一次性医疗卫生用品监测评价[宋江南].pdf

1一次性医疗卫生用品监测评价一次性医疗卫生用品监测评价口腔诊疗器械的消毒监测评价口腔诊疗器械的消毒监测评价医院消毒供应中心管理规范医院消毒供应中心管理规范一次性医疗卫生用品监测评价一次性医疗卫生用品监测评价口腔诊疗器械的消毒监测评价口腔诊疗器械的消毒监测评价医院消毒供应中心管理规范医院消毒供应中心管理规范医院消毒供应中医院消毒供应中心心清洗消毒清洗消毒及灭及灭菌医院消毒供应中菌医院消毒供应中心心清洗消毒清洗消毒及灭及灭菌菌医院消毒供应中清洗消毒菌医院消毒供应中清洗消毒菌医院消毒供应中清洗消毒菌医院消毒供应中清洗消毒菌技术操作规范技术操作规范技术操作规范技术操作规范湖南省疾病预防控制中心湖南省疾病预防控制中心宋江南宋江南电话号码：电话号码：073107318430597784305977目目录录目目录录 一次性医疗用品无菌检验试验一次性医疗用品无菌检验试验一次性医疗用品无菌检验试验一次性医疗用品无菌检验试验 一次性医用输液、输血、注射器具一次性医用输液、输血、注射器具细菌内毒素检验方法细菌内毒素检验方法一次性医用输液、输血、注射器具一次性医用输液、输血、注射器具细菌内毒素检验方法细菌内毒素检验方法 一次性使用卫生用品检测方法一次性使用卫生用品检测方法一次性使用卫生用品检测方法一次性使用卫生用品检测方法 口腔诊疗器械灭菌效果监测评价口腔诊疗器械灭菌效果监测评价口腔诊疗器械灭菌效果监测评价口腔诊疗器械灭菌效果监测评价 医院消毒供应中心管理规范医院消毒供应中心管理规范医院消毒供应中心管理规范医院消毒供应中心管理规范 医院消毒供应中心清洗消毒及灭菌医院消毒供应中心清洗消毒及灭菌技术操作规范技术操作规范医院消毒供应中心清洗消毒及灭菌医院消毒供应中心清洗消毒及灭菌技术操作规范技术操作规范第一部分第一部分第一部分第一部分一次性医疗用品无菌检验试验一次性医疗用品无菌检验试验一次性医疗用品无菌检验试验一次性医疗用品无菌检验试验2目的：目的：目的：目的：检测医疗用品进行灭菌处理检测医疗用品进行灭菌处理后是否达到无菌标准后是否达到无菌标准后是否达到无菌标准。后是否达到无菌标准。试验条件：试验条件：试验条件：试验条件：100100级洁净室或级洁净室或100100级超净级超净工作台工作台工作台。工作台。试验器材：试验器材：试验器材：试验器材：需氧需氧-厌氧菌培养基；无菌试厌氧菌培养基；无菌试验用真菌培养基无菌检验验用真菌培养基无菌检验验用真菌培养基；无菌检验验用真菌培养基；无菌检验用洗脱液。用洗脱液。3试验前准备：试验前准备：试验前准备：试验前准备：样品最小销售包装完整无破样品最小销售包装完整无破损检测前不得开启损检测前不得开启损，检测前不得开启。损，检测前不得开启。样品数量：样品数量：样品数量：样品数量：不同不同3 3个批号的产品个批号的产品，每批号每批号随机抽随机抽3 3个大包装个大包装，每个大包每个大包装中随机抽至少装中随机抽至少8 8 2828个最小个最小装中随机抽至少装中随机抽至少8 8-2828个最小个最小销售包装作为样品销售包装作为样品，1 1/4 4用于用于检测检测，1 1/4 4用于留样用于留样，2 2/4 4用用于复测于复测。操作程序操作程序操作程序操作程序（一）（一）（一）（一）穿戴无菌隔离衣穿戴无菌隔离衣、帽帽、口罩口罩、鞋后进入无菌室鞋后进入无菌室，用用7070%酒精酒精棉球消毒双手棉球消毒双手棉球消毒双手棉球消毒双手。将样品外包装擦拭消毒后置将样品外包装擦拭消毒后置于试验台上于试验台上。4操作程序操作程序操作程序操作程序（二）（二）（二）（二）取需氧取需氧-厌氧菌培养管与真菌厌氧菌培养管与真菌培养管各培养管各1 1支支，打开盖打开盖（塞塞）置于试验台上置于试验台上直至样品检直至样品检置于试验台上置于试验台上，直至样品检直至样品检测完测完。盖上盖盖上盖（塞塞）与样品与样品一起培养一起培养，作为作为(环境环境）阴性阴性对照对照。操作程序操作程序（三）（三）操作程序操作程序（三）（三）敷料敷料、手术衣等非管道类样品手术衣等非管道类样品，按按无菌操作要求取无菌操作要求取2 2个包装内的样品个包装内的样品，于不同部位剪取约于不同部位剪取约1 1.0 0cmcm3 3.0 0cmcm大大小的样片小的样片2121片片，接种需氧接种需氧-厌氧菌培厌氧菌培养管养管5 5管与真菌培养管管与真菌培养管2 2管管，每管接每管接种种3 3片样片片样片。在其中一加有样品的需在其中一加有样品的需氧氧-厌氧菌培养管中接种厌氧菌培养管中接种1 1.0 0mlml金黄金黄色葡萄球菌稀释液作为阳性对照色葡萄球菌稀释液作为阳性对照。样片样片 21 片片 每管每管 3 片（共片（共 15 片）片）每管每管 3 片（共片（共 6 片片）1.0ml金黄色葡萄球菌稀释液金黄色葡萄球菌稀释液(阳阳阴阴 性性 对对 照照 环环 境境 阴阴 性性 对对 照照 需氧厌氧菌管需氧厌氧菌管 真菌培养管真菌培养管 需氧厌氧菌管需氧厌氧菌管 真菌培养管真菌培养管 性对照性对照)需氧厌氧菌管需氧厌氧菌管 需氧厌氧菌管需氧厌氧菌管 需氧厌氧菌管需氧厌氧菌管 需氧厌氧菌管需氧厌氧菌管 真菌培养管真菌培养管 需氧厌氧菌管需氧厌氧菌管 真菌培养管真菌培养管 5操作程序操作程序操作程序操作程序（四）（四）（四）（四）注射针注射针、针灸针针灸针、缝合针缝合针、棉签等样品棉签等样品，在所选在所选7 7个最小个最小销售包装内样品中销售包装内样品中，各选各选1 1支支为为1 1个样本个样本，分别接种于需氧分别接种于需氧为为 个样本个样本，分别接种于需氧分别接种于需氧-厌氧菌培养管厌氧菌培养管5 5管与真菌培管与真菌培养管养管2 2管管，在其中一加有样品在其中一加有样品的需氧的需氧-厌氧菌培养管中接种厌氧菌培养管中接种1 1.0 0mlml金黄色葡萄球菌稀释液金黄色葡萄球菌稀释液作为阳性对照作为阳性对照。操作程序操作程序操作程序操作程序（五）（五）（五）（五）输液输液（血血）器等导管类样品器等导管类样品，在所选在所选7 7个最小销售包装内样品中个最小销售包装内样品中，各选各选1 1支支为为1 1个样本个样本，各以无菌注射器吸取各以无菌注射器吸取5 5.0 0mlml1010.0 0mlml无菌检验用洗脱液注无菌检验用洗脱液注入管内往返摇荡入管内往返摇荡5 5次次，将每个样本洗将每个样本洗脱液脱液1 1.0 0mlml分别接种于需氧分别接种于需氧-厌氧菌培厌氧菌培养管养管5 5管与真菌培养管管与真菌培养管2 2管管，在其中一在其中一加有样品的需氧加有样品的需氧-厌氧菌培养管中接厌氧菌培养管中接种种1 1.0 0mlml金黄色葡萄球菌稀释液作为金黄色葡萄球菌稀释液作为阳性对照阳性对照。操作程序操作程序操作程序操作程序（六）（六）（六）（六）注射器样品注射器样品，在所选在所选7 7个最小销售包个最小销售包装内样品中装内样品中，各选各选1 1支为支为1 1个样本个样本，各各吸取吸取2 2.0 0mlml1010.0 0mlml无菌检验用洗脱无菌检验用洗脱液液，将芯杆抽取至全程刻度将芯杆抽取至全程刻度，振摇振摇5 5次次将每个样本洗脱液将每个样本洗脱液分分次次，将每个样本洗脱液将每个样本洗脱液0 0.5 51 1.0 0mlml分分别接种于需氧别接种于需氧-厌氧菌培养管厌氧菌培养管5 5管与真管与真菌培养管菌培养管2 2管管，在其中一加有样品的在其中一加有样品的需氧需氧-厌氧菌培养管中接种厌氧菌培养管中接种1 1.0 0mlml金黄金黄色葡萄球菌稀释液作为阳性对照色葡萄球菌稀释液作为阳性对照。6操作程序操作程序操作程序操作程序（七）（七）（七）（七）不能用上述方法处理的不能用上述方法处理的，用无菌棉拭用无菌棉拭子 涂 抹 采 样子 涂 抹 采 样，每 个 样 本 不 少 于每 个 样 本 不 少 于5 5.0 0cmcm5 5.0 0cmcm.。采样后将棉签采样采样后将棉签采样端直接剪入培养管中端直接剪入培养管中，每次检测每次检测7 7个个样本样本，分别接种于需氧分别接种于需氧-厌氧菌培养厌氧菌培养管管5 5管与真菌培养管管与真菌培养管2 2管管，在其中一加在其中一加有采样棉拭的需氧有采样棉拭的需氧-厌氧菌培养管中厌氧菌培养管中接种接种1 1.0 0mlml金黄色葡萄球菌稀释液作金黄色葡萄球菌稀释液作为阳性对照为阳性对照。操作程序操作程序操作程序操作程序（八）（八）（八）（八）将上述接种样本洗脱液或样本洗脱液将上述接种样本洗脱液或样本洗脱液、采样棉拭的需氧采样棉拭的需氧-厌氧菌培养管厌氧菌培养管、阳阳性对照管与阴性对照管性对照管与阴性对照管，同时置于同时置于3737恒温培养恒温培养5 5天天，观察结果观察结果。将上述接种样本洗脱液或样本洗脱液将上述接种样本洗脱液或样本洗脱液、采样棉拭的真菌培养管采样棉拭的真菌培养管、阳性对照管阳性对照管与阴性对照管与阴性对照管，同时置于同时置于2525恒温培恒温培养养7 7天天，观察结果观察结果。结果评价：结果评价：结果评价：结果评价：接种样本洗脱液或样本洗脱液、接种样本洗脱液或样本洗脱液、采样棉拭的需氧采样棉拭的需氧-厌氧菌培养管及厌氧菌培养管及采样棉拭的真菌培养管均无菌生采样棉拭的真菌培养管均无菌生长，阳性对照管与阴性对照管成长，阳性对照管与阴性对照管成立样品为合格接种样本洗脱立样品为合格接种样本洗脱立，样品为合格。接种样本洗脱立，样品为合格。接种样本洗脱液或样本洗脱液、采样棉拭的需液或样本洗脱液、采样棉拭的需氧氧-厌氧菌培养管及采样棉拭的真厌氧菌培养管及采样棉拭的真菌培养管中有任何一管有菌生长，菌培养管中有任何一管有菌生长，复测。复测。7第二部分第二部分一一次性医用输液次性医用输液输血输血注注一一次性医用输液次性医用输液输血输血注注次性医用输液次性医用输液、输血输血、注注次性医用输液次性医用输液、输血输血、注注射器具细菌内毒素检验方法射器具细菌内毒素检验方法射器具细菌内毒素检验方法射器具细菌内毒素检验方法机理及适用范围：机理及适用范围：机理及适用范围：机理及适用范围：用鲎试剂用鲎试剂（TALTAL）与细菌内毒素与细菌内毒素(Endotoxin)(Endotoxin)产生凝集反应的机理产生凝集反应的机理，检测供试品的样品中或其表面可检测供试品的样品中或其表面可能存在的内毒素能存在的内毒素浓度浓度，以判断供以判断供能存在内毒素能存在内毒素度度判断供判断供试品中内毒素试品中内毒素限量限量是否符合规定是否符合规定的一种方法的一种方法。用以代替家兔法对用以代替家兔法对供试品进行热原供试品进行热原初试初试。适用于一适用于一次性使用输液器次性使用输液器、输血器输血器。其他其他产品产品(透析水透析水）可参照使用可参照使用。试验条件：试验条件：试验条件：试验条件：100100级洁净室或级洁净室或100100级超净级超净工作台工作台、电热干燥箱电热干燥箱、恒恒温水浴温水浴。8试剂：试剂：试剂：试剂：细菌内毒素工作标准品：用于标定鲎试细菌内毒素工作标准品：用于标定鲎试剂灵敏度剂灵敏度（在规定条件下能检测出内毒在规定条件下能检测出内毒素标准液或供试品溶液中的最低内毒素素标准液或供试品溶液中的最低内毒素浓度浓度，用用EU/mlEU/ml表示表示）和试验中阳性对照和试验中阳性对照(低于低于8 8冷藏冷藏)。鲎试剂鲎试剂（TALTAL）：常用灵敏度为：常用灵敏度为0 0.2525EU/mlEU/ml、0 0.5 5 EU/mlEU/ml、1 1.0 0EU/mlEU/ml，常用规常用规格为格为0 0.1 1 mlml、0 0.5 5mlml、1 1.0 0 mlml。无热原水：内毒素含量小于无热原水：内毒素含量小于0 0.0505EUEU/ml/ml（注射用生理盐水注射用生理盐水）。鲎试剂溶解水：内毒素含量小于鲎试剂溶解水：内毒素含量小于0.03EU/ml0.03EU/ml。试验前准备：试验前准备：试验前准备：试验前准备：试验前应核对使用批号鲎试剂试验前应核对使用批号鲎试剂的灵敏度的灵敏度（灵敏度复核按国家灵敏度复核按国家批批检定原则检定批批检定原则检定），细菌内细菌内毒素工作标准品毒素工作标准品、鲎试剂溶解鲎试剂溶解水和无热原水应符合规定水和无热原水应符合规定（有有效期效期、包装情况包装情况）。试验方法试验方法试验方法试验方法（一）（一）（一）（一）供试品数量供试品数量：同批号至少同批号至少3 3个单位供试品个单位供试品同一批号至少同一批号至少3 3个单位供试品个单位供试品，一般一般5 5个单位供试品个单位供试品。9试验方法试验方法试验方法试验方法（二）（二）（二）（二）供试液供试液（样液样液）制备制备在无菌条件下，每套输液器内腔注入在无菌条件下，每套输液器内腔注入5 5-10ml10ml无热原水，输血器内腔注入无热原水，输血器内腔注入15ml15ml无无热原水，反复荡洗热原水，反复荡洗5 5次后两端（烧灼夹闭）次后两端（烧灼夹闭）密封，置密封，置37371 1恒温箱中保温恒温箱中保温2h2h，取出，取出后将供试液汇集至一无热原带盖的具塞玻后将供试液汇集至一无热原带盖的具塞玻璃容器内或带盖的灭菌平皿内（供试液贮璃容器内或带盖的灭菌平皿内（供试液贮存应不超过存应不超过2h2h）。）。输液器输液器+(5+(510ml)10ml)无热原水无热原水372h372h样液样液输液器输液器+(5+(510ml)10ml)无热原水无热原水372h372h样液样液试验步骤试验步骤试验步骤试验步骤（一）（一）（一）（一）将 细 菌 内 毒 素 工 作 标 准 品将 细 菌 内 毒 素 工 作 标 准 品 1 1 支支（1010Eu/mlEu/ml），加入加入1 1mlml鲎试剂溶解鲎试剂溶解水溶解水溶解，震荡摇匀后震荡摇匀后，取取0 0.5 5mlml加加水溶解水溶解震荡摇匀后震荡摇匀后取取加加入入4 4.5 5mlml无热原水无热原水，震荡摇匀震荡摇匀，制制成标准品成标准品（1 1.0 0 Eu/mlEu/ml）（阳性对阳性对照照）试验步骤试验步骤试验步骤试验步骤（二）（二）（二）（二）取鲎试剂取鲎试剂（0 0.5 5EU/mlEU/ml）6 6支支（阳性对阳性对照管照管、阴性对照管阴性对照管、样品管各样品管各2 2支支），各加入各加入100100ulul鲎试剂溶解水溶解鲎试剂溶解水溶解。阴阴性对照管性对照管2 2支各加入支各加入100100ulul无热原水无热原水，阳性对照管阳性对照管 支各加入支各加入内毒素内毒素阳性对照管阳性对照管2 2支各加入支各加入100100ulul内毒素工内毒素工作标准品稀释液作标准品稀释液，供试品管供试品管2 2支各加支各加入入100100ulul供试液供试液（样液样液），封闭管口封闭管口，震荡混匀试管内容物震荡混匀试管内容物，垂直放入垂直放入37371 1水浴中保温水浴中保温60602 2minmin，轻轻轻轻取出取出，观察结果观察结果。10 鲎试剂鲎试剂2 2支支（阴性对照管阴性对照管）鲎试剂鲎试剂2 2支支（阴性对照管阴性对照管）+各各100100ulul鲎试剂溶解水鲎试剂溶解水+各各100100ulul无热原水无热原水37371 1h h；+各各100100ulul鲎试剂溶解水鲎试剂溶解水+各各100100ulul无热原水无热原水37371 1h h；鲎试剂鲎试剂2 2支支（阳性对照管阳性对照管）鲎试剂鲎试剂2 2支支（阳性对照管阳性对照管）+各各100100ulul鲎试剂溶解水鲎试剂溶解水+各各100100ulul标准品稀释液标准品稀释液37371 1h h；+各各100100ulul鲎试剂溶解水鲎试剂溶解水+各各100100ulul标准品稀释液标准品稀释液37371 1h h；鲎试剂鲎试剂2 2支支（样品管样品管）鲎试剂鲎试剂2 2支支（样品管样品管）+各各100100ulul鲎试鲎试剂溶解水剂溶解水+各各100100ulul样液样液37371 1h h。+各各100100ulul鲎试鲎试剂溶解水剂溶解水+各各100100ulul样液样液37371 1h h。结果判定结果判定（一）（一）结果判定结果判定（一）（一）1 1、将试管缓慢倒转将试管缓慢倒转180180，管内容物呈坚管内容物呈坚实凝胶者为阳性实凝胶者为阳性，记录为记录为（+），不呈凝不呈凝胶状或虽呈凝胶状但不能保持完整者为阴胶状或虽呈凝胶状但不能保持完整者为阴性性，记录为记录为（-）。2 2、供试品供试品2 2管均为管均为（-）性时性时，判定产品判定产品供试供试管均为管均为性时性时判定产判定产符合本法规定符合本法规定，不再进行热原试验不再进行热原试验。3 3、供试品供试品2 2管均为（管均为（+）或有）或有1 1管为（管为（+）时，用无热原水将供试液时，用无热原水将供试液1212等比（等比（1 12 2，1 14 4，1 18 8，1 11616）稀释按上述方法重试，稀释按上述方法重试，供试品操作供试品操作4 4管。如管。如4 4管均为（管均为（-），判定产），判定产品符合本法规定，不再进行热原试验。品符合本法规定，不再进行热原试验。结果判定结果判定（二）（二）结果判定结果判定（二）（二）4 4、重试供试品重试供试品4 4管中有管中有1 1管为管为（+）时时，判定产品不符合本法规定判定产品不符合本法规定，应进行热原试验应进行热原试验，并根据试验结并根据试验结果判定果判定。5 5、供试品细菌内毒素限量应不供试品细菌内毒素限量应不超过超过0 0.5 5 EU/mlEU/ml。6 6、阳性对照阳性对照2 2管应均为管应均为（+），阴性对照阴性对照2 2管应均为管应均为（-），否则否则试验无效试验无效。11第三部分第三部分第三部分第三部分一次性使用卫生用品一次性使用卫生用品 检检一次性使用卫生用品一次性使用卫生用品 检检测方法测方法测方法测方法一次性使用卫生用品定义：一次性使用卫生用品定义：一次性使用卫生用品定义：一次性使用卫生用品定义：一次性使用卫生用品即使用一次后即丢一次性使用卫生用品即使用一次后即丢弃的、与人体直接或间接接触的、并为弃的、与人体直接或间接接触的、并为达到人体生理卫生或卫生保健（抗菌或达到人体生理卫生或卫生保健（抗菌或抑菌）目的而使用的各种日常生活用品，抑菌）目的而使用的各种日常生活用品，产品性状可以是固体也可以是液体。产品性状可以是固体也可以是液体。例例如，一次性使用手套或指套（不包括医如，一次性使用手套或指套（不包括医用手套或指套）、纸巾、湿巾、卫生湿用手套或指套）、纸巾、湿巾、卫生湿巾、电话膜、帽子、口罩、内裤、妇女巾、电话膜、帽子、口罩、内裤、妇女经期卫生用品（包括卫生护垫）、尿布经期卫生用品（包括卫生护垫）、尿布等排泄物卫生用品（不包括皱纹卫生纸等排泄物卫生用品（不包括皱纹卫生纸等厕所用纸）、避孕套等，称为等厕所用纸）、避孕套等，称为“卫生卫生用品用品”。第一节第一节第一节第一节产品卫生指标产品卫生指标12产品卫生指标产品卫生指标产品卫生指标产品卫生指标 外观必须整洁，符合该卫生外观必须整洁，符合该卫生用品固有性状，不得有异常用品固有性状，不得有异常气味与异物。气味与异物。不得对皮肤与粘膜产生不良不得对皮肤与粘膜产生不良 不得对皮肤与粘膜产生不良不得对皮肤与粘膜产生不良刺激与过敏反应及其他损害刺激与过敏反应及其他损害作用。作用。产品须符合表产品须符合表1 1中微生物学指中微生物学指标。标。微生物指标 产品种类 初始污染菌 cfu/g 细菌 菌落总数 cfu/g 或cfu/mL 大肠菌群 致病性化脓菌 真菌 菌落总数 cfu/g 或 cfu/mL 手套或指套、纸巾、湿巾、200 不得检出 不得检出 100 微生物指标表格（一）微生物指标表格（一）微生物指标表格（一）微生物指标表格（一）帽子内裤、电话膜 .抗菌（或抑菌）液体产品 200 不得检出 不得检出 100 卫生湿巾 .20 不得检出 不得检出 不得检出 口罩 .普通级 .200 不得检出 不得检出 100 消毒级 10 000 20 不得检出 不得检出 不得检出 续上表 妇女经期卫生用品 .普通级 .200 不得检出 不得检出 100 消毒级 10 000 20 不得检出 不得检出 不得检出 尿布等排泄物卫生用品 .普通级 .200 不得检出 不得检出 100 微生物指标表格（二）微生物指标表格（二）消毒级 10 000 20 不得检出 不得检出 不得检出 避孕套 .20 不得检出 不得检出 不得检出 1)如初始污染菌超过表内数值，应相应提高杀灭指数，使达到本标准规定的细菌与真菌限值。2)致病性化脓菌指绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌与溶血性链球菌。13注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：卫生湿巾除必须达到上表中的微生物学标准外，卫生湿巾除必须达到上表中的微生物学标准外，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭率须对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭率须9090，如需标明对真菌的作用，还须对白色念珠菌的杀如需标明对真菌的作用，还须对白色念珠菌的杀灭率灭率9090，其杀菌作用在室温下至少须保持，其杀菌作用在室温下至少须保持1 1年。年。抗菌（或抑菌）产品除必须达到上表中的同类同抗菌（或抑菌）产品除必须达到上表中的同类同抗菌（或抑菌）产品除必须达到上表中的同类同抗菌（或抑菌）产品除必须达到上表中的同类同级产品微生物学标准外，对大肠杆菌和金黄色葡级产品微生物学标准外，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率须萄球菌的抑菌率须5050（溶出性）或（溶出性）或2626（非溶出性），如需标明对真菌的作用，还须白（非溶出性），如需标明对真菌的作用，还须白色念珠菌的抑菌率色念珠菌的抑菌率5050（溶出性）或（溶出性）或2626（非溶出性），其抑菌作用在室温下至少须保持（非溶出性），其抑菌作用在室温下至少须保持1 1年。年。任何经环氧乙烷消毒的卫生用品出厂时，环氧乙任何经环氧乙烷消毒的卫生用品出厂时，环氧乙烷残留量必须烷残留量必须250g/g250g/g。第二节第二节第二节第二节产微生物检测方法产微生物检测方法产品微生物检测方法产品微生物检测方法一、总述一、总述一、总述一、总述14（一）产品采集：（一）产品采集：（一）产品采集：（一）产品采集：于同一批号的三个运输包装于同一批号的三个运输包装中至少抽取中至少抽取1212个最小销售包个最小销售包装样品，装样品，1 14 4样品用于检测，样品用于检测，1 14 4样品用于留样，另样品用于留样，另1 12 2样品（可就地封存）必要时样品（可就地封存）必要时用于复检。用于复检。抽样的最小销售抽样的最小销售包装不应有破裂，检验前不包装不应有破裂，检验前不得启开。得启开。（二）样品处理（二）样品处理：（二）样品处理（二）样品处理：在在100100级净化条件下用无菌方法打开用于级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少检测的至少3 3个包装，从每个包装中取样，个包装，从每个包装中取样，准确称取准确称取10g10g1g1g样品，剪碎后加入到样品，剪碎后加入到200mL200mL灭菌生理盐水中，充分混匀，得到灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。液体产品用原液直接一个生理盐水样液。液体产品用原液直接个生理盐水样液。液体产品用原液直接个生理盐水样液。液体产品用原液直接做样液。做样液。如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次50mL50mL递增，直到能吸出足够测试用样液。递增，直到能吸出足够测试用样液。在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度。调整稀释度。（三）（三）细菌菌落总数与细菌菌落总数与（三）（三）细菌菌落总数与细菌菌落总数与初始污染菌检测方法初始污染菌检测方法初始污染菌检测方法初始污染菌检测方法初始污染菌检测方法初始污染菌检测方法初始污染菌检测方法初始污染菌检测方法15操作步骤：操作步骤：操作步骤：操作步骤：待上述生理盐水样液自然沉降后取待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数。共接种上清液作菌落计数。共接种5 5个平个平皿，每个平皿中加入皿，每个平皿中加入1.0mL1.0mL样液，样液，每个平中加每个平中加样液样液然后接种营养琼脂培养基，置然后接种营养琼脂培养基，置35352 2 培养培养48h48h后，计算平板后，计算平板上的菌落数。上的菌落数。结果报告结果报告：结果报告结果报告：菌落呈片状生长的平板不宜采用；计数符合要菌落呈片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按下式计算结果：求的平板上的菌落，按下式计算结果：X X1 1 A AK/5K/5 式中：式中：X X1 1细菌菌落总数，细菌菌落总数，cfu/gcfu/g或或cfu/mLcfu/mL；A5A5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数 A5A5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数；块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数；KK稀释度。稀释度。当菌落数在当菌落数在100100以内，按实有数报告，大于以内，按实有数报告，大于100100时采用二位有效数字。时采用二位有效数字。如果样品菌落总数超过本标准的规定，进行复如果样品菌落总数超过本标准的规定，进行复检和结果报告。检和结果报告。复检方法复检方法复检方法复检方法 将留存的复检样品依前法复测将留存的复检样品依前法复测2 2次，次，2 2次结果平均值都达到本标次结果平均值都达到本标准的规定则判定被检样品合准的规定则判定被检样品合准的规定，则判定被检样品合准的规定，则判定被检样品合格；其中有任何格；其中有任何1 1次结果平均值次结果平均值超过本标准规定，则判定被检超过本标准规定，则判定被检样品不合格。样品不合格。16二、大肠菌群检测方法二、大肠菌群检测方法操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 取样液取样液5mL5mL接种接种50mL50mL乳糖胆盐发酵管，置乳糖胆盐发酵管，置35352 2 培养培养24h24h，如不产酸也不产气，则报，如不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。告为大肠菌群阴性。如产酸产气，则划线接种伊红美蓝琼脂平板，如产酸产气，则划线接种伊红美蓝琼脂平板，置置353522培养培养181824h24h，观察平板上菌落形，观察平板上菌落形态典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色圆形态典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色圆形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。红色，中心较深的菌落。取疑似大肠菌落取疑似大肠菌落1 12 2个作革兰氏染色镜检，同个作革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置时接种乳糖发酵管，置353522培养培养24h24h，观，观察产气情况。察产气情况。结果报告结果报告结果报告结果报告 凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落美蓝平板上有典型大肠菌落美蓝平板上有典型大肠菌落，美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。可报告被检样品检出大肠杆菌。17 样液样液乳糖胆盐发酵管产酸产气乳糖胆盐发酵管产酸产气伊红美蓝琼脂平板分离伊红美蓝琼脂平板分离 371824h 金属光泽菌落金属光泽菌落 革兰氏染色阴性杆菌革兰氏染色阴性杆菌 乳糖胆盐发酵管产气乳糖胆盐发酵管产气 大肠杆菌大肠杆菌 三、绿脓杆菌检测方法三、绿脓杆菌检测方法操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤(一一一一)取样液取样液5mL5mL，加入到，加入到50mLSCDLP50mLSCDLP培养培养液中，充分混匀，置液中，充分混匀，置353522培养培养181824 h24 h。如有绿脓杆菌生长，培养液表面。如有绿脓杆菌生长，培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色从培养液的薄菌膜处挑取培养蓝绿色从培养液的薄菌膜处挑取培养蓝绿色。从培养液的薄菌膜处挑取培养蓝绿色。从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置平板，置353522培养培养181824h24h，观察，观察菌落特征。绿脓杆菌在此培养基上生长菌落特征。绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不长。培养基略带粉红色，其他菌不长。18操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤(二二二二)取可疑菌落涂片作革兰氏染色，镜检取可疑菌落涂片作革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性菌者应进行下列试验：为革兰氏阴性菌者应进行下列试验：氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内用无菌玻棒挑纸片放在灭菌平皿内用无菌玻棒挑纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的上滴加一滴新配制的1 1二甲基对苯二甲基对苯二胺试液，二胺试液，30s30s内出现粉红色或紫红内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。阴性。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤(三三三三)绿脓菌素试验：取绿脓菌素试验：取2 23 3个可疑菌落，个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，面，353522培养培养24h24h，加入三氯甲，加入三氯甲烷烷3 35mL5mL，充分振荡使培养物中可能，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入入1mol/L1mol/L的盐酸的盐酸1mL1mL，振荡后静置片，振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。阳性，表示有绿脓菌素存在。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤(四四四四)硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中，置纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中，置353522培养培养24h24h，培养基小倒管中有气，培养基小倒管中有气者即为阳性。者即为阳性。明胶液化试验：取可疑菌落纯培养明胶液化试验：取可疑菌落纯培养接种胶养接种胶养物，穿刺接种在明胶培养基内，置物，穿刺接种在明胶培养基内，置353522培养培养24h24h，取出放于，取出放于4 41010，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。4242生长试验：挑取可疑培养物，接生长试验：挑取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置种在普通琼脂斜面培养基上，置4242培养培养242448h48h，有绿脓杆菌生长为阳性。，有绿脓杆菌生长为阳性。19结果报告结果报告结果报告结果报告 被检样品经增菌分离培养后，证被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓杆菌试验均为阳性者即可报告被检杆菌试验均为阳性者即可报告被检杆菌试验均为阳性者，即可报告被检杆菌试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出绿脓杆菌。如绿脓菌素试样品中检出绿脓杆菌。如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和和4242生长试验三者皆为阳性时，仍生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出绿脓杆菌。可报告被检样品中检出绿脓杆菌。样液样液 SCDLP 培养基培养基 增菌培养增菌培养 产绿色素产绿色素 十六烷三甲基溴化铵平板分离十六烷三甲基溴化铵平板分离 371824h 革兰氏染色阴性杆菌革兰氏染色阴性杆菌 氧化酶试验、绿脓杆菌素试验均为阳性氧化酶试验、绿脓杆菌素试验均为阳性 绿脓杆菌绿脓杆菌 四、金黄色葡萄球菌检测四、金黄色葡萄球菌检测方法方法方法方法20操作步骤（一操作步骤（一)操作步骤（一操作步骤（一)取样液取样液5mL5mL，加入到，加入到 50mLSCDLP50mLSCDLP培培养液中，充分混匀，置养液中，充分混匀，置353522培养培养24h24h。自上述增菌液中取自上述增菌液中取1 12 2接种环，接种环，自上述增菌液中取自上述增菌液中取接种环，接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置划线接种在血琼脂培养基上，置35352 2培养培养242448h48h。在血琼。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。滑，周围有溶血圈。操作步骤（二操作步骤（二)操作步骤（二操作步骤（二)挑取典型菌落，涂片作革兰氏染挑取典型菌落，涂片作革兰氏染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄状，无氏阳性球菌，排列成葡萄状，无芽胞与荚膜。镜检符合上述情况，芽胞与荚膜。镜检符合上述情况，应进行下列试验：应进行下列试验：甘露醇发酵试验：取上述菌落接甘露醇发酵试验：取上述菌落接种甘露醇培养液，置种甘露醇培养液，置353522培培养养24h24h，发酵甘露醇产酸者为阳性。，发酵甘露醇产酸者为阳性。操作步骤（三操作步骤（三)操作步骤（三操作步骤（三)血浆凝固酶试验：玻片法：取清洁干燥载玻血浆凝固酶试验：玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5 5 minmin如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均无凝固仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均无凝固则为阴性凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象再则为阴性凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象再则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验；试管法：吸取进行试管凝固酶试验；试管法：吸取1 14 4新鲜血新鲜血浆浆0.5mL0.5mL，放灭菌小试管中，加入等量待检菌，放灭菌小试管中，加入等量待检菌24 24 h h肉汤培养物肉汤培养物0.5mL0.5mL。混匀，放。混匀，放35352 2温箱或温箱或水浴中，每半小时观察一次，水浴中，每半小时观察一次，24 h24 h之内呈现凝块之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各株肉汤培养物各0.5mL0.5mL作阳性与阴性对照。作阳性与阴性对照。21结果报告结果报告结果报告结果报告 凡在琼脂平板上有可疑菌凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰氏阳性落生长，镜检为革兰氏阳性葡萄球菌并能发酵甘露醇葡萄球菌并能发酵甘露醇葡萄球菌，并能发酵甘露醇葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。黄色葡萄球菌。样液样液 SCDLP 培养基增菌培养培养基增菌培养 血平板分离血平板分离 372448 h 菌落周围有溶血圈菌落周围有溶血圈 革兰氏染色阳性球菌革兰氏染色阳性球菌呈葡萄状排列呈葡萄状排列无芽胞荚膜无芽胞荚膜革兰氏染色阳性球菌革兰氏染色阳性球菌、呈葡萄状排列呈葡萄状排列、无芽胞荚膜无芽胞荚膜 血浆凝固酶试验、甘露醇阳性试验均为阳性血浆凝固酶试验、甘露醇阳性试验均为阳性 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 五、溶血性链球菌检测五、溶血性链球菌检测方法方法方法方法22操作步骤操作步骤（一）（一）操作步骤操作步骤（一）（一）取样液取样液5mL5mL加入到加入到50mL50mL葡萄葡萄糖肉汤，糖肉汤，353522培养培养24h24h。将培养物划线接种血琼脂平将培养物划线接种血琼脂平板板培养培养察菌察菌板，板，353522培