鼠李糖脂钙的制备及物理化学性质表征_武青芳.pdf

第 37 卷第 1 期 高 校 化 学 工 程 学 报 No.1 Vol.37 2023 年 2 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Feb.2023 文章编号：1003-9015(2023)01-0080-06 鼠李糖脂钙的制备及物理化学性质表征 武青芳,骆宇璐,孟 琴(浙江大学 化学工程与生物工程学院,浙江 杭州 310058)摘 要：鼠李糖脂是一种生物表面活性剂，由于其表面活性好及环境友好特性，在环境、石油和日化等领域都有广泛应用，但在日化方面的应用受限于其颜色深、不易保存与运输。研究以鼠李糖脂为原料制备色泽浅且呈固态的鼠李糖脂钙，并研究其结构、表面活性及物理化学性质。核磁和红外结果显示，鼠李糖脂钙具有与鼠李糖脂相同的主体结构。分析表明鼠李糖脂钙由质量分数为 3.12%的钙离子和质量分数为 36.22%的鼠李糖构成，钙原子与鼠李糖脂的物质的量比为 1:2。热重分析测得鼠李糖脂钙熔点约为 125，显著高于鼠李糖脂的熔点(83)，但二者热分解稳定性却相差不大。此外，鼠李糖脂钙可将水的表面张力降至 27 mNm1左右，其临界胶束浓度(CMC)为 223.7 mgL1，具有与鼠李糖脂相似的表面活性。综上，鼠李糖脂钙表面活性好、色度低且以固体形式存在，是比较理想的用于日化行业的生物表面活性物质。关键词：生物表面活性剂；鼠李糖脂钙；表面活性；热稳定性 中图分类号：Q546 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1003-9015.2023.01.010 Preparation and physicochemical properties of rhamnolipid calcium WU Qing-fang,LUO Yu-lu,MENG Qin(College of Chemical and Biological Engineering,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China)Abstract:Rhamnolipid is widely used as biosurfactant due to its good surface activities and environment-friendly characteristics.However,its application in daily chemical industry is limited by their poor color and difficulty in storage and transportation.In this paper,rhamnolipid calcium with light color was prepared from rhamnolipid,and its structure,surface activity and physicochemical properties were studied.1H NMR and FT-IR analysis revealed that rhamnolipid calcium had the same main structure as rhamnolipid.The content analysis showed that it was composed of 3.12%(mass fraction)calcium ions and 36.22%(mass fraction)rhamnose,and the molar ratio of calcium to rhamnolipid was 1:2.Thermogravimetric analysis exhibited that the melting point of rhamnolipid calcium was about 125,which was much higher than that of rhamnolipid(83),while their thermal decomposition stability was similar.In addition,rhamnolipid calcium could reduce the surface tension of aqueous solution to about 27 mNm1 at concentrations above the critical micelle concentration(CMC)of 223.7 mgL1,which had a surface activity similar to rhamnolipid.Hence,rhamnolipid calcium should be an ideal biosurfactant suitable for daily chemical industry.Key words:biosurfactant;rhamnolipid calcium;surface activity;thermal stability 1 前 言 表面活性剂分为生物表面活性剂和化学表面活性剂，它们在市场中发挥着重要的作用。生物表面活性剂有很多优于化学表面活性剂的性质，如可生物降解、低毒性、结构多样性以及良好的乳化稳定性等。收稿日期：2021-11-29；修订日期：2022-05-06。基金项目：国家自然科学基金(21776242)。作者简介：武青芳(1994-)，女，河南商丘人，浙江大学硕士生。通信联系人：孟琴，E-mail： 引用本文：武青芳,骆宇璐,孟琴.鼠李糖脂钙的制备及物理化学性质表征 J.高校化学工程学报,2023,37(1):80-85.Citation：WU Qing-fang,LUO Yu-lu,MENG Qin.Preparation and physicochemical properties of rhamnolipid calcium J.Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities,2023,37(1):80-85.第 37 卷第 1 期 武青芳等：鼠李糖脂钙的制备及物理化学性质表征 81 因此，在医药、食品、环境和化妆品等行业均有广泛应用1-2。生物表面活性剂的生产原料为生物质，这也符合国内外对于碳达峰与碳中和的时代要求，因此全球对生物表面活性剂的需求量逐渐上升。20142020 年，销售额年增长率达到 4.3%3。其中，属于糖脂类表面活性剂的鼠李糖脂和槐糖脂有更大的应用优势。据预测，鼠李糖脂和槐糖脂到 2023 年销售额将实现 8%的增长4。相比之下，由于鼠李糖脂的水溶性较好，表面活性好5，且由发酵得到的槐糖脂不能形成稳定的油包水型乳液6，所以鼠李糖脂应用范围更广。由铜绿假单胞菌发酵得到的鼠李糖脂，在中性水溶液中的临界胶束浓度(critical micelle concentration，CMC)为 0.1 mmolL1 7，而十二烷基硫酸钠的 CMC 为 8.1 mmolL1，月桂酸钠的 CMC为 24.4 mmolL1 8。可见，鼠李糖脂的 CMC 比一般化学表面活性剂要低 12 个数量级。此外，鼠李糖脂有抗菌、免疫调节和合成纳米颗粒的能力9-12，且抗皱纹和抗衰老13-14，还可治疗痤疮和粉刺15，以及具有保湿和抗黏附特性，因此可被用于化妆品中16。但是，鼠李糖脂产品颜色较深，且通常以水溶液和黏稠状膏体存在，不易保存和运输，无法满足化妆品的色泽浅和易保存的要求17，所以其在化妆品行业中的应用存在局限性。本研究首先利用萃取法除去溶液中的色素、脂肪酸和含氮类杂质，再通过制备鼠李糖脂的钙盐，使其以固体形式存在，经过上述过程，可解决鼠李糖脂色泽差、不易保存和运输的问题。目前尚未见有关鼠李糖脂钙的制备，更未见有关其物理化学性质的报道。本研究重点探讨了鼠李糖脂钙的物理化学性质，为鼠李糖脂应用于日化行业提供一种新思路。2 材料与方法 2.1 材料与试剂 鼠李糖脂发酵液来源于湖州紫金生物科技；蒽酮(分析纯)购自上海麦克林生化科技有限公司；氯化钙、氢氧化钠、浓硫酸、盐酸、乙醇和乙酸乙酯均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。2.2 鼠李糖脂钙的制备 萃取：配制鼠李糖脂质量浓度为 100 gL1的乙酸乙酯溶液，用等体积但不同质量浓度的 NaOH 溶液(质量浓度为 2、5、7.5、10 gL1)进行萃取18。对萃取后的上下层溶液用薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC)来判断鼠李糖脂回收率。钙化：在萃取的下层溶液中，加入饱和氯化钙溶液，充分搅拌，使其反应完全，改变钙离子和鼠李糖脂的质量比(m(Ca):m(rhamnolipid)为 0.08、0.12、0.16、0.20)，50 水浴下反应，用 TLC 法初步判断鼠李糖脂的沉淀程度。乙醇纯化：用无水乙醇溶解钙化反应得到的沉淀，离心分离后取上清液进行真空旋蒸以除去溶剂，得到鼠李糖脂钙固体。鼠李糖脂定性分析：采用薄层色谱层析的方法19判断鼠李糖脂的回收情况。方法如下：点样到硅胶板上，然后将样品点烘干。再将 TLC 板放在展开槽中，展开剂为氯仿-甲醇-乙酸(其体积比为 40:9:1)，展开完毕后再烘干 TLC 板。用硫酸-蒽酮(0.02 g 蒽酮溶于 10 mL 浓硫酸)试剂喷洒平板，并在 110 下加热 2 min，鼠李糖脂斑点会显蓝紫色。通过显色斑点的面积以及颜色深浅判断鼠李糖脂的质量浓度或回收情况。2.3 鼠李糖脂钙的结构表征 红外光谱(FT-IR)表征：将样品干燥后碾为粉末状，与溴化钾粉末混合研磨均匀，然后压片，用傅里叶红外光谱(IS5，赛默飞世尔科技有限公司)表征，扫描波数范围是 5004 500 cm1。核磁共振氢谱(1H-NMR)表征：使用氘代甲醇溶解干燥后的样品，用核磁共振仪(DMX 500，Bruker Advance)测定。扫描电子显微镜(SEM)表征：样品置于烘箱中充分干燥，对样品表面喷金处理，使用场发射扫描电子显微镜(SU-8010，日本日立公司)对样品进行表面分析。82 高 校 化 学 工 程 学 报 2023年2月 钙质量浓度测定：将鼠李糖脂钙用硝酸和双氧水湿法消解20，用火焰原子吸收仪(PinAAcle 900F，新加坡 Perkin-Elmer 公司)测定其钙质量浓度。钙原子质量浓度按式(1)计算：10.009 07(Ca)0.041 66A=(1)式中：()Ca为钙原子质量浓度，mgL1；A1为钙原子吸光值。鼠李糖质量浓度测定：鼠李糖脂钙用乙醇溶解，用硫酸蒽酮法测其鼠李糖质量浓度21，并按式(2)计算：()20.rh27amno3 411 4s3e.An=(2)式中：()rhamnose为鼠李糖质量浓度，gL1；A2为鼠李糖吸光值；n 为稀释倍数。2.4 鼠李糖脂钙的性能测定 堆密度：将干燥后的鼠李糖脂钙粉末加入玻璃漏斗内，使其自然下落于量筒中，用勺子刮平顶部，避免压实粉末，记录其表观体积 V0，总质量记为 ma，空量筒的质量记为 mb，按照式(3)计算堆密度b：abb0mmV=(3)进行平行试验 3 次，取均值为堆密度。热稳定性：样品干燥后，参照 Lotfabad 等22的方法，用热重分析仪(TA-Q500 TGA，美国 TA 公司)分析样品的热稳定性。将样品放入坩埚内，用压片机将坩埚盖与坩埚压合，然后放入热重分析仪炉中。测试条件如下：升温速率为 10 min1，测试气氛为氮气(50 mLmin1)，测试温度为室温至 600。熔点：采用差示扫描量热仪(PE DSC 7，美国 Perkin-Elmer 公司)分析样品加热时的吸热/放热情况。测试温度为室温至 170，其他条件同热重(TG)测试。表面张力：室温下，配制系列梯度质量浓度的鼠李糖脂钙溶液，用视频接触角测试仪(OCA 20，德国 Dataphysics 公司)测定其不同质量浓度下对应的表面张力，绘制表面张力和质量浓度的对数曲线，由曲线切线的交点得出 CMC 值。3 结果与讨论 3.1 鼠李糖脂钙的制备 萃取：萃取操作中，由于物质在有机相和水相分配系数的差异，大部分脂肪酸、含氮类杂质以及色素类物质进入有机层，而鼠李糖脂保留在下层水溶液中，由下层水溶液中鼠李糖脂的质量浓度以及水溶液的颜色判断，氢氧化钠质量浓度为 7.5 和 10 gL1时，水溶液颜色较浅，且 TLC 检测发现上层有机相中无鼠李糖脂的存在，而水溶液中有大量鼠李糖脂存在。因此，这 2 个氢氧化钠质量浓度可以满足分离纯化的要求，但是从经济性考虑，最终确定用于萃取的 NaOH 溶液质量浓度为 7.5 gL1。钙化：鼠李糖脂结构中含有羧基，与过渡金属离子间可发生配位反应，在其水溶液中加入氯化钙溶液，钙离子和羧基反应，鼠李糖脂以沉淀形式析出。沉淀量结果 m/V 如图 1 所示，图中 m 为沉淀物的质量，V 是溶液的体积。从图中可以看到，m/V 随着m(Ca):m(rhamnolipid)增加而呈增加趋势。当投入的钙离子和鼠李糖脂的物质的量比恰好为 2:1 时(m(Ca):m(rhamnolipid)=0.14:1)，TLC 结果发现，上清液中仍有鼠李糖脂存在，此情况出现说明溶液中存在其他可与钙离子反应的物质，如不同链长的脂肪酸，所以继续增加钙离子的量，并用 TLC 分析判断上清液中是否有鼠李糖脂存在，发现当 m(Ca):m(rhamnolipid)增加到 0.20 时，上清液中已检测不到鼠李糖脂的存在，认为溶液中的鼠李糖脂均与钙离子反应完全。最后选择质量比 m(Ca):m(rhamnolipid)=0.20为钙沉实验条件，即加入的氯化钙和鼠李糖脂的质量比为 1:1.8。在钙沉操作后，部分亲水性色素残留在上清液中。图 1 不同钙与鼠李糖脂的质量比对钙沉的影响 Fig.1 Effect of different mass ratios of Ca to rhamnolipid on precipitation 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2046810121416182022 Precipitation ratio(m/V)m(Ca):m(rhamnolipid)第 37 卷第 1 期 武青芳等：鼠李糖脂钙的制备及物理化学性质表征 83 乙醇纯化：用无水乙醇溶解得到的鼠李糖脂钙样品，脂肪酸钙以及一些包裹在鼠李糖脂钙中的不溶于乙醇的杂质析出，离心取上清液进行真空旋蒸除去溶剂，得到鼠李糖脂钙固体，研磨后得到浅黄色粉末，如图 2(a)所示。图 2(b)是未处理前的膏状鼠李糖脂。经过萃取、钙化和乙醇溶解操作后，去除了部分脂肪酸类物质以及大部分含氨基类杂质和色素类物质，得到粉末状的鼠李糖脂钙，且其颜色为浅黄色，可以满足其在日化产品中的应用。3.2 鼠李糖脂钙的化学结构表征 本研究采用核磁分析法和红外光谱表征鼠李糖脂钙的化学基团，并与鼠李糖脂纯品进行比较。采用火焰原子吸收法测钙离子质量浓度，蒽酮法分析鼠李糖质量浓度。3.2.1 核磁氢谱分析 如图 3 所示，由两者的核磁图结果看，鼠李糖脂钙和鼠李糖脂的峰保持一致，这表明，鼠李糖脂钙的主体结构与鼠李糖脂类似。鼠李糖脂的核磁谱图中，化学位移 为 0.898、1.27 和 1.445 的分别是CH3、(CH2)6和CHCH2，为 2.4092.570 表明存在 CH2COO，为 3.4214.455 时是吡喃糖环的氢原子，为 5.3455.381 表明存在 COOCH。鼠李糖脂钙的核磁谱图主要出峰位置和鼠李糖脂一致，且与文献报道的鼠李糖脂核磁分析结果一致23-25。3.2.2 红外光谱分析 如图 4 所示，鼠李糖脂的红外谱图中，3 347 和 1 040 cm1处的吸收峰是分子中OH 伸缩振动所致；2 924 和 2 855 cm1是碳氢链中甲基和亚甲基伸缩振动产生的吸收峰；1 736 cm1是 CO 伸缩振动产生的典型吸收峰，表明分子中含有脂肪链；1 379 cm1吸收峰是由 CH 或 OH 变形振动引起；1 1651 123 cm1是 COC 伸缩振动产生的吸收峰，表明分子中含有羧酸酯基团。鼠李糖脂钙的红外谱图中，其在 3 347、1 040、2 924、2 855、1 165 和 1 123 cm1处的吸收峰和鼠李糖脂保持一致。CO 伸缩振动产生的吸收峰移到1 730 cm1处，此外在1 5601 570 cm1和1 3801 460 cm1 2 个区间出现了 2 个较强的吸收峰，这是羧酸根负离子的反对称伸缩振动峰，由于糖脂钙是二价金属盐，同时羧酸根负离子中 2 个 CO 键完全平均化，其伸缩振动发生强烈偶合，所以导致其吸收带向低频方向移动，表明合成了鼠李糖脂钙。3.2.3 分子结构解析 采用火焰原子吸收法测得鼠李糖脂钙中钙质量分数为 3.12%，鼠李糖质量分数为 36.22%。主要单糖脂的分子量为 505，双糖脂的分子量为 650，而且单、双糖脂的质量比约为 1.3:1，由此计算得出鼠李糖脂与钙离子的物质的量比为 2:1。(a)rhamnolipid calcium(b)rhamnolipid 图 2 鼠李糖脂钙和鼠李糖脂的外观 Fig.2 Picture of rhamnolipid calcium and rhamnolipid 4000 3500 3000 2500 2000 1500 10001 570 cm-1 1 560 cm-1 1 380 cm-1 rhamnolipid calciumrhamnolipid Transmittance1 460 cm-1 5 4 3 2 1 0 COOCH H of pyranose ring CH2COO CHH2(CH2)6 CH3 COOCH H of pyranose ring CH2COO CHCH2(CH2)6 CH3 rhamnolipid calcium rhamnolipid 图 3 鼠李糖脂钙与鼠李糖脂的1H-NMR 分析谱图 Fig.3 1H-NMR spectra of rhamnolipid calcium and rhamnolipid Wave number/cm1 图 4 鼠李糖脂钙与鼠李糖脂的红外分析谱图 Fig.4 FT-IR spectra of rhamnolipid calcium and rhamnolipid 84 高 校 化 学 工 程 学 报 2023年2月 0100200300400500600020406080100TG/%rhamnolipid calcium rhamnolipid1.01.52.02.53.03.5203040506070 CMCt/图 6 鼠李糖脂钙和鼠李糖脂24的热重分析图 Fig.6 TGA of rhamnolipid calcium and rhamnolipid lg 图 7 鼠李糖脂钙浓度对表面张力的影响 Fig.7 Influence of rhamnolipid calcium concentration on surface tension Surface tension/(mNm1)3.2.4 结构与形貌分析 鼠李糖脂钙和干燥后鼠李糖脂的 SEM 形貌如图 5 所示。从图中可见，鼠李糖脂钙是以不规则颗粒形式存在，无孔道结构。而鼠李糖脂呈无定形状。因为固体形式更有利于保存和运输，所以得到的鼠李糖脂钙在保存和运输上更具有优势。3.3 鼠李糖脂钙的物理化学性质分析 3.3.1 堆密度与熔点 用自然下落法测量其堆密度，得出鼠李糖脂钙粉末堆密度为(0.44 0.02)gcm3。用差式扫描量热仪对鼠李糖脂钙进行检测，发现其熔点在 125 左右，而本课题组测得鼠李糖脂的熔点为 83 26，鼠李糖脂钙熔点要高于鼠李糖脂，这与前者呈固态和内部存在离子键相关。3.3.2 热稳定性分析 鼠李糖脂钙在氮气气氛下随温度的失重趋势图如图 6所示，通过TG曲线可以看到，温度 t升到100 时失重 3.6%，这部分是游离水分。鼠李糖脂钙约在 186 发生第一次热分解，且约在 248 达到最大失重速率，该热稳定性与鼠李糖脂的相似26。330 左右又开始不同于鼠李糖脂的热分解过程，至 500 时共失重约 87.3%。由此推测，随着温度增加，鼠李糖脂钙的有机链发生断裂，在 330 左右产生碳酸钙，随着温度继续升高，其分解为氧化钙。600 时有 11.5%的残留，其主要是含钙化合物(碳酸钙及部分生成的氧化钙)，此外尚有少量碳。3.4 表面活性表征 使用视频接触角测试仪测定鼠李糖脂钙水溶液的表面张力，其结果如图 7 所示，图中为鼠李糖脂钙质量浓度。从图中可见，水的表面张力随的增加先迅速降低，然后趋势逐渐平缓，对 2 条有不同降低趋势的曲线分别作其切线，2 条切线相交点对应的浓度即为鼠李糖脂钙的 CMC，其数值是 223.7 mgL1。达到此值后，鼠李糖脂钙可将水溶液表面张力由 70 mNm1左右降到 27 mNm1，实验室曾测得鼠李糖脂的 CMC 为 80 mgL1 27。虽然鼠李糖脂钙的 CMC 要高于鼠李糖脂，但仍具有较好的表面活性。此外，虽然鼠李糖脂钙的水溶性较差，但加入稀酸溶液很容易还原成鼠李糖脂，因此不会影响其应用。制备得到的鼠李糖脂钙，可以配制成洗衣粉，也可以和其他物质复配形成洗颜粉，用于皮肤的清洁。4 结 论 本研究以鼠李糖脂为原料制备得到粉末状的鼠李糖脂钙，并表征其化学结构、物理化学性质以及表面活性。结果发现，鼠李糖脂钙的主体结构与鼠李糖脂保持一致且具有良好的热稳定性，且也具有良好的表面活性，可将水溶液表面张力降至 27 mNm1左右。而且鼠李糖脂钙在常温下呈固态，方便长期保存与运输，为鼠李糖脂进入日化应用提供了全新的思路与方法。图 5 鼠李糖脂钙和干燥后鼠李糖脂的 SEM 图 Fig.5 SEM image of rhamnolipid calcium and dried rhamnolipid(a)rhamnolipid calcium 20 m(b)dried rhamnolipid 20 m 第 37 卷第 1 期 武青芳等：鼠李糖脂钙的制备及物理化学性质表征 85 参考文献：1 PAULINO B N,PESS A M G,MANO M C R,et al.Current status in biotechnological production and applications of glycolipid biosurfactants J.Applied Microbiology and Biotechnology,2016,100(24):10265-10293.2 CHONG H,LI Q.Microbial production of rhamnolipids:Opportunities,challenges and strategies J.Microbial Cell Factories,2017,16(1):1-12.3 DE ALMEIDA D G,SOARES DA SILVA R D C F,LUNA J M,et al.Biosurfactants:Promising molecules for petroleum biotechnology advances J.Frontiers in Microbiology,2016,7:1718.4 FARIAS C B B,ALMEIDA F C,SILVA I A,et al.Production of green surfactants:Market prospects J.Electronic Journal of Biotechnology,2021,51:28-39.5 MNIF I,ELLOUZ-CHAABOUNI S,GHRIBI D.Glycolipid biosurfactants,main classes,functional properties and related potential applications in environmental biotechnology J.Journal of Polymers and the Environment,2018,26(5):2192-2206.6 VAN BOGAERT I N,SOETAERT W.Biosurfactants M.S.l.:Springer,2011:179-210.7 SHIN K H,KIM K W,KIM J Y,et al.Rhamnolipid morphology and phenanthrene solubility at different pH values J.Journal of Environmental Quality,2008,37(2):509-514.8 SCHOTT H.Effect of chain length in homologous series of anionic surfactants on irritant action and toxicity J.Journal of Pharmaceutical Sciences,1973,62(2):341-343.9 LOTFABAD T B,ABASSI H,AHMADKHANIHA R,et al.Structural characterization of a rhamnolipid-type biosurfactant produced by Pseudomonas aeruginosa MR01:Enhancement of di-rhamnolipid proportion using gamma irradiation J.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces,2010,81(2):397-405.10 DE FREITAS FERREIRA J,VIEIRA E A,NITSCHKE M.The antibacterial activity of rhamnolipid biosurfactant is pH dependent J.Food Research International,2019,116:737-744.11 ANDR J,RADEMANN J,HOWE J,et al.Endotoxin-like properties of a rhamnolipid exotoxin from Burkholderia(Pseudomonas)plantarii:Immune cell stimulation and biophysical characterization J.Biological Chemistry,2006,387(3):301-310.12 M LLER F,H NZKE S,LUTHARDT W-O,et al.Rhamnolipids form drug-loaded nanoparticles for dermal drug delivery J.European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics,2017,116:31-37.13 PILJAC T,PILJAC G.Use of rhamnolipids in wound healing,treating burn shock,atherosclerosis,organ transplants,depression,schizophrenia and cosmetics:EP 99936031 P.2004-12-01.14 SAJNA K V,GOTTUMUKKALA L D,SUKUMARAN R K,et al.Industrial biorefineries&white biotechnology M.S.l.:Elsevier,2015:607-652.15 BHATTACHARYA B,GHOSH T K,DAS N.Application of bio-surfactants in cosmetics and pharmaceutical industry J.Scholars Academic Journal Pharmacy,2017,6(7):320-329.16 IN S M,DHOUHA G.Glycolipid biosurfactants:Potential related biomedical and biotechnological applications J.Carbohydrate Research,2015,416:59-69.17 张皓华.表面活性剂在化妆品中的应用现状与趋势 J.山东化工,2021,50(9):68-69.ZHANG H H.Application status and trend of surfactants in cosmetics J.Shandong Chemical Industry,2021,50(9):68-69.18 INVALLY K,SANCHETI A,JU L K.A new approach for downstream purification of rhamnolipid biosurfactants J.Food and Bioproducts Processing,2019,114:122-131.19 KEBBOUCHE-GANA S,GANA M,KHEMILI S,et al.Isolation and characterization of halophilic Archaea able to produce biosurfactants J.Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology,2009,36(5):727-738.20 李昊菁,易碧华,李天宝,等.湿法消解-AAs 测试油漆中的总铅含量 J.食品化工,2013,22(3):40-43.LI H J,YI B H,LI T B,et al.Wet digesting of the total content of heavy element Pb in paint by AAS J.Food Chemistry,2013,22(3):40-43.21 沙如意.鼠李糖脂的发酵、分离及应用研究 D.杭州:浙江大学,2012.SHA R Y.Study on fermentation,separation and application of rhamnolipids D.Hangzhou:Zhejiang University,2012.22 LOTFABAD T B,SHOURIAN M,ROOSTAAZAD R,et al.An efficient biosurfactant-producing bacterium Pseudomonas aeruginosa MR01,isolated from oil excavation areas in south of Iran J.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces,2009,69(2):183-193.23 LAN G,FAN Q,LIU Y,et al.Rhamnolipid production from waste cooking oil using Pseudomonas SWP-4 J.Biochemical Engineering Journal,2015,101:44-54.24 MORITA T,FUKUOKA T,KONISHI M,et al.Production of a novel glycolipid biosurfactant,mannosylmannitol lipid,by Pseudozyma parantarctica and its interfacial properties J.Applied Microbiology and Biotechnology,2009,83(6):1017-1025.25 SHARMA S,DATTA P,KUMAR B,et al.Production of novel rhamnolipids via biodegradation of waste cooking oil using Pseudomonas aeruginosa MTCC7815 J.Biodegradation,2019,30(4):301-312.26 潘俊丽.鼠李糖脂的分离提纯研究 D.杭州:浙江大学,2016.PAN J L.Separation and purification of rhamnolipid D.Hangzhou:Zhejiang University,2016.27 KONG S,SHEN C,LI Y,et al.Rhamnolipids sustain unchanged surface activities during decomposition in alkaline solutions J.ACS Omega,2021,6(24):15750-15755.