ANA检测策略.pdf

1EUROIMMUN抗核抗体（抗核抗体（ANA）实验室检测策略）实验室检测策略2EUROIMMUN抗核抗体检测策略抗核抗体检测策略患者有疑似自免疾病患者有疑似自免疾病?ANA 全抗原检测全抗原检测(IIFT,HEp-2 cells)-对患者进行跟踪监测对患者进行跟踪监测-增加检测项目（增加检测项目（ELISA，Blot）以提高灵敏度，如）以提高灵敏度，如dsDNA、SSA、Jo-1等。等。-进行特异性抗原检测（进行特异性抗原检测（ELISA,Blot）确定靶抗原及疾病特性）确定靶抗原及疾病特性3EUROIMMUN美国风湿学会(美国风湿学会(ACR)立场声明)立场声明 HEp-2 细胞包含大约细胞包含大约100 至至150 种自身抗原种自身抗原 其它初筛方法仅具有少量自身抗原其它初筛方法仅具有少量自身抗原(8-10)大约大约 35%SLE患者和患者和IFT-ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果建议：建议：IFT-ANA仍然为仍然为ANA检测的金标准检测的金标准!医院或商业诊断所应用其它医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它ANA检测方法与检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性比较具有同样或更高的敏感度和特异性.实验室在实验室在ANA报告当中必须注明报告当中必须注明ANA检测方法检测方法.EUROIMMUN4EUROIMMUNANA筛查:间接免疫荧光法(IFT)抗原谱完整 抗原谱完整(细胞核、细胞浆细胞核、细胞浆)检测 检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性 基质组合的金标准，具有很高的敏感性和特异性 基质组合:HEp-2细胞细胞+灵长类肝灵长类肝5EUROIMMUNHEp-2细胞+灵长类肝-确认确认IIF的荧光模型，如的荧光模型，如-肌动蛋白肌动蛋白-核糖体核糖体P蛋白蛋白-区分区分IIF的荧光模型，如：的荧光模型，如：-着丝点 核点着丝点 核点-SS-A/-B Sm/RNP Ku-还可获得其它结果，如：还可获得其它结果，如：-ANCA-肌内膜肌内膜/谷氨酰胺转移酶谷氨酰胺转移酶6EUROIMMUN确认IIF的荧光模型确认IIF的荧光模型HEp-2细胞灵长类肝肌动蛋白核糖体 P蛋白7EUROIMMUN区分IIF的荧光模型区分IIF的荧光模型HEp-2 细胞灵长类肝着丝点核点8EUROIMMUN区分IIF的荧光模型区分IIF的荧光模型HEp-2 细胞灵长类肝着丝点和核点9EUROIMMUN区分IIF的荧光模型区分IIF的荧光模型HEp-2细胞相似的颗粒型 很难区分Sm/RNPSS-A/SS-BKu10EUROIMMUN区分IIF的荧光模型区分IIF的荧光模型灵长类肝区分荧光模型 容易区分Sm/RNPSS-A/SS-BKu11EUROIMMUN区分IIF的荧光模型区分IIF的荧光模型Sm/RNPSS-A/SS-BKu灵长类肝HEp-2 细胞12EUROIMMUN灵长类肝:结果灵长类肝:结果肌内膜肌内膜pANCAEUROIMMUN13EUROIMMUNANA检测：分型实验ANA检测：分型实验?ELISA:-单特异单特异ELISA：适合大批量标本的检测：适合大批量标本的检测-ENA 谱：各种高纯抗原的组合谱：各种高纯抗原的组合?欧蒙斑点法欧蒙斑点法/欧蒙印迹法欧蒙印迹法:-ENA 谱：各种高纯抗原的组合谱：各种高纯抗原的组合?免疫印迹法免疫印迹法:-适合用于区分一些特殊抗体适合用于区分一些特殊抗体(如如 RNP：70K,A,C)-适合检测针对目前还不能纯化的抗原的抗体适合检测针对目前还不能纯化的抗原的抗体(如如Ku)14EUROIMMUNELISA:ENA谱谱15EUROIMMUN欧蒙斑点法:欧蒙斑点法:ENA谱ENA谱16EUROIMMUN欧蒙印迹法:欧蒙印迹法:ENA谱ENA谱17EUROIMMUN免疫印迹法：HEp-2细胞抗原提取物18EUROIMMUN欧蒙推荐的ANA稀释方案欧蒙推荐的ANA稀释方案19EUROIMMUN欧蒙ANA欧蒙ANAIIF稀释方案IIF稀释方案欧蒙欧蒙ANA间接免疫荧光法检测系统的起始稀释度为间接免疫荧光法检测系统的起始稀释度为1:100。即该检测系统的正常参考范围为。即该检测系统的正常参考范围为1:100。梯度稀释时的稀释因子为。梯度稀释时的稀释因子为1:3.2。推荐每个标本至少平行做两个稀释度：。推荐每个标本至少平行做两个稀释度：1:100和和1:1000。由于不同厂家。由于不同厂家ANA检测系统的起始稀释度和稀释因子不同，因而不同厂家的检测系统的起始稀释度和稀释因子不同，因而不同厂家的ANA滴度结果不能直接进行比较。滴度结果不能直接进行比较。20EUROIMMUN欧蒙实验室欧蒙实验室ANA IIF的研究结果的研究结果起始稀释度1:100时：正常人血清中ANA95以上为阴性，ANA阳性的抗体滴度明显低于风湿性疾病患者。多数风湿性疾病患者血清中ANA滴度大于1:100，但大于1:32000以上的抗体滴度也较少见。例数抗体滴度1:100风湿性疾病患者15000份正常人1:10000EUROIMMUN21EUROIMMUN欧蒙实验室推荐的欧蒙实验室推荐的ANA稀释方案稀释方案起始稀释度：起始稀释度：1:100 1:1,000抗体滴度：抗体滴度：1:100 1:1,0001:320 1:3,200 1:10,000报告结果抗体浓度范围：报告结果抗体浓度范围：（）（）EUROIMMUN22EUROIMMUN原因原因1:高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖抗Yo抗体(猴小脑)1:101:100抗表皮基底膜抗体(喉舌)1:101:100AMA(鼠肾)1:1001:1000pANCA(人中性粒细胞)1:11:10推荐一个标本平行作两个稀释度1:100和1:1000(1)23EUROIMMUN原因原因 2：在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖：在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖1:10001:1000ANA核均质型和着丝点型1:1001:100ANA 核均质型和核仁型推荐一个标本平行作两个稀释度1:100和1:1000(2)24EUROIMMUN推荐一个标本平行作两个稀释度1:100和1:1000(3)两个滴度平行检测：两个滴度平行检测：1:100和和1:1,000，通过一次实验，就可估计抗体的滴度，通过一次实验，就可估计抗体的滴度1:1,000ANA均质型（滴度1:10,000）1:1001:1,000ANA均质型（滴度1:1,000）1:10025EUROIMMUN推荐一个标本平行作两个稀释度1:100和1:1000(4)极强的阳性，高度提示存在相关疾病。强阳性，高度提示存在相关疾病中等阳性，提示可能存在相关疾病弱阳性，提示可能存在相关疾病。可疑阳性。临床意义极强的阳性，高度提示存在相关疾病。强阳性，高度提示存在相关疾病中等阳性，提示可能存在相关疾病弱阳性，提示可能存在相关疾病。可疑阳性。临床意义1:10000强强强强1:3200强强1:1000弱强弱强1:320强（）强（）1:100弱弱1:10001:100抗体滴度及强度各稀释度的反应性抗体滴度及强度各稀释度的反应性26EUROIMMUNANA结果报告及注意事项ANA结果报告及注意事项27EUROIMMUNANA结果报告ANA结果报告?报告报告ANA结果时，应包括如下几个方面：结果时，应包括如下几个方面：-定性结果：阴性或阳性。定性结果：阴性或阳性。-荧光模型：看到的所有模型均应报告。荧光模型：看到的所有模型均应报告。-每种荧光模型的滴度。每种荧光模型的滴度。-建议：如下一步的确认实验等。建议：如下一步的确认实验等。-所用检测系统的参考范围。所用检测系统的参考范围。28EUROIMMUNANA结果报告举例ANA结果报告举例1:1000核均质型：1:100核仁型：1:10001:100结果报告核均质型：1:100着丝点：1:100029EUROIMMUNANA检测的注意事项（1）ANA检测的注意事项（1）ANA的滴度结果非常重要的滴度结果非常重要-所用检测系统的起始稀释度（正常参考范围）只是一个统计值，如果以此为临界值，部分正常人也可出现阳性（所用检测系统的起始稀释度（正常参考范围）只是一个统计值，如果以此为临界值，部分正常人也可出现阳性（5-10%），在年龄大于），在年龄大于60岁的老年人中，阳性率更高，但滴度较低。岁的老年人中，阳性率更高，但滴度较低。-ANA滴度越高，与自身免疫性疾病的相关性就越大。滴度越高，与自身免疫性疾病的相关性就越大。30EUROIMMUNANA检测的注意事项（2）ANA检测的注意事项（2）ANA的荧光模型的荧光模型-荧光模型与相应靶抗原在细胞内的分布相关，可初步提供自身抗体针对的靶抗原信息，并可为下一步的确认实验提供指导作用。荧光模型与相应靶抗原在细胞内的分布相关，可初步提供自身抗体针对的靶抗原信息，并可为下一步的确认实验提供指导作用。-还可根据荧光模型结果判断确认实验结果的有效性，以排除非特异性反应。还可根据荧光模型结果判断确认实验结果的有效性，以排除非特异性反应。31EUROIMMUNANA检测的注意事项（3）ANA检测的注意事项（3）ANA检测流行病学资料的积累检测流行病学资料的积累-目前，目前，IIF检测检测ANA时，有很多荧光模型相对应的靶抗原尚不清楚，尤其是这些荧光模型的临床意义不明确，但随着人们对自身免疫病及其相关自身抗体研究的深入，越来越多的以前认为没有临床意义的抗体成为新的研究焦点。时，有很多荧光模型相对应的靶抗原尚不清楚，尤其是这些荧光模型的临床意义不明确，但随着人们对自身免疫病及其相关自身抗体研究的深入，越来越多的以前认为没有临床意义的抗体成为新的研究焦点。-对临床意义和靶抗原不明确的荧光模型也应向临床报告，以引起临床的重视。对临床意义和靶抗原不明确的荧光模型也应向临床报告，以引起临床的重视。32EUROIMMUN总结总结?间接免疫荧光法为检测间接免疫荧光法为检测ANA的标准方法（的标准方法（Hep-2和猴肝）。和猴肝）。IIF阳性时确认相应的靶抗原。阳性时确认相应的靶抗原。?起始稀释度为起始稀释度为1:100，推荐的稀释因子为，推荐的稀释因子为3.2。推荐每份标本至少平行做两个稀释度：。推荐每份标本至少平行做两个稀释度：1:100和和1:1000。?详细报告结果：模型、滴度、参考范围和一些适当的建议。详细报告结果：模型、滴度、参考范围和一些适当的建议。