的多孔硅胶微球，早期的ZORBAX SIL、ZORBAXRx-SIL 和改性ZORBAX Rx-SIL。ZORBAX Rx-SIL 和改性ZORBAX Rx-SIL 与早期的ZORBAX SIL相比纯度更高、酸性更低。硅胶酸性较低即意味着分析物与硅胶表面硅醇基发生相互作用的可能性较小，尤其对碱性溶质，并能够改善峰形。对于新方法开发，我们强烈推荐使用以改性ZORBAX Rx-SIL(Eclipse Plus)和ZORBAX Rx-SIL(Eclipse,StableBond 等)反相柱。但是，已经有许多很好的方法是采用ZORBAX SIL 反相柱开发的，所以我们还将继续生产这类高质量的可靠产品。键合相键合相应首选C18 或C8。如果感兴趣的样品溶质在这类色谱柱上没有完全分离，则它们在CN 基和苯基柱上的选择性可能会与直链烷烃的固定相有明显的不同，分离效果则不同。通常，大分子溶质，如蛋白质，在短链反相柱(C3,CN)上分离最好，而多肽和小分子物质则适合在长链柱(C8,C18)上分离。但也有许多例外。如，用短链柱也可以有效地分离多肽，而且疏水肽在较长链柱上显示了更好的回收率。因此，开始最好选择一种疏水性中居中的固定相(如，C8)，然后根据初步实验的结果和样品的溶解性选择疏水性更强或亲水性更强的固定相。10在线订购 和流动相反相系统流动相的选择应从选择有机改性剂开始。在含乙腈、甲醇和四氢呋喃(THF)的流动相间选择性和样品保留会有明显区别。这些溶剂或这些溶剂在特定条件下使用时，样品的溶解性可能不同。某些改性剂不能在某些波长下进行UV 检测（如甲醇在200 nm）。在开发稍微改变条件也不受影响的耐用方法时，流动相中水相的pH 和离子强度都是重要参数。对于离子化合物，典型物质的保留随pH 改变而明显不同。在这种反相系统中要使保留和带宽稳定，控制pH 非常重要。通常，将pH 设定在2到4之间，是pH 轻微改变对保留影响最小的最稳定条件，建议大多数样品（包括碱性化合物和一般弱酸化合物）的方法开发从这一pH 范围开始。液相色谱柱固定相色谱柱规格物理性质化学性质表面类型孔径粒径长度内径化学寿命/灵敏度保留因子柱效灵敏度速度11在线订购 指定的液相色谱柱的快速指南美国药典(USP)是许多药物分析方法的标准来源。USP 规定色谱柱填料而不限厂家。USP已更新了其L1 定义，下面将列出的是可以从本色谱柱选择指南中找到和应用的最新的定义和色谱柱。现在可以在L1、L7 和L11 类中选择快速分离高通量(RRHT)柱。如需USP 指定的全部内容，请参见安捷伦2009-2010色谱和光谱产品目录，出版号5989-9611CHCN。美国药典指定USP 填料色谱柱粒径(m)孔径()L1十八烷基硅烷化学键合到直径1.5到10 m 的多孔硅胶或陶瓷微粒上ZORBAX Eclipse Plus C18ZORBAX Eclipse Plus C18ZORBAX SB-C18ZORBAX Extend-C18ZORBAX Rx-C18ZORBAX ODSZORBAX ODS Classic1.8,3.5,51.8,3.5,5,71.8,3.5,5,71.8,3.5,5,73.5,53.5,5,7595808080807070L3多孔硅胶颗粒,直径5 到10 mZORBAX SILZORBAX Rx-Sil559580808070L7辛基硅烷化学键合到全多孔硅胶颗粒,直径1.5 到10 mZORBAX Eclipse Plus C8ZORBAX Eclipse XDB-C8ZORBAX SB-C8ZORBAX Rx-C8ZORBAX C81.8,3.5,51.8,3.5,5,71.8,3.5,5,71.8,3.5,5,759580808070L8氨基丙基硅烷单分子层键合到全多孔硅胶载体上，粒径10 mZORBAX NH2570L10硝基化学键合到多孔硅胶颗粒,粒径3 到10 mZORBAX Eclipse XDB-CNZORBAX SB-CNZORBAX CN3.5,53.5,53,5808070L11苯基化学键合到多孔硅胶颗粒,粒径1.5 到10 mZORBAX PhenylZORBAX SB-PhenylZORBAX Eclipse XDB PhenylZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl51.8,3.5,53.5,51.8,3.5,57080809512在线订购 到10 mZORBAX TMS570L14化学键合的10 m硅胶具有强碱季铵阴离子交换涂层ZORBAX SAX470L20二羟基丙烷化学键合到多孔硅胶颗粒,粒径3 到10 mZORBAX GF-2505150L33填料能够分离分子量范围4,000 到400,000 kDa的蛋白质，该填料为球形，硅胶基，经处理后具有pH稳定性ZORBAX GF-2504150L35带亲水（二醇类）分子单层键合的锆稳定球形硅胶填料ZORBAX GF-250ZORBAX GF-45046150300L56丙基硅烷化学键合到多孔硅胶颗粒,粒径3 到10 mZORBAX SB-C33.5,580L57手性识别蛋白，卵类粘蛋白，化学键合到硅胶颗粒，粒径约5 m，孔径120埃Ultron ES-OVM5120L60粒径10 m或以下的球形多孔硅胶，表面经烷基酰胺基团共价键合改性，并封端Bonus-RP1.8,3.5,580美国药典指定USP 填料色谱柱粒径(m)孔径()13在线订购 1 到12范围的方法开发两个或更多峰之间的色谱分离度好坏取决于三个因素柱效、选择性和保留时间。对于可离子化的分析物碱和酸所有这三种因素都随pH 变化而改变。例如，改变分离pH 可以改善保留时间，使分析物以其非离子化形式进行分离。流动相pH 的改变可能提高柱效，因为pH 的变化可改变分析物和硅醇基的离子化程度，从而使引起峰形变差的分析物和硅胶表面的二级作用降到最低。获得最佳分离度可能也需要改变流动相pH。下列方法开发策略解释了如何在改变PH 值的同时保障柱寿命。低、中和高pH 是色谱分离的三个常用区域，如图1所示。图中显示了在各pH 内对离子化分析物进行分离的优势。方法开发从研究低pH 下的色谱分离开始，然后提高pH，直到获得最好的结果。每个pH 值范围内都有理想的色谱柱可供选择。保留时间+中性中性中性中性/-无无有分析物带电性硅胶表面带电性离子交换二级反应推荐的键合相Eclipse Plus 或StableBondEclipse XDB 或Bonus-RPExtend-C18图1：碱性化合物液相色谱分离的三个pH 区域本图列出了碱性化合物pKa 与pH 对其保留的影响pKa 为6.5低pH 9 C 段方法开发从低pH 开始，此时RP-HPLC 柱的硅醇基是质子化的。这样可消除硅醇/碱之间的相互作用，从而最大限度地减少峰拖尾低pH 时碱性化合物带正电荷，保留值会降低酸性化合物被质子化，保留值增加pH 值变化较小时，保留时间通常是稳定的，可以建立稳定的方法使用LC/MS 在低pH 值范围内开发方法时，常使用挥发性的流动相添加剂，如甲酸或三氟乙酸(TFA)至少要离开pKa 上下一个pH单位开发方法，以减少pH 微小变化而对保留值造成的影响有些硅胶表面的SiOH 基团在pH 4-5 时变成SiO，可能会引起拖尾为减少拖尾，可以选择设计优良的封端色谱柱，且使用如三乙胺（TEA，较少需要）等添加剂，或使用“极性”键合相改进的键合固定相、多次封端以及使用Rx-SIL 可以保护硅胶免被破坏该段中，碱性化合物大多处于游离态碱性化合物的保留值及分离度均可能会增加在此段内保留值变化甚微，因此可以开发稳定的方法改进的配位柱化学，多次封端，使用Rx-SIL，以及优化流动相，可以保护硅胶免被破坏氨水是高pH 值时最理想的挥发性流动相改性剂?14在线订购 2-3)开始进行方法开发有如此多的色谱柱可以选择，你如何知道方法开发从何处开始？我们建议方法开发从低pH缓冲液流动相开始进行 pH 约为2-3。采用低pH流动相通常能够使碱性化合物在硅胶基色谱柱上获得最好的峰形。在低pH条件下，硅胶上的硅醇基完全质子化，所以与带正电荷的碱性化合物的相互作用较弱。从而得到良好的峰形。许多酸性化合物在低pH下不带电荷，使其保留最大。这些现象是在低pH下进行方法开发的主要优势。对于不使用LC/MS 联用的标准分析方法，方法开发首选乙腈作为流动相的有机改性剂，20-50 mM 磷酸盐缓冲液(pH 2-3)作为水相部分。这一条件使pH 得到精确控制，对于离子化合物实现最高的分析重现性很有必要。如果要进行LC/MS 联用，甲酸或TFA 是良好的低pH 流动相添加剂。要获得最好的峰形，首选ZORBAX Eclipse Plus 柱在低pH 下进行方法开发首选ZORBAX Eclipse Plus C18 或C8 柱。Eclipse Plus 柱是Eclipse系列的最新产品，采用改良的硅胶和键合技术，可为碱性化合物提供良好的峰形。EclipsePlus 可以在pH 2-9的范围内使用，使您可以灵活地进行方法开发。在pH 值低至2的条件下仍非常稳定，是开始方法开发的理想选择。15在线订购 下优化溶剂和键合相通过方法开发的初始步骤可能很快就能得到满意的分离。但如果需要进一步优化，若可以用甲醇或四氢呋喃取代乙腈，对分离进行重新优化。这一步可能得到满意的结果，但仍需要对选择性进行优化，则可以改变色谱柱键合相。在低pH 条件下有许多键合相可供优化选择。包括Eclipse Plus，以及Eclipse XDB 系列的C18、C8、苯基和氰基键合相。或者从以下6种不同的StableBond 键合相中进行选择：SB-C18,SB-C8,SB-Phenyl,SB-CN,SB-C3 和SB-Aq。在低pH 值时，可能有必要改善酸性化合物的保留。遇到这种情况时，可以进一步降低pH，达到pH 1-2，并使用StableBond 柱。这种色谱柱在极低的pH 条件下非常稳定，为获得最高分离度分离提供了许多选择机会。选择安捷伦ZORBAX Eclipse Plus 进行中性pH(4-9)内的方法开发一些样品可能在低pH 下无法分离，或在中性pH 下具有更好的溶解度和稳定性。同样使用Eclipse Plus C18 柱，可用于中等pH 范围的方法开发。Eclipse Plus 柱在高达pH 9 时仍很稳定，所以在中等pH 下依然可靠。这种双封端柱有两个主要优势 在低和中pH 下峰形良好，以及键合密度较高，可以保护色谱柱硅胶在pH 6-9 范围内不会降解。在中等pH 范围内，碱性化合物（如胺类）可能仍带正电荷，而硅胶表面的硅醇基则可能带负电荷。因此，尽可能多地掩蔽硅醇基，可以在中等pH 范围内得到最好的峰形。所以这使Eclipse Plus C18 成为中等pH 范围内进行方法开发的首选色谱柱。通常，pH 7 时流动相改性剂首选磷酸盐缓冲液，因为其缓冲范围为pH 6.1-8.1。其次可选择醋酸盐缓冲液，因为其缓冲范围为pH 3.8-5.8，且因为具有挥发性，使其成为与LC/MS 兼容的良好选择。16在线订购 Eclipse Plus Phenyl-Hexyl、Eclipse XDB-Phenyl、CN 和Bonus-RP色谱柱中进行选择在中等和低pH 值时的方法开发步骤具有相似性，执行该步骤后若分离度不理想，可通过优化有机改性剂和选择其他的键合固定相来实现理想分离度。在中等pH 值范围内，EclipsePlus Pheny-Hexyl、Eclipse XDB-Phenyl、Eclipse XDB-CN 和Bonus-RP 是可选择的替换柱。它们可为许多样品提供不同的选择性，然后再次按照上述步骤开始方法开发。Bonus-RP柱嵌入极性酰胺基团可为许多样品提供不同的选择性，在分离碱性化合物时能保证良好的峰形，而且该色谱柱可以使用100%水相流动相。选择安捷伦ZORBAX Extend-C18 柱在高pH(pH 9-12)范围内进行方法开发在低或中等pH 下，对某些碱性化合物的分离可能仍没有达到足够的保留或期望的选择性。这些样品也可能适合在高pH 下进行分离。不久以前，我们还一直避免在硅胶基色谱柱上进行高pH 分离，因为硅胶溶解会导致柱寿命缩短。而现在，新的色谱柱的应用，如(ZORBAX Extend-C18)，可以保护硅胶不发生溶解，有效地延长了柱寿命，进而能够发掘高pH 的选择性优势。在高pH 下使用Extend-C18 柱所选择的流动相缓冲液为有机缓冲液，如三乙胺和氨水。使用这类缓冲液最好用甲醇作为有机改性剂，以延长高pH下的柱寿命。17在线订购 3初始分离从低pH 到高pH 范围的方法开发指南保留弱的化合物酸步骤1a碱或步骤1b ZORBAX Eclipse Plus C18 或C8 pH 2.5(2-3)20-50 mM 缓冲液 T=30C（环境温度到60C）调节乙腈的百分比含量，使得0.5 k 20分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全分离不完全步骤2步骤3步骤4步骤5步骤6步骤7步骤8步骤9步骤10步骤1c步骤1d步骤1e步骤2a步骤5a步骤5b步骤5c步骤5d步骤10a改变色谱柱温度，对于Eclipse XDB 可到60C，对于Stablebond 可到80-90C在键合固定相的建议范围内调节温度保留弱的酸性化合物每次按5%(v/v)增加或减少有机改性剂的百分比含量 改变有机改性剂（乙腈或四氢呋喃）调节含量，使得0.5 k 20 从步骤6 重新开始或 ZORBAX Eclipse Plus C18 或C8 pH 7(6-9)，20-50 mM 缓冲液 T=30C（环境温度到40C）调节甲醇的百分比含量，使得0.5 k 20酸性化合物（离子对）使用甲醇有机改性剂、10 mM 四丁基铵磷酸盐和25-50 mM pH 7 的缓冲液 调节甲醇的百分比含量，使得0.5 k 20在键合固定相的建议范围内调节温度每次按5%(v/v)增加或减少有机改性剂的百分比含量 改变有机改性剂（乙腈或四氢呋喃）调节含量，使得0.5 k 20?pH 7?pH 9碱性化合物（离子对）使用甲醇有机改性剂、10 mM 己烷磺酸和25-50 mM pH 3 的缓冲液 调节甲醇的百分比含量，使得0.5 k 20每次按5%(v/v)增加或减少有机改性剂的百分比含量每次按5%(v/v)增加或减少有机改性剂的百分比含量 改变有机改性剂（乙腈或四氢呋喃）调节含量，使得0.5 k 20每次按5%(v/v)增加或减少有机改性剂的百分比含量 改变有机改性剂（甲醇或四氢呋喃）调节有机改性剂的百分比含量，使得0.5 k 20 从步骤2 重新开始将键合相的功能团改为Eclipse XDB-C18 或C8，苯基SB-CN 或AQ，苯基或Bonus-RP 从步骤1 重新开始ZORBAX SB-C18 或SB-C8 pH 1-3 20-50 mM 缓冲液 T=30C（环境温度到90C）调节乙腈的百分比含量，使得0.5 k 20请尝试不同的HPLC 模式联系安捷伦科技 改变有机改性剂（乙腈或四氢呋喃）调节含量，使得0.5 k 20 ZORBAX Extend-C18 pH 10.5(9-11.5)；5-20 mM 氨水或三乙胺、10-50 mM 有机缓冲液或硼酸缓冲液 T=25C（室温到40C）调节甲醇的百分比含量，使得0.5 k 7 和温度40C 条件下柱寿命明显缩短。所有硅胶基色谱柱在pH 6-9、温度低于40C 和低缓冲液浓度范围(0.01-0.02 M)的条件下使用，可获得最高的柱稳定性，尤其是使用磷酸盐和碳酸盐缓冲液时。24在线订购 Plus C18Ace 5 C18SunFire C18XBridge C18Discovery HS C18Luna C18(2)Gemini C18XTerra MS C1801.02.03.00.51.52.53.5ABTime(min)LCEC003024681012N=14000Tf=1.25N=41000Tf=1.13N=60000Tf=1.00N=23000Tf=1.01654321Time(min)0246810126543211.磺胺2.磺胺嘧啶3.磺胺噻唑4.磺胺甲嘧啶5.磺胺二甲嘧啶6.新诺明使用ZORBAX Eclipse Plus 获得更好的峰形和柱效A 柱：XBridge C18,4.6 x 150 mm,5 mB 柱：Eclipse Plus C18959993-9024.6 x 150 mm,5 m流动相:A:0.1%甲酸B:含0.1%甲酸的乙腈溶液流速:1.0 mL/min梯度:0.0 分钟10%B15 分钟30%B柱温:40C检测器:UV 254 nm发行号:5989-4934EN样品:磺胺药物ZORBAX Eclipse Plus 业界中的最佳峰形，无拖尾色谱柱:Eclipse Plus C18959996-9024.6 x 100 mm,5 m流动相:A:60%水溶液B:40%乙腈流速:1.0 mL/min柱温:室温检测器:UV 254 nm发行号:5989-4934EN样品:呲啶，苯酚1.吡啶2.苯酚25在线订购 Plus 柱消除拖尾并最大化分离度A 柱：Eclipse Plus C18，4.6 x 50 mmB 柱：竞争厂商的C18，4.6 x 50 mm流动相:65%乙腈:35%25 mM 磷酸盐缓冲液(pH 7.4)Tf=1.20Tf=4.86Eclipse Plus C18，4.6 x 50 mm竞争厂商的C18，4.6 x 50 mm1.二苯甲酮2.内标3.辛基甲氧桂皮酸酯1.去甲替林2.邻苯二甲酸二丙酯Eclipse Plus C18 与C8 和RRHT 与RR 的对比A 柱：Eclipse Plus C18959941-9024.6 x 50 mm,1.8 mB 柱：Eclipse Plus C8959943-9064.6 x 50 mm,3.5 m流动相:水：乙腈(30:70)流速:2.0 mL/min柱温:30C检测器:UV 230 nm 样品:N:6600Pw:0.037 min.TF:0.99N:6300Pw:0.061 min.TF:0.98N:5000Pw:0.019 min.TF:1.09N:8800Pw:0.014 min.TF:1.20N:11600Pw:0.047 min.TF:1.06N:11800Pw:0.093 min.TF:1.02min01234min01234247 barAB88 bar22 min.通过Eclipse Plus 获得出色的峰形和更好的选择性，这意味着在分离中得到更高的分离度、更容易进行定量并获得更好的结果。保留弱可以显著节省时间在此C8 是个良好选择快速分离高通量柱提供了需要的柱效和分离度，但C8 键合相可能是最好的选择。润唇膏的乙腈提取物(在100C 乙腈中融化，冷却后经0.45 m 滤膜过滤)26在线订购 2 与pH 7 条件下的选择性区别色谱柱:Eclipse Plus C8959946-9064.6 x 50 mm,5 m梯度:10-60%B/3 分钟pH 2.7:A:0.1%甲酸B:含0.1%甲酸的乙腈pH 7.0:A:20 mM 磷酸钠B:乙腈样品:普通止痛片1.醋氨酚2.咖啡因3.乙酰水杨酸4.未知Eclipse Plus C8 比Eclipse Plus C18 保留时间短A 柱：Eclipse Plus C8959996-9064.6 x 100 mm,5 mB 柱：Eclipse Plus C18959996-9024.6 x 100 mm,5 m流动相:80%甲醇8 mM(总)K2HPO4pH 7流速:1.0 mL/min检测器:UV 215 nm样品:阿米替林0.05 g/L(0.5 L 进样)00.511.522.533.5min4pH 2.7321pH 7.000.511.522.533.5min12342 min.0 0123456789minTf=1.04Tf=1.000 0123456789min3.789AB5.777Eclipse Plus C18 和C8 都可以在广泛的pH 范围内使用，以优化选择性或分析时间一般选择C8 柱，因为其比C18 保留时间短，可缩短分析时间Eclipse Plus C8 能为难分离的碱性化合物提供良好峰形，同时表现出与C18 柱同样的性能27在线订购 Plus 柱上快速和超快速分析碱性化合物A 柱：Eclipse Plus C18959941-9024.6 x 50 mm,1.8 mB 柱：Eclipse Plus C18959993-9024.6 x 150 mm,5 m959993-902流动相:A:50%8 mM K2HPO4，pH 7B:50%乙腈流速:1.0 mL/min柱温:室温检测器:UV 254 nm发行号:5989-4934EN样品:黄连素，0.4 mg/mL，2 LminEP10300.5A11.522.5OOCH3Tf=1.00OCH3ON+Cl-min00.511.522.5BTf=1.061.黄连素28Order online at Eclipse Plus标志说明规格粒径(m)EclipsePlus C18USP L1EclipsePlus C8USP L7Eclipse PlusPhenyl-HexylUSP L11EclipsePAHUSP L1分析柱4.6 x 2505959990-902959990-906959990-912959990-918分析柱4.6 x 1505959993-902959993-906959993-912959993-918分析柱4.6 x 1005959996-902959996-906959996-912959996-918分析柱4.6 x 505959946-902959946-906快速分离柱4.6 x 1503.5959963-902959963-906959963-912959963-918快速分离柱4.6 x 1003.5959961-902959961-906959961-912959961-918快速分离柱4.6 x 753.5959933-902959933-906959933-912快速分离柱4.6 x 503.5959943-902959943-906959943-912959943-918快速分离柱4.6 x 303.5959936-902959936-906959936-912快速分离高通量柱,600 bar4.6 x 1001.8959964-902959964-906959964-912959